甜叶悬钩子苷对脊髓损伤小鼠运动功能障碍和神经炎症的改善作用及其机制

目的:探讨甜叶悬钩子苷(RUB)对小鼠脊髓损伤(SCI)和神经炎症的影响,并阐明其作用机制。方法:将48只雌性昆明小鼠随机分为假手术组、SCI组、SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组,每组12只;采用脊髓损伤行为学(BBB)评分法评估SCI小鼠后肢运动功能,脊髓组织含水量法检测SCI小鼠脊髓水肿情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠促炎细胞因子环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平,ELISA法检测各组小鼠血清中炎症因子水平,HE染色观察各组小鼠脊髓组织病理形态学,免疫荧光法检测各组小鼠脊髓组织中小胶质细胞活化情况,Western blotting法检测SCI小鼠脊髓组织中相关蛋白表达水平。结果:BBB评分,与假手术组比较,SCI组小鼠评分低至0分;与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠BBB评分逐步升高。脊髓组织含水量法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织含水量明显升高(P<0.01);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织含水量明显降低(P<0.01)。RT-qPCR法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中COX-2、IL-1β和TNF-αmRNA表达水平明显升高(P<0.001);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中COX-2、IL-1β和TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.001)。ELISA法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠血清中IL-1β(P<0.01)和TNF-α(P<0.001)水平升高;与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠血清中IL-1β和TNF-α水平降低(P<0.001);Western blotting法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中核因子κB(NF-κB)抑制因子α(IκB-α)、磷酸化IκB-α(p-IκB-α)、磷酸化p65(p-p65)、p-65、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.001);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中IκB-α、p-IκB-α、p-p65、p-65、p-p38、p-ERK和p-JNK蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。HE染色观察,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中可见组织疏松,有空泡形成,脊髓中间有一较大的坏死空洞区域;与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓中央坏死空洞区域明显减小(P<0.05)。免疫荧光法检测,与假手术组比较,SCI组小鼠脊髓组织中小胶质细胞阳性细胞数明显增加(P<0.001);与SCI组比较,SCI+低剂量RUB组和SCI+高剂量RUB组小鼠脊髓组织中小胶质细胞阳性细胞数明显减少(P<0.001)。结论:RUB可改善SCI小鼠运动功能障碍,减轻脊髓组织神经炎症,抑制小胶质细胞活化,其机制可能与下调脊髓组织中NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达有关。

甜茶的综合开发

简述了甜茶产品的加工工艺 ,并介绍了天然甜味剂 -甜茶甙的结构。

基于甜茶苷的漆黄素载药纳米胶束的制备及其抗结肠炎活性

制备基于两亲性甜茶苷的漆黄素载药纳米胶束(Fis/Rub胶束),以提高漆黄素的药代动力学特性和疾病治疗效果。采用薄膜分散法制备Fis/Rub胶束,并对其理化性质进行测定;采用亚铁还原能力实验检测Fis/Rub胶束的抗氧化活性;透析法和高效液相色谱法检测Fis/Rub胶束的体外释放能力;考察Fis/Rub胶束的药代动力学特性和体内抗结肠炎活性。所得Fis/Rub胶束的粒径为(7.6±1.2)nm,电位为(-3.86±0.43)mV。甜茶苷纳米胶束可有效包封漆黄素;提高漆黄素在水中的溶解度((19.12±0.84)mg·mL^(-1));改善漆黄素的体外释放;增强漆黄素的抗氧化活性。大鼠体内药物动力学结果显示,与漆黄素混悬液相比,Fis/Rub胶束可提高漆黄素的口服生物利用度达5.5倍。药效学研究表明,口服Fis/Rub胶束可有效改善硫酸葡聚糖盐(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗效果。Fis/Rub这一新型制剂改善了漆黄素水溶性差等不足,具有潜在的进一步开发研究和临床意义。

甜茶素对小鼠糖异生作用和血脂代谢的影响

目的 :研究甜茶素对小鼠糖异生作用和血脂代谢的影响。方法 :雄性昆明种小鼠22只 ,随机分为对照组和给药组。给药组小鼠每天灌胃甜茶素 ,对照组小鼠灌胃生理盐水。灌胃3周后 ,测小鼠的血清葡萄糖、血清甘油三酯、血清胆固醇及肝糖原等生化指标。结果 :甜茶素能降低正常小鼠血糖水平 ,降糖率为18.47 % ;其对小鼠糖异生具有明显的抑制作用 ,抑制率为17.32%。同时 ,甜茶素能明显降低血清甘油三酯水平 ,降低幅度为30.08% ;对胆固醇含量也有降低作用。结论 :甜茶素对小鼠血糖代谢的影响与控制糖异生途径有关。

反相高效液相色谱法测定广西甜茶中的甜茶素

甜茶素(rubusoside)是广西特产甜茶(RubussuavissimusS.Lee)中的主要甜味成分。采用反相高效液相色谱法测定了广西甜茶中的甜茶素。条件为:反相C18柱;甲醇 水(体积比为85∶15)溶液为流动相,流速1 0mL/min;紫外检测波长210nm;柱温20℃;外标法定量。结果表明:甜茶素的质量浓度为20～1200mg/L时,其峰面积与质量浓度具有良好的线性关系,相关系数为0 998。方法的检测限(S/N≥3)为5mg/L,峰面积测定值的相对标准偏差(RSD)为0 85%(n=8)。该方法对甜茶素工业品及甜茶原叶中甜茶素的平均回收率(n=3)分别为100 2%和104 9%。该方法快速简便,准确可靠,可用于甜茶产品质量的例行监测。

7份不同产地野生甜茶FTIR指纹图谱及其甜茶苷含量比较分析

本研究运用傅里叶变换红外光谱法,采集7份不同产地甜茶叶片的FTIR图谱,结合相关性系数和二阶导数方法对其红外光谱特征进行指认,并比较各供试甜茶的红外指纹图谱及甜茶苷含量间差异。研究结果表明,依据不同产地甜茶红外指纹图谱特征,可以将其归结为3大类Ⅰ类包括:金秀、荔浦、平南、象州及永福等地的甜茶,相关系数在0.992～0.999间;Ⅱ类包括第Ⅰ类型以外的广西其它采集地区的甜茶,相关性系数主要集中在0.984～0.990之间;Ⅲ类包括广东分布区,该区甜茶与广西分布区甜茶的相关系数均在0.986以下。供试甜茶与甜茶苷标准品的光谱特征比较结果表明,不同产地甜茶甜茶苷含量有较大差异。其中,广西金秀和广西平南产的甜茶叶片中甜茶苷含量最高,广西岑溪产的甜茶叶片中甜茶苷含量最低。所以,运用FTIR技术可以对不同产地甜茶进行分析并快速鉴别出不同产地甜茶中甜茶苷含量差异。本研究结果对广西地区甜茶的引种驯化和合理开发利用有一定指导意义。

甜茶化学成分及药理作用研究进展(英文)

甜茶是一种价值较高的天然保健饮料植物,其营养成分丰富,尤其富含甜茶素、茶多酚和黄酮等主要活性成分。综述了近年来甜茶化学成分及其药理作用的研究状况,以便于更深入的研究和更广泛的应用。

广西甜茶苷柱纯化工艺研究

以含70%的广西甜茶粗提取物为原料,通过柱纯化与重结晶对甜茶苷进行提纯,从而制备高纯度的甜茶苷单体。以聚酰胺和LSA-10大孔吸附树脂树脂为吸附剂乙醇为洗脱剂进行柱纯化。实验表明,比较聚酰胺与大孔吸附树脂的吸附与脱附能力,皆为后者强;比较不同吸附材料处理所得甜茶苷单体的纯度,则是聚酰胺所吸附的样纯度高,特别是25%乙醇的处理样。

甜茶素对棕榈酸诱导INS-1细胞超微结构及CytC易位表达的保护作用

目的:探索甜茶素对棕榈酸诱导INS-1细胞损伤的保护机制。方法:MTT法检测正常对照组、棕榈酸模型组、不同浓度甜茶素组细胞存活率,透射电镜观察各组细胞超微结构,免疫电镜观察各组细胞色素C的易位表达。结果:不同浓度甜茶素对棕榈酸诱导的INS-1细胞具有保护作用,超微结构保存较好;模型组细胞凋亡增多且超微结构损伤严重,Cyt C蛋白从线粒体释放入细胞质。结论:甜茶素可以提高棕榈酸诱导INS-1损伤的细胞存活率,抑制细胞凋亡的发生,其机制可能与抑制棕榈酸引起的氧化应激和阻碍Cyt C从线粒体转位入细胞质,激活细胞凋亡蛋白酶级联反应有关。

甜茶素提取物对STZ致高血糖大鼠的降血糖作用研究

目的 : 研究甜茶素提取物对 STZ致高血糖大鼠的降血糖效果及其降糖机制。方法 : 腹腔注射 STZ制备糖尿病大鼠模型 ,取成型的大鼠随机分阳性对照组、甜茶素提取物组和降糖灵组。同时设一正常组。灌胃 3 w后 ,测血糖、果糖胺、胰岛素和 SOD等指标。结果 : 甜茶素提取物能极显著地降低 STZ致高血糖大鼠血糖 ,增强其抗氧化能力 ,同时能刺激胰岛素的分泌。结论

甜茶素加工副产物的抗氧化、抗过敏活性研究

对甜茶素加工副产物进行成分分析及活性研究,分析加工副产物中的甜茶素、总黄酮以及总酚含量,并测定甜茶素纯品以及副产物的抗氧化、抗过敏活性,抗氧化活性评价指标为:还原能力、OH.自由基及DPPH.自由基清除能力,抗过敏活性评价指标为:透明质酸酶抑制能力。结果表明:甜茶素加工副产物具有强抗氧化、抗过敏活性,其总酚含量达75.34%,回收率52.48%,不含甜茶素;SPSS相关性分析表明,甜茶的抗氧化、抗过敏活性与副产物中多酚含量存在极显著相关性,与甜茶素含量无显著相关性。

广西瑶山甜茶质量控制研究

目的:控制广西瑶山甜茶的质量。方法:对广西瑶山甜茶进行性状观察、显微与理化鉴定、TLC鉴别、水分等的检查和浸出物测定,并用HPLC法对其所含主要甜味成分甜茶素进行含量测定。结果:实验测定得到广西瑶山甜茶质量控制的各项指标。结论:该实验方法可行,重复性良好,能有效地控制广西瑶山甜茶药材的质量。

甜叶悬钩子苷通过NF-κB和MAPK信号通路抑制小鼠神经炎症细胞模型炎症反应

目的:通过体外实验探究甜叶悬钩子苷(RUB)对脂多糖(LPS)诱导小鼠BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及改善机制。方法:采用CCK-8法检测RUB对BV-2细胞活力的影响;使用LPS诱导BV-2小胶质细胞建立神经炎症细胞模型,用不同浓度RUB进行干预,将BV-2细胞分为对照组、LPS模型组及LPS+RUB(25、50和100µmol/L)干预组,采用ELISA法检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;RTqPCR法检测促炎细胞因子环加氧酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平;Western blot法检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白的表达;免疫荧光染色观察细胞中p65的表达情况。结果:与对照组相比,LPS诱导后细胞上清液中IL-1β和TNF-α的分泌量增加(P<0.01),促炎细胞因子COX-2、iNOS、IL-1β和TNF-α的mRNA水平显著增加(P<0.01),NF-κB和MAPK信号通路蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01),且p65出现荧光强度增加(P<0.05);与LPS模型组相比,LPS+RUB(25、50和100µmol/L)干预组中,IL-1β和TNF-α的分泌量减少(P<0.05或P<0.01),促炎细胞因子COX-2、iNOS、IL-1β和TNF-α的mRNA水平降低(P<0.05或P<0.01),p-p65、p-IκBα、p-ERK、p-p38和p-JNK蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01),同时p65荧光减弱(P<0.05)。结论:体外实验表明RUB能够通过抑制NF-κB和MAPK信号通路的活化减轻小鼠神经炎症细胞模型炎症反应。

高纯度甜茶甙的制备

以甜茶叶为原料,经水提、柱层析、重结晶等手段,制备出单体,并对其用熔点、TLC、液相色谱进行纯度检测,红外光谱、核磁共振进行结构表征,表明该化合物为甜茶甙。

甜茶苷和甜茶多酚同时提取工艺优化

采用响应面法优化以水为溶剂同时提取广西甜茶干叶中的甜茶苷和甜茶多酚的工艺。利用Box-Behnken响应面分析法,以甜茶苷提取率和甜茶多酚提取率为响应值,优化了同时提取甜茶苷和甜茶多酚的最佳工艺为:提取温度57℃,液料比为25∶1 mL/g,提取时间为36 min,在此条件下,甜茶多酚提取率为85.32%(RSD=1.42%,n=3),甜茶苷的提取率为83.58%(RSD=2.24%,n=3)。该研究结果为甜茶叶的综合利用提供了实验依据。

制备色谱法在纯化甜茶苷工艺中的应用

研究了从甜茶叶中纯化甜茶苷的制备工艺。首先用沸水从甜茶叶中提取甜茶苷,提取3次,每次1 h。再利用HP-20大孔吸附树脂对甜茶苷粗提物进行预纯化,以90%乙醇为洗脱液,洗脱6倍柱体积;浓缩去除乙醇后,用D-941阴离子交换树脂脱色,水洗并干燥得到甜茶苷粗产品,纯度为68.6%。最后甜茶苷粗产品经制备色谱纯化后,得到纯度为97.9%的甜茶苷,色谱条件为流动相V甲醇∶V水=70∶30,流速10 mL/min,上样量200 mg。

甜茶素对照品制备方法的研究

【目的】建立从甜茶叶中制备甜茶素对照品的方法,获得符合要求的甜茶素对照品。【方法】利用大孔树脂吸附、重结晶和液相色谱法对甜茶叶的水提取物——甜茶素进行分离、纯化结晶,然后采用薄层色谱法和高效液相色谱法对甜茶素进行纯度检查,并通过UV,IR,MS,NMR等对其进行结构鉴定。【结果】从甜茶叶水提取物中分离、纯化结晶出甜茶素对照品,质量分数W>99.0%。【结论】建立的制备方法简单可行,所得到的甜茶素对照品符合中药化学对照品的相关要求,可作为甜茶叶及其相关制剂的质量控制用化学对照品。

高效液相色谱法测定发酵乳中甜菊糖苷

通过优化色谱条件和样品前处理条件,建立测定发酵乳中甜菊糖苷(包括甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷)的高效液相色谱法,并进行方法学验证。用水提取发酵乳中甜菊糖苷,45℃水浴超声提取20 min,再加入30%的乙腈继续在45℃水浴超声提取10 min,亚铁氰化钾-乙酸锌沉淀剂沉淀蛋白,C18柱分离,磷酸钠缓冲液和乙腈梯度洗脱,紫外检测器在210 nm波长处检测。结果表明:本方法在1~50μg/mL质量浓度范围内有较好的线性关系,方法检出限(RS/N=3)为3.0 mg/kg,定量限(RS/N=10)为10.0 mg/kg;当甜菊糖苷的添加量在15~200 mg/kg时,加标回收率为92.0%~103.1%,相对标准偏差小于3.0%。该方法具有快速、准确、稳定性好、灵敏度高等优点,可用于发酵乳中甜菊糖苷含量的检测。

甜茶饮片质量标准研究

目的:建立甜茶饮片的质量标准。方法:参照2020年版《中国药典》(四部)附录中规定的方法,对不同产地的10批甜茶饮片进行性状、显微及薄层鉴别,并对水分、灰分、浸出物和甜茶苷含量进行测定。结果:甜茶饮片各鉴别方法专属性强,其水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物及甜茶苷的含量分别为9.52%~11.72%、4.63%~5.61%、0.07%~0.19%、36.27%~39.02%及3.06%~5.13%。初步拟定甜茶饮片的水分不得高于14.0%,总灰分不得高于7.0%,酸不溶性灰分不得高于0.23%,水溶性浸出物不得低于29.0%,甜茶苷不得低于2.5%。结论:建立的甜茶饮片质量标准稳定、可靠,可用于甜茶饮片的质量控制。

甜茶苷的酶法制备及其对肝肠胃细胞的抑制作用

甜茶苷是一种自然界中含量稀少的甜味剂。本实验从多种糖苷酶中筛选出一种来自Aspergillus niger的β-葡萄糖苷酶,用以特异性水解斯替夫苷而高通量制备甜茶苷。最适条件下反应12 h后,甜茶苷的产率为90.4%,斯替夫苷的转化率达98.8%。为了进一步考察甜茶苷的安全性并拓展其潜在的用途,实验考察了甜茶苷对人胃肠道和肝脏细胞的细胞毒性,即甜茶苷对3种正常细胞以及11种癌细胞生长的抑制效果。实验结果表明,在250μg/mL的质量浓度下,甜茶苷对正常人胃肠肝细胞无毒性;相同质量浓度下,甜茶苷对人体肝癌细胞BEL-7404的抑制率是5-氟尿嘧啶的30%。