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丙二酸盐克罗诺杆菌rpoS基因突变株与回补株的构建
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作者 姚悦 叶应旺 +2 位作者 凌娜 王洋 李杨 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第5期673-677,共5页
丙二酸盐克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)在面对环境胁迫时,通过自身调节机制适应压力。rpoS基因作为一种稳定期σ因子和压力应答过程中的主要调节因子,在细菌抵抗或耐受环境胁迫压力中发挥重要作用。文章运用red同源重组技术和质... 丙二酸盐克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)在面对环境胁迫时,通过自身调节机制适应压力。rpoS基因作为一种稳定期σ因子和压力应答过程中的主要调节因子,在细菌抵抗或耐受环境胁迫压力中发挥重要作用。文章运用red同源重组技术和质粒表达系统,构建C.malonaticus G362的rpoS基因缺失株ΔrpoS和回补菌株ΔrpoS-com,为研究丙二酸盐克罗诺杆菌中rpoS基因的功能提供遗传材料。生长曲线测定结果表明,rpoS基因缺失未对正常培养条件下细菌生长产生显著影响。 展开更多
关键词 丙二酸盐克诺罗杆菌 同源重组 质粒表达 rpos基因
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细菌中RpoS蛋白的表达调控及其功能的研究进展 被引量:5
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作者 王淑娴 魏鉴腾 +1 位作者 李天保 杨秀生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期24-31,共8页
RpoS蛋白是RNA聚合酶的一种σ因子,能够调控一组特异性基因的表达,因此在细菌中发挥着至关重要的作用。在细菌中,RpoS蛋白的表达受到严格的控制,主要表现在3个水平的调控:转录水平,翻译水平和翻译后水平。环境应力作用通过信号传导进入... RpoS蛋白是RNA聚合酶的一种σ因子,能够调控一组特异性基因的表达,因此在细菌中发挥着至关重要的作用。在细菌中,RpoS蛋白的表达受到严格的控制,主要表现在3个水平的调控:转录水平,翻译水平和翻译后水平。环境应力作用通过信号传导进入细菌细胞内,引起一系列微环境的改变,进而引起调控子的变化。通过调控子与RpoS蛋白直接和间接的相互作用,达到控制其水平的目的。另外,由于RpoS蛋白在细菌中有特殊作用,因此RpoS蛋白水平的变化会引起众多基因表达水平的改变,从而引起细菌对不同环境应力应答的变化以及细菌的某些特性的改变,为今后细菌病害的防治提供了新的策略。综述了近年来对RpoS蛋白的表达调控以及在几种常见菌种中功能的研究进展,由于RpoS蛋白的功能的复杂性,仍有大量的未知功能有待进一步鉴定。 展开更多
关键词 rpos或σS rpos基因 表达调控 环境应力 rpos功能
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细菌中RpoS蛋白的表达调控及其功能的研究进展(英文) 被引量:2
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作者 王淑娴 李天保 +4 位作者 叶海斌 魏鉴腾 王勇强 刁菁 杨秀生 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第6期1215-1221,1225,共8页
RpoS蛋白是RNA聚合酶的一种因子,能够调控一组特异性基因的表达,因此在细菌中发挥着至关重要的作用。在细菌中,RpoS蛋白的表达受到严格的控制,主要表现在3个水平的调控:转录水平,翻译水平和翻译后水平环境应力作用通过信号传导进入细菌... RpoS蛋白是RNA聚合酶的一种因子,能够调控一组特异性基因的表达,因此在细菌中发挥着至关重要的作用。在细菌中,RpoS蛋白的表达受到严格的控制,主要表现在3个水平的调控:转录水平,翻译水平和翻译后水平环境应力作用通过信号传导进入细菌细胞内,引起一系列微环境的改变,进而引起调控子的变化。通过调控子与RpoS蛋白直接和间接的相互作用,达到控制其水平的目的。另外,由于RpoS蛋白在细菌中有特殊作用,因此RpoS蛋白水平的变化会引起众多基因表达水平的改变,从而引起细菌对不同环境应力应答的变化以及细菌的某些特性的改变,为今后细菌病害的防治提供了新的策略。该文综述了近年来对RpoS蛋白的表达调控以及在几种常见菌种中功能的研究进展,由于RpoS蛋白的功能的复杂性,仍有大量的未知功能有待进一步鉴定。 展开更多
关键词 rpos或σS rpos基因 表达调控 环境应力 rpos功能
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荧光假单胞菌M18的rpoS基因克隆及其功能分析 被引量:9
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作者 徐汪节 朱栋华 +1 位作者 张雪洪 许煜泉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期309-314,共6页
从荧光假单胞菌 (Pseudomonasfluorescentsp .)M1 8基因组中克隆了RNA聚合酶的稳定期σs 因子编码基因rpoS ,推测其氨基酸序列与铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的同源性分别为 99 1 %、87 35 %和87 8%。利用体外定点插入突... 从荧光假单胞菌 (Pseudomonasfluorescentsp .)M1 8基因组中克隆了RNA聚合酶的稳定期σs 因子编码基因rpoS ,推测其氨基酸序列与铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的同源性分别为 99 1 %、87 35 %和87 8%。利用体外定点插入突变和同源重组技术 ,构建了M1 8的rpoS突变株M1 8R- 。对突变株M1 8R- 合成抗生素吩嗪 1 羧酸 (PCA)和藤黄绿菌素 (Plt)的动力学分析结果表明 ,在KB或PPM培养基中 ,突变株合成PCA的能力比野生型分别提高了 2 5或 5 78倍 ,但Plt的积累量不受影响。与野生型相比 ,突变株对碳源饥饿的耐性下降。同时 ,在碳源饥饿条件下对过氧化氢、乙醇和和氯化钠等环境胁迫的交叉保护性减小 。 展开更多
关键词 荧光假单胞菌M18 rpos突变株 吩嗪-1-羧酸 藤黄绿菌素 环境胁迫
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rpoS对鳗弧菌MHK3株Hcp表达和杀菌能力的影响 被引量:3
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作者 王小鹿 李杰 +3 位作者 李贵阳 唐磊 杨慧超 莫照兰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2021年第6期125-134,共10页
溶血素共调节蛋白(Hcp)的合成和分泌是六型分泌系统(T6SS)行使功能的重要特征。RNA聚合酶的σ亚基RpoS参与调节细菌的生长和应激反应。为了探究RpoS对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)T6SS的调控作用,本研究构建了 MHK3ΔrpoS突变株,检测了... 溶血素共调节蛋白(Hcp)的合成和分泌是六型分泌系统(T6SS)行使功能的重要特征。RNA聚合酶的σ亚基RpoS参与调节细菌的生长和应激反应。为了探究RpoS对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)T6SS的调控作用,本研究构建了 MHK3ΔrpoS突变株,检测了部分表型特征的变化;利用lacZ半乳糖苷酶报告基因检测了突变株hcpl和hcp2在转录水平的变化;进行Western blot并定量分析突变株Hcp在翻译水平的变化;并通过细菌拮抗实验检测了突变株杀菌能力的变化。结果显示,MHK3ΔrpoS突变株的生长情况、泳动性、明胶酶活性及酪蛋白酶活性与MHK3野生株相比无显著差异(P>0.05),而平台早期的菌膜形成能力有显著上升(P<0.05);在各生长时期,MHK3ΔrpoS的hcpl和hcp2在转录水平的表达量均较MHK3有显著上升(P<0.01),最高时分别为MHK3的1.79倍和1.94倍;在翻译水平上,MHK3ΔrpoS在胞内和胞外Hcp的分泌均有显著升高(P<0.05),最高时分别为MHK3的1.59倍和1.31倍;同时,MHK3ΔrpoS对大肠杆菌(Escherichia coli) E5的杀菌能力约为MHK3的1%。研究表明,rpoS对鳗弧菌MHK3株的生长情况、泳动性、明胶酶活性及酪蛋白酶活性均无显著调控作用,但对平台早期的菌膜形成能力具有一定的负调控作用,在转录和翻译水平上也负调控Hcp的表达。而在杀菌能力上,rpoS发挥一定的正调控作用。说明菌株的杀菌能力强弱并非直接与Hcp的表达和分泌量正相关。本研究为进一步阐明T6SS的调控机制及其介导的杀菌作用机制提供了新思路,并丰富了其理论基础。 展开更多
关键词 鳗弧菌 rpos HCP T6SS 杀菌
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RpoN和RpoS参与细菌鞭毛合成与趋化调控的研究进展 被引量:3
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作者 刘晓东 吴港 +3 位作者 杨智敏 燕永亮 林敏 张云华 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第12期11-16,共6页
在自然界中,细菌需要靠趋化运动来趋利避害以获得有利的生存环境。鞭毛作为细菌的运动器官,是趋化的前提与基础,鞭毛的合成组装是一个高度有序、耗能的等级调控过程,每一等级的基因表达都需要多个调控因子参与。RpoN对鞭毛合成基因的表... 在自然界中,细菌需要靠趋化运动来趋利避害以获得有利的生存环境。鞭毛作为细菌的运动器官,是趋化的前提与基础,鞭毛的合成组装是一个高度有序、耗能的等级调控过程,每一等级的基因表达都需要多个调控因子参与。RpoN对鞭毛合成基因的表达为正调控,鞭毛调节子FleQ作为RpoN的激活增强子,与RpoN协同调控了鞭毛基因的转录与表达,相反,RpoS负调控包括鞭毛调控σ因子FliA在内的鞭毛合成基因的转录与表达,且rpoS基因的缺失导致鞭毛合成相关基因的转录水平显著上调。RpoS能够负调控诸多鞭毛基因的表达可能是通过调控鞭毛主调节子FleQ或鞭毛调控σ因子FliA来实现的;亦可能是由于RpoS和其他的σ因子竞争有限的核心聚合酶造成的。本文综述了细菌的鞭毛合成与趋化中不同σ因子之间存在复杂的交叉调控。 展开更多
关键词 RPON rpos 鞭毛 趋化 调控
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鼠伤寒沙门菌rpoS基因缺失菌株的构建及RpoS因子在环境胁迫下的作用 被引量:2
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作者 梁运改 桂萌 +3 位作者 王顺 刘密 张清 周康 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第6期141-147,共7页
鼠伤寒沙门菌在应对环境胁迫时,通过自身的调节机制适应环境,其中Rpo S因子在其中起着重要的作用。为研究Rpo S因子在环境胁迫下对鼠伤寒沙门菌的影响,本研究用Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门菌Salmonella typhimurium 1344的rpo S缺失... 鼠伤寒沙门菌在应对环境胁迫时,通过自身的调节机制适应环境,其中Rpo S因子在其中起着重要的作用。为研究Rpo S因子在环境胁迫下对鼠伤寒沙门菌的影响,本研究用Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门菌Salmonella typhimurium 1344的rpo S缺失菌株SL1344/Drpo S,并在不同条件下比较亲本菌株SL1344和基因缺失菌株SL1344/Drpo S的生长情况,这些条件分别为:3.5%NaCl、42℃、pH 4.0。此外本实验还重点研究了沙门菌在不同盐质量分数中预处理不同时间后置于含3.5%NaCl的培养基中培养的生长情况,以说明rpo S对于沙门菌在逆境中适应性的影响。结果表明在3.5%NaCl条件下,二者生长均受到较大的抑制作用,且SL1344/Drpo S受到的抑制作用更大,SL1344的最大生长速率为SL1344/Drpo S的2.49倍;在42℃条件下,SL1344的最大生长速率仅为SL1344/Drpo S的1.33倍,而在pH 4.0条件下,SL1344的最大生长速率为SL1344/Drpo S的2.77倍;此外,二者在不同盐质量分数中处理不同时间后的生长情况也存在差异。rpo S基因缺失菌株SL1344/Drpo S的构建为进一步研究Rpo S因子在鼠伤寒沙门菌应对环境胁迫的作用机制,以及为预防和控制由沙门菌导致的食源性疾患提供了理论支持。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 基因敲除 rpos 渗透压 温度 pH值
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大肠杆菌RNA分子伴侣Hfq与DsrA和rpoS作用机制的研究进展 被引量:1
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作者 王丽君 王维维 +2 位作者 龚庆国 吴季辉 施蕴渝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第7期627-633,共7页
RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然... RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然而,Hfq使用何种机制来促进sRNA和mRNA配对一直有两种并不互斥的模型存在:Hfq远侧和近侧两个表面同时结合sRNA和mRNA,使得两条RNA相互靠近,便于形成碱基配对;Hfq可能结合一条或者两条RNA,改变它们的二级结构或者三级结构,从而促进sRNA-mRNA配对的实现.最近的研究报道,成功在体外捕捉到了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物,测定了AU6A-Hfq-A7三元复合物的晶体结构,并且在大肠杆菌体内证实了三元复合物的形成对于Hfq帮助sRNA DsrA激活mRNA rpoS的翻译是重要的.本文以sRNA DsrA和mRNA rpoS为例综述了蛋白质Hfq与RNA的结合特性,同时也讨论了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物的存在对于研究sRNA介导的调控机制的一些启示. 展开更多
关键词 HFQ RNA分子伴侣 SRNA DSRA MRNA rpos Hfq-RNA复合物晶体结构 翻译激活
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鳗弧菌rpoS基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 马莉 陈吉祥 +2 位作者 刘瑞 魏鉴腾 姜荧安 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期133-137,共5页
鳗弧菌是海水鱼类弧菌病的重要病原,弧菌病的发生及流行与该菌在环境中的生存密切相关。RpoS因子是细菌RNA聚合酶的主要组成部分,能够调控细胞对不良环境的抵抗和适应能力。本文从鳗弧菌W-1基因组DNA扩增1 002 bp的特异性片段,序列分析... 鳗弧菌是海水鱼类弧菌病的重要病原,弧菌病的发生及流行与该菌在环境中的生存密切相关。RpoS因子是细菌RNA聚合酶的主要组成部分,能够调控细胞对不良环境的抵抗和适应能力。本文从鳗弧菌W-1基因组DNA扩增1 002 bp的特异性片段,序列分析表明含有完整的rpoS基因阅读框,编码333个氨基酸残基的蛋白质。与其他鳗弧菌菌株的rpoS基因序列相似性为100%,与霍乱弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、溶藻胶弧菌rpoS基因的序列相似性分别为78%,77%,77%,76%,75%,与大肠杆菌的序列相似性为71%。将该基因克隆于表达质粒pET-24d(+),在大肠杆菌中表达,用镍亲和层析柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的蛋白为单一条带,蛋白分子量约42 kDa,与理论分析值相近。研究结果为探索鳗弧菌对自然环境的适应及疾病发生机制提供了依据。 展开更多
关键词 鳗弧菌 rpos基因 克隆 表达 纯化
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细菌对胁迫应答因子RpoS的调控 被引量:4
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作者 吴晨紫 杨志伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期50-55,63,共7页
RpoS是细菌一般胁迫反应的主要调控因子,可以诱导RpoS表达的胁迫条件包括碳源和氮源饥饿、渗透压升高、低pH、温度升高等。在细菌体内,大量环境和细胞内信号参与RpoS的调控。这些调控可以发生在转录和翻译水平、降解过程以及活性调节等... RpoS是细菌一般胁迫反应的主要调控因子,可以诱导RpoS表达的胁迫条件包括碳源和氮源饥饿、渗透压升高、低pH、温度升高等。在细菌体内,大量环境和细胞内信号参与RpoS的调控。这些调控可以发生在转录和翻译水平、降解过程以及活性调节等方面,形成一个复杂的调控网络。RpoS调控机制的阐明对于了解胁迫条件下细菌响应机制具有重要意义。 展开更多
关键词 一般胁迫反应 Σ因子 rpos RssB 双组分系统
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假结核耶尔森氏菌rpoS基因的抗胁迫功能 被引量:3
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作者 关景元 宋云洪 +1 位作者 李长富 王瑶 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期291-297,共7页
为探讨食源性病原微生物假结核耶尔森氏菌的抗逆机制,采用同源重组原理进行双交换以获得rpoS基因突变株。分别在5mmol/L H_2O_2和pH 3.5两种胁迫下测定野生型菌株、rpoS基因突变株和互补菌株的存活率,并以2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DC... 为探讨食源性病原微生物假结核耶尔森氏菌的抗逆机制,采用同源重组原理进行双交换以获得rpoS基因突变株。分别在5mmol/L H_2O_2和pH 3.5两种胁迫下测定野生型菌株、rpoS基因突变株和互补菌株的存活率,并以2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)为荧光探针,测定两种胁迫下细菌胞内活性氧水平。结果显示,在5mmol/L H_2O_2和pH3.5胁迫下,假结核耶尔森氏菌rpoS基因突变株存活率明显降低,这种降低能够在互补菌株中得到恢复;突变株中胞内活性氧自由基水平明显高于野生型菌株和互补菌株。说明:rpoS基因具有帮助假结核耶尔森氏菌抗氧化胁迫和酸胁迫的功能,且这一功能的发挥是通过调节胞内活性氧水平实现的。 展开更多
关键词 假结核耶尔森氏菌 rpos基因 抗胁迫 活性氧水平
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普城沙雷氏菌rpoS基因的生物信息学分析
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作者 郭松 刘晓光 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2013年第6期485-488,492,共5页
目的:通过生物信息学方法对普城沙雷氏菌G3菌株rpoS基因的序列、理化性质和结构进行解析,为进一步研究生物学功能提供依据。方法:利用Expasy数据库分析蛋白质的理化性质;TMHMMServerv.2.0、TargetP 1.1Server和SignalP 4.1 Server预测... 目的:通过生物信息学方法对普城沙雷氏菌G3菌株rpoS基因的序列、理化性质和结构进行解析,为进一步研究生物学功能提供依据。方法:利用Expasy数据库分析蛋白质的理化性质;TMHMMServerv.2.0、TargetP 1.1Server和SignalP 4.1 Server预测跨膜结构和信号肽;分别用NetNGlyc 1.0Server和NetPhos 2.0预测磷酸化、糖基化位点;用SOPMA和SWISS-MODEL分别对蛋白质二级和三级结构进行预测;用MEGA 4 NJ法构建系统进化树。结果:RpoS是一个亲水性蛋白,没有跨膜区域和信号肽,有糖基化位点和高水平的磷酸化位点,α-螺旋和无规则卷曲是其主要二级结构。结论:生物信息学预测表明RpoS具有较高比例的磷酸化位点和由α-螺旋和无规则卷曲组成的二级结构,这与其整合和响应环境中不同的胁迫信号刺激,诱导一般胁迫反应使细菌在逆境中得以生存的生物学功能相吻合。 展开更多
关键词 普城沙雷氏菌 rpos 一般胁迫反应 主控基因 生物信息学
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防御假单胞菌FD6中RpoS蛋白理化性质预测及rpoS-lacZ转录融合结构构建
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作者 尹悦 孔祥伟 张清霞 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2019年第4期100-105,112,共7页
Sigma因子是一类依赖于DNA的RNA聚合酶亚基,在生防细菌中通常可调控抗生素的合成。防御假单胞菌(Pseudomonas protegens) FD6中rpoS基因编码的RpoS蛋白是一类非必需sigma因子。利用BPROM在线工具预测rpoS基因的启动子区,并用PCR技术将... Sigma因子是一类依赖于DNA的RNA聚合酶亚基,在生防细菌中通常可调控抗生素的合成。防御假单胞菌(Pseudomonas protegens) FD6中rpoS基因编码的RpoS蛋白是一类非必需sigma因子。利用BPROM在线工具预测rpoS基因的启动子区,并用PCR技术将其克隆到pRG970Km质粒中无启动子的lacZ基因上游,将构建的rpoS-lacZ转录融合质粒转化至菌株FD6中,为后续抗生素合成调控机制的探究提供重要的试验材料。此外,利用生物信息学方法分析P.protegens FD6中RpoS的功能,并通过邻接法构建RpoS的系统发育树。结果表明:FD6中RpoS蛋白分子量约为38 ku,理论等电点为5.14;具有多个磷酸化位点;无跨膜结构,且N端无信号肽;二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主。系统发育树结果显示, FD6中RpoS蛋白的氨基酸序列与防御假单胞菌Pf-5相似性最高,二者在系统发育树中位于同一分支。 展开更多
关键词 防御假单胞菌 rpos蛋白 转录融合结构 理化性质 生物信息学分析
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不依赖RpoS的鸡白痢沙门菌生物被膜形成相关基因鉴定 被引量:1
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作者 冯政 苏洋洋 +3 位作者 全柯吉 秦涛 陈素娟 彭大新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期613-620,共8页
为鉴定鸡白痢沙门菌生物被膜形成不依赖Rpo S的调控基因,以鸡白痢沙门菌S6702及其rpoS基因缺失株S6702ΔrpoS为母本,对S6702生物被膜状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7BF vs S7SBF)及S6702ΔrpoS浮游状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7SF... 为鉴定鸡白痢沙门菌生物被膜形成不依赖Rpo S的调控基因,以鸡白痢沙门菌S6702及其rpoS基因缺失株S6702ΔrpoS为母本,对S6702生物被膜状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7BF vs S7SBF)及S6702ΔrpoS浮游状态和S6702ΔrpoS生物被膜状态(S7SFY vs S7SBF)进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,构建基因缺失株并验证其生物被膜形成能力。结果显示,S7BF vs S7SBF组共鉴定出83个差异表达基因,S7SFY vs S7SBF组共鉴定出1984个差异表达基因,筛选出15个可能与生物被膜形成相关的基因。以STM2361和STM1703为靶标构建基因缺失株,结晶紫染色定量结果显示,STM2361不影响鸡白痢沙门菌生物被膜的形成,而STM1703缺失能增强鸡白痢沙门菌的生物被膜形成能力。本研究鉴定出不依赖RpoS的鸡白痢沙门菌生物被膜形成调控基因,丰富了鸡白痢沙门菌生物被膜调控的信息。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门菌 生物被膜 rpos 转录组分析
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rpoS基因插入突变对铜绿假单胞菌两个吩嗪合成基因簇的调控 被引量:3
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作者 周金凤 葛宜和 +3 位作者 刘婷 程显好 王磊 高兴喜 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期411-417,共7页
【目的】为了研究铜绿假单胞菌rpoS基因对吩嗪(Phenazine)合成基因簇phz1和phz2的调控方式与机制。【方法】采用抗庆大霉素基因(gentamycin resistance cassette,aacC1)插入失活的策略构建了rpoS基因突变株PA-SG;同时利用lacZ的翻译融... 【目的】为了研究铜绿假单胞菌rpoS基因对吩嗪(Phenazine)合成基因簇phz1和phz2的调控方式与机制。【方法】采用抗庆大霉素基因(gentamycin resistance cassette,aacC1)插入失活的策略构建了rpoS基因突变株PA-SG;同时利用lacZ的翻译融合表达载体pME6015,构建了phz1′-′lacZ和phz2′-′lacZ翻译融合表达载体pMEZ1和pMEZ2。采用电转化法分别将pMEZ1、pMEZ2和pME6015导入铜绿假单胞菌突变株PA-SG和野生株PAO1,用Miller法检测融合β-半乳糖苷酶活性。【结果】在KMB或PPM培养基中,pMEZ1在突变株PA-SG中的表达均增强,为野生株的4-5倍;而pMEZ2在突变株PA-SG中的表达均降低,野生株是突变株的2-3倍。【结论】由此推测,铜绿假单胞菌rpoS基因对两个不同吩嗪合成基因簇的调控作用具有特异性,在一定程度上,rpoS负调控phz1,正调控phz2。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 phz1 phz2 rpos 吩嗪
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肠炎沙门氏菌rpoS基因缺陷株的构建及其生长特性观察 被引量:2
16
作者 曾红亮 曾庆梅 +2 位作者 乔向欣 杨晋 刘坤 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第8期690-694,共5页
目的利用λ-red同源重组系统构建食源性肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)CICC21482rpoS基因缺陷株SE/⊿rpoS,观察其在胁迫环境中的生长特性,以探讨rpoS基因的生物学作用。方法通过PCR扩增两侧为肠炎沙门氏菌rpoS基因同源臂,中... 目的利用λ-red同源重组系统构建食源性肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)CICC21482rpoS基因缺陷株SE/⊿rpoS,观察其在胁迫环境中的生长特性,以探讨rpoS基因的生物学作用。方法通过PCR扩增两侧为肠炎沙门氏菌rpoS基因同源臂,中间为卡那霉素抗性基因(kmr)的打靶片段,再电击转入含质粒pkD46的肠炎沙门氏菌中,替换rpoS基因,筛选阳性转化子SE/⊿rpoS并用PCR法验证。结果成功构建了肠炎沙门氏菌rpoS基因缺陷株。在常规LB培养基中37℃培养的缺陷株和野生株生长曲线差异无统计学意义(P>0.05);SE/⊿rpoS菌株在45℃、2%NaCl和pH4.0应激条件下的生存能力较野生株弱(P<0.05)。结论成功构建SE/⊿rpoS基因缺陷株。该基因在肠炎沙门氏菌克服高温、高渗、酸应激时被诱导表达从而发挥作用。此结果为进一步研究rpoS基因在应激过程中的作用机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 λ-red重组系统 rpos基因 基因敲除 生长特性
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伤寒沙门菌rpoS基因缺陷变异株的生物学特性研究
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作者 杜鸿 周慧琴 朱雪明 《中华临床感染病杂志》 CAS 2010年第3期170-172,175,共4页
目的 研究rpoS基因在应激环境下的生物学作用,为临床预防和治疗伤寒沙门菌感染提供可能的靶基因.方法 利用原核生物基因同源重组技术制备伤寒沙门菌rpoS基因缺陷变异株.绘制生长曲线,对比rpoS基因缺陷变异株与野生株在等渗条件和酸应激... 目的 研究rpoS基因在应激环境下的生物学作用,为临床预防和治疗伤寒沙门菌感染提供可能的靶基因.方法 利用原核生物基因同源重组技术制备伤寒沙门菌rpoS基因缺陷变异株.绘制生长曲线,对比rpoS基因缺陷变异株与野生株在等渗条件和酸应激(pH 4.2)、高渗应激(NaCl 300 mmoL/L)、胆汁应激(脱氧胆酸钠终浓度为1.5 mmoL/L)及氧应激(1 mmol/L H2O2)条件下的生长能力,采用t检验进行统计学分析.结果 成功制备伤寒沙门菌rpoS基因缺陷变异株.与野生株相比,rpoS基因缺陷变异株在酸应激、高渗应激和氧应激条件下的生存能力明显降低(4 h时的t值分别为12.864、3.594和12.979,14 h时的t值分别为6.497、3.039和10.440,P值均〈0.05或〈0.01).结论 rpoS基因在伤寒沙门菌克服酸、高渗和氧应激时发挥着重要的作用,可以作为临床预防和治疗沙门菌感染的靶基因. 展开更多
关键词 沙门菌 伤寒 rpos基因 生长曲线 靶基因
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rpoS基因在肠杆菌CGMCC 5087响应环境胁迫中的功能 被引量:3
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作者 包文智 李兴 +2 位作者 张海波 峥嵘 刘丽娟 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期104-112,共9页
【背景】苯乙醇(2-Phenylethanol,2-PE)是一种具有玫瑰香气味的高级香料添加剂,被广泛应用于香水、化妆品、食品和医药等领域。目前,利用工程菌合成苯乙醇有很好的应用前景。我们分离到一株肠杆菌(Enterobacter sp.) CGMCC 5087,其可以... 【背景】苯乙醇(2-Phenylethanol,2-PE)是一种具有玫瑰香气味的高级香料添加剂,被广泛应用于香水、化妆品、食品和医药等领域。目前,利用工程菌合成苯乙醇有很好的应用前景。我们分离到一株肠杆菌(Enterobacter sp.) CGMCC 5087,其可以通过苯丙酮酸途径合成2-PE。然而该菌的生长受到不同环境因素导致的胁迫,进而影响苯乙醇的产量。RpoS作为一种稳定期σ因子和压力应答过程中的主要调节因子,在细菌抗环境胁迫生长中起重要作用。【目的】阐明肠杆菌CGMCC 5087中rpoS基因在多种环境胁迫中的作用,掌握该菌在不同环境胁迫下的生物学特性。【方法】使用CRISPR基因编辑技术敲除rpoS基因,通过质粒表达系统构建互补菌株,检测rpoS基因缺失株ΔrpoS与野生型WT菌株和互补菌株ΔrpoS(rpoS)在高渗透压、高温、低pH和氧化应激环境下的生长情况,并进行统计学分析。【结果】rpoS基因的缺失显著降低了肠杆菌CGMCC 5087的生长。在5%NaCl和pH 5.0胁迫条件下,rpoS基因的缺失导致肠杆菌CGMCC 5087的耐受性显著降低。在42℃高温条件下,rpoS基因的缺失导致肠杆菌CGMCC 5087在对数期的耐受性显著降低,而在衰退期的耐受性增强。1 mmol/L H2O2氧化胁迫条件下,rpoS基因的缺失导致肠杆菌CGMCC 5087的延滞期延长,而进入稳定期后rpoS基因突变株耐受性较野生型菌株明显增强。【结论】在肠杆菌CGMCC 5087中,RpoS在抵抗多种环境压力中均具有重要作用,而且在菌株不同的生长时期对于环境胁迫的应答也有所不同,为进一步了解肠杆菌CGMCC 5087的生物学特性、掌握RpoS在肠杆菌CGMCC 5087合成苯乙醇过程中的作用机制提供基础。 展开更多
关键词 肠杆菌CGMCC 5087 基因敲除 rpos基因 环境胁迫
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rpoS基因缺失突变对荧光假单胞菌胁迫耐受性、群体感应及腐败活性的影响 被引量:1
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作者 沈碧妙 吴淘栩 +3 位作者 朱俊杰 徐琳娜 刘小香 朱军莉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1563-1572,共10页
【目的】微生物活动是引起食品腐败的主要原因,研究食品腐败菌的腐败作用调控机制对于保证食品的质量和安全具有重要意义。荧光假单胞菌是一种代表性的食品腐败菌,本文旨在研究RNA聚合酶的选择性sigma因子Rpo S在荧光假单胞菌致腐败过... 【目的】微生物活动是引起食品腐败的主要原因,研究食品腐败菌的腐败作用调控机制对于保证食品的质量和安全具有重要意义。荧光假单胞菌是一种代表性的食品腐败菌,本文旨在研究RNA聚合酶的选择性sigma因子Rpo S在荧光假单胞菌致腐败过程中的作用。【方法】运用同源重组的方法构建荧光假单胞菌冷藏鱼分离株的rpo S基因缺失突变株,比较野生型和突变株暴露于不同胁迫条件下的存活率;通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析野生型和突变株产生高丝氨酸内酯类(AHLs)群体感应信号分子的种类和含量;检测野生型和突变株接种于灭菌三文鱼汁后4°C贮存过程中的菌落总数和挥发性盐基氮的生成量。【结果】成功构建了荧光假单胞菌rpo S基因缺失突变株。rpo S基因的缺失导致荧光假单胞菌对10 mmol/L H2O2和15%乙醇的耐受性显著降低,对150μg/m L结晶紫和175 mmol/L醋酸的耐受性有一定程度增强,不影响其对47°C和20%Na Cl的耐受性。荧光假单胞菌在rpo S基因缺失突变后长链信号分子C_(10)-HSL、C_(12)-HSL和C_(14)-HSL的含量增加。在灭菌三文鱼汁中的腐败活性检测表明rpo S基因缺失可导致荧光假单胞菌挥发性盐基氮的生成量显著降低。【结论】荧光假单胞菌的Rpo S不仅调节细菌对多种胁迫条件的耐受性,还影响AHL群体感应和腐败活性。 展开更多
关键词 rpos 荧光假单胞菌 耐受性 食品腐败 群体感应
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The rpoS deficiency suppresses acetate accumulation in glucose-enriched culture of Escherichia coli under an aerobic condition
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作者 Prayoga SURYADARMA Yoshihiro OJIMA Yuto FUKUDA Naohiro AKAMATSU Masahito TAYA 《Frontiers of Chemical Science and Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2012年第2期152-157,共6页
The role ofEscherichia coli rpoS on the central carbon metabolism was investigated through analyzing the deficiency of this regulon gene under aerobic and glucose- enriched culture conditions. The experimental results... The role ofEscherichia coli rpoS on the central carbon metabolism was investigated through analyzing the deficiency of this regulon gene under aerobic and glucose- enriched culture conditions. The experimental results showed that while the wild type cells exhibited an overflow metabolism effect, the rpoS-deleting mutation alleviated this effect with the significant suppression of acetate accumulation under a high glucose condition. This gene deletion also induced the twofold upregulation ofgltA and one-tenth downregulation of poxB, respectively. The overflow metabolism effect was confirmed to be recovered by re-introducing rpoS gene into the mutant. These results demonstrated rpoS changed the central carbon metabolism toward acetate overflow through dehydrogenation of pyruvate and reduction of TCA cycle activity. 展开更多
关键词 Escherichia coli rpos aerobic and glucoseenriched culture overflow metabolism
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