长链非编码核糖核酸KCNQ1重叠转录物1、Runt相关转录因子3与急性心肌梗死的关系

目的 探讨急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者血清长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(long non-coding RNA KCNQ1 overlapping transcript 1,lncRNA KCNQ1OT1)、Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,Runx3)表达水平及意义。方法 选取2019年1月至2020年4月在德阳市人民医院住院治疗的231例AMI患者为研究对象(AMI组),AMI患者按美国纽约心脏病协会心功能分级标准分为Ⅱ级组72例、Ⅲ级组81例、Ⅳ级组78例;同期选取229例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,fqRT-PCR)法检测血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes,CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cardiac troponin,cTn)I、肌红蛋白(myoglobin,MYO)浓度;超声心动图检查左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVESD);分析AMI患者血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平与心功能指标的相关性;分析血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平对AMI的诊断价值;分析影响AMI发生的因素。结果AMI组患者lncRNA KCNQ1OT1(1.54±0.36 vs. 1.01±0.26)、LVESD[(52.68±6.74)mm vs.(42.73±6.52)mm]、LVEDD[(61.79±6.03)mm vs.(51.62±5.32)mm]、NT-proBNP[(292.23±34.27)ng/L vs.(96.27±23.42)ng/L]、CK[(746.82±210.55)U/L vs.(70.32±15.48)U/L]、CK-MB[(156.95±49.87)U/L vs.(1.25±0.37)U/L]、cTnI[(27.48±7.92)ng/mL vs.(1.13±0.26)ng/mL]、MYO[(678.94±159.78)ng/mL vs.(12.45±2.73)ng/mL]浓度高于对照组,Runx3(0.67±0.20 vs.1.02±0.24)、LVEF(43.26%±4.31%vs. 56.38%±5.12%)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心功能Ⅳ级组lncRNA KCNQ1OT1、LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO高于Ⅲ级组和Ⅱ级组,Runx3、LVEF低于Ⅲ级组和Ⅱ级组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ级组lncRNA KCNQ1OT1、LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO高于Ⅱ级组,Runx3、LVEF低于Ⅱ级组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3表达水平与病变支数、Gensini积分有关,且随着病变支数、Gensini积分增加,lncRNA KCNQ1OT1表达水平升高、Runx3表达水平降低(P<0.05)。AMI患者血清lncRNA KCNQ1OT1与Runx3表达水平呈负相关(r=-0.584;P<0.05);lncRNA KCNQ1OT1与LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO呈正相关,与LVEF呈负相关(P<0.05);Runx3与LVESD、LVEDD、NT-proBNP、CK、CK-MB、cTnI、MYO呈负相关,与LVEF呈正相关(P<0.05)。血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3水平诊断AMI的曲线下面积(AUC)分别为0.859、0.743,特异度分别为81.6%、74.7%,敏感度分别为76.1%、78.3%;两者联合诊断的曲线下面积为0.901,特异度为92.0%,敏感度为73.9%。lncRNA KCNQ1OT1是影响AMI发生的独立危险因素(P<0.05),Runx3是影响AMI发生的保护因素(P<0.05)。结论 血清lncRNA KCNQ1OT1、Runx3参与AMI的发生、发展,二者表达水平对AMI的诊断可能具有重要意义。

活动性肺结核患者血清ATG3和FOXO3水平变化对患者病情进展及预后评估的相关性分析

目的分析活动性肺结核患者血清中自噬相关基因3(ATG3)和叉头转录因子O亚型3(FOXO3)表达水平变化以及与患者病情进展及预后的关系。方法以2019年9月~2022年9月于本院就诊的91例活动性肺结核患者(观察组)为研究对象,另选取同时期于本院体检的91例健康体检者作为对照组;酶联免疫吸附法检测血清中ATG3和FOXO3表达水平;利用Spearman相关分析活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度之间的相关性;采用Logistic回归分析影响活动性肺结核患者预后的因素;采用ROC曲线分析血清中ATG3和FOXO3表达水平对活动性肺结核患者预后评估的价值。结果与对照组相比,观察组血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与轻症组相比,重症组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与预后不良组相比,预后良好组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著升高(P<0.05);预后良好组与预后不良组患者ESR、PCT、CRP、TNF-α、INF-γ和IL-2相比差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度呈负相关(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,ESR、CRP、ATG3和FOXO3为影响活动性肺结核患者预后不良的因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清中ATG3和FOXO3表达水平联合预测活动性肺结核患者预后较ATG3和FOXO3单一指标预测效果更优(P<0.05)。结论活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降,且与活动性肺结核病情严重程度相关,二者联合对活动性肺结核患者预后具有较高的评估价值。

三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3及JAM-A表达变化及与疾病预后的相关性分析

目的探讨三阴性乳腺癌患者癌组织中Runt相关转录因子3(RUNX3)及连接黏附分子A(JAMA)表达变化及与疾病预后的相关性。方法选取2016年1月至2018年3月在新疆维吾尔自治区人民医院确诊的三阴性乳腺癌患者60例作为研究对象,收集患者乳腺癌组织及癌旁组织,通过实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附试验检测并对比癌组织、癌旁组织中RUNX3、JAM-A转录水平及蛋白水平。对比不同临床病理特征三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3及JAM-A转录水平及蛋白水平。采用Spearman相关性分析三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3、JAM-A表达与患者不良预后的相关性。结果三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3转录水平显著低于癌旁组织,JAM-A转录水平显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3蛋白水平显著低于癌旁组织,JAM-A蛋白水平显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期及淋巴结转移情况的三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3及JAM-A转录水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期及淋巴结转移情况的三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3及JAM-A蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析表明,三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3转录水平及蛋白水平与不良预后呈负相关,JAM-A转录水平及蛋白水平与不良预后呈正相关(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌患者癌组织中RUNX3表达显著下调、JAM-A表达显著上调,且与患者预后均存在一定相关性,RUNX3及JAM-A可能是三阴性乳腺癌发生、发展过程中的重要调控因子。

RUNX3 mRNA、IFN-γ、IgE水平检测在毛细支气管炎患儿中的临床意义

目的分析runt相关转录因子3(RUNX3)mRNA、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白E(IgE)水平检测在毛细支气管炎患儿中的临床意义。方法选取2019年3月至2022年1月在该院诊治的104例毛细支气管炎患儿作为观察组(轻度28例、中度52例、重度24例),另选取同期体检健康的57例婴幼儿作为对照组。采用荧光定量PCR检测RUNX3 mRNA水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IFN-γ、IgE水平。比较两组RUNX3 mRNA、IFN-γ、IgE水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估RUNX3 mRNA、IFN-γ、IgE水平对小儿毛细支气管炎的诊断价值,比较不同病情程度患儿RUNX3 mRNA、IFN-γ、IgE水平,采用Spearman相关分析RUNX3 mRNA、IFN-γ、IgE水平与病情程度的相关性。结果与对照组相比,观察组RUNX3 mRNA、IFN-γ水平明显较低,IgE水平明显较高,差异均有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,RUNX3 mRNA、IFN-γ、IgE诊断小儿毛细支气管炎的曲线下面积(AUC)分别为0.731(95%CI:0.655~0.797)、0.850(95%CI:0.780~0.901)、0.867(95%CI:0.805~0.915)。不同程度毛细支气管炎患儿RUNX3 mRNA、IFN-γ水平表现为轻度组>中度组>重度组,IgE水平表现为轻度组<中度组<重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,RUNX3 mRNA、IFN-γ水平与病情程度呈负相关(r=-0.618、-0.547,P<0.001),IgE水平与病情程度呈正相关(r=0.574,P<0.001)。结论RUNX3 mRNA、IFN-γ、IgE水平对小儿毛细支气管炎有较好的诊断价值,且与病情程度有相关性,对毛细支气管炎的早期诊断、病情进展有一定的评估作用。

氧化应激对膀胱癌中抑癌基因人runt相关转录因子3的影响

目的研究外源性活性氧过氧化氢(H2O2)诱导的氧化应激对膀胱癌中抑癌基因人runt相关转录因子3(RUNX3)表达和启动子区甲基化状态的影响。方法将膀胱癌HT1197细胞株分为H2O2组、H2O2+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、H2O2+5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-Aza-dC)组和空白对照组。采用Western印迹法检测H2O2作用下NAC、5-Aza-dC对细胞RUNX3蛋白表达的影响,甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测H2O2作用下NAC、5-Aza-dC对细胞RUNX3启动子甲基化状态的影响,Western印迹法检测H2O2处理对DNA甲基转移酶1(DNMT1)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白表达的影响,平板克隆形成实验检测H2O2处理对细胞克隆形成能力的影响。结果 H2O2组处理HT1197细胞株48h后的RUNX3蛋白表达水平显著低于空白对照组(P<0.05);而H2O2+NAC组、H2O2+5-Aza-dC组随着H2O2处理时间的增加RUNX3蛋白表达无明显变化,与空白对照组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。H2O2组细胞RUNX3基因启动子区域发生甲基化,H2O2+NAC组和H2O2+5-Aza-dC组细胞发生部分甲基化,而空白对照组细胞RUNX3基因启动子区域未发生甲基化。使用H2O2处理膀胱癌细胞株48h后,H2O2组HT1197细胞中HDAC1和DNMT1蛋白表达均显著高于空白对照组(P值均<0.05)。H2O2组细胞形成的克隆体积较大、数量较多,其克隆形成率显著高于空白对照组(P<0.05)。结论外源性活性氧H2O2能促进膀胱癌细胞生长并影响RUNX3启动子区甲基化状态和表达,用抗氧化剂NAC或去甲基化制剂5-Aza-dC能逆转RUNX3启动子区甲基化并恢复其表达。提示外源性活性氧H2O2造成的膀胱癌细胞氧化应激很可能是膀胱癌细胞株中抑癌基因RUNX3启动子区异常甲基化、表达下调的主要原因。

沉默Runt相关转录因子3对骨肉瘤细胞恶性程度的影响

目的探讨沉默Runt相关转录因子3(RUNX3)对骨肉瘤细胞增殖能力及血管新生能力的影响。方法培养骨肉瘤HEK293细胞株并将其分为NC组和RUNX3组,分别转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)和RUNX3-siRNA。于转染siRNA后6、12、24、48 h采用MTS试剂盒测定细胞增殖活力;转染siRNA后24、48 h采用荧光定量PCR试剂盒测定细胞中增殖分子β-链蛋白、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达量,采用ELISA试剂盒测定细胞培养基中血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(b FGF)、促血管生成素-2(Ang-2)的含量。结果转染siRNA后6、12、24、48 h RUNX3组的细胞增殖活力值均高于NC组(0.78±0.11vs.0.57±0.09,0.99±0.14 vs.0.73±0.10,1.31±0.18 vs.0.81±0.12,1.72±0.26 vs.0.98±0.14,P均<0.05);转染siRNA后24、48 h RUNX3组细胞中β-链蛋白、Cyclin D1、PCNA的mRNA表达量以及细胞培养基中VEGF、b FGF、Ang-2的含量均高于NC组(P均<0.05)。结论沉默RUNX3能够增强骨肉瘤细胞的增殖能力及血管新生能力。

维生素D辅助治疗对重症毛细支气管炎患儿runt相关转录因子3及Th17/Treg相关细胞因子影响观察

目的:观察维生素D辅助治疗对重症毛细支气管炎患儿runt相关转录因子3(Runx3)及Th17/Treg相关细胞因子的影响。方法:104例重症毛细支气管炎患儿随机分为常规治疗组和维生素D治疗组各52例。常规治疗组给予利巴韦林和布地奈德治疗,维生素D治疗组在常规治疗组基础上加用维生素D,两组均连续治疗14 d。比较两组临床疗效,以及两组患儿治疗前后外周血单核细胞(PBMC)中Runx3 mRNA的表达情况,Th17/Treg、血清中1,25-(OH)2-D3、IL-6、IL-8水平及T淋巴亚群细胞水平变化。结果:两组临床总有效率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组患儿PBMC中Runx3 mRNA表达水平和Treg比例均较治疗前明显升高,外周血CD3+、CD3+CD4+ T细胞浓度及CD4+/CD8+均较治疗前增加,Th17比例、Th17/Treg及血清IL-6、IL-8水平均较治疗前降低(P<0.05);且维生素D治疗组上述指标均优于常规治疗组(P<0.05)。治疗后维生素D治疗组的血清1,25-(OH)2-D3水平较治疗前明显升高,且高于常规治疗组(P<0.05)。结论:在常规治疗基础上外源性补充维生素D可更有效地改善重症毛细支气管炎患儿Th17/Treg失衡,增强患儿PBMC中Runx3 mRNA的表达,提高机体免疫功能,减轻炎症反应。

转化生长因子β_1与人类Runt相关转录因子3在结肠癌中的表达及其两者表达的相关性研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)与人类Runt相关转录因子3(Runx3)在结肠癌中的表达及其两者表达的相关性。方法收集2011年1月至2013年12月安岳县人民医院收治的结肠癌患者34例、结肠腺瘤性息肉患者34例标本以及正常体检的34例结肠黏膜标本,通过免疫组织化学SP法检测Runx3、TGF-β1的表达,分析Runx3与TGF-β1在结肠癌中的相关性。结果 Runx3在结肠癌组织中表达阳性率最低(17.7%,6/34),与结肠黏膜和结肠息肉组织比较差异均有统计学意义(P<0.01)。TGF-β1在结肠癌组织中的阳性表达率为88.3%(30/34),显著高于结肠息肉和结肠黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。结肠癌中TGF-β1与Runx3表达呈负相关(rs=-0.46,P<0.05)。结论 Runx3及TGF-β1在不同结肠组织中表达差异明显,在结肠癌组织中表达有相关性,检测Runx3和TGF-β1可能为结肠癌早期诊断提供一定依据。

口腔黏膜癌变过程中Runt相关转录因子3的表达研究

目的研究Runt相关转录因子3(runt-related transcription factor3,RUNX3)在口腔黏膜癌变过程中的表达。方法应用免疫组织化学技术分析了临床收集的10例口腔正常黏膜组织、40例口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)、150例口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织及对应癌旁组织中RUNX3的表达。统计分析了RUNX3的表达与性别、年龄、病损部位、组织病理分型等临床病理参数之间的关系。结果免疫组织化学染色结果显示10例口腔正常黏膜组织中RUNX3的表达皆为强阳性,且主要在细胞核内;4例OLK中RUNX3蛋白呈单纯胞浆表达,2例RUNX3蛋白表达缺失,其余34例OLK中RUNX3蛋白的表达跟正常组织中的表达情况一致;150例OSCC组织中有22例(14.7%)呈现细胞核表达阳性,45例(30.0%)RUNX3蛋白呈单纯胞浆表达,83例(55.3%)RUNX3蛋白呈现表达下调或表达缺失;RUNX3表达下调(P=0.001)和蛋白错位(P=0.001)皆与肿瘤的分化程度相关且具有统计学意义。结论口腔黏膜癌变过程中RUNX3的表达下调和蛋白的错位表达是一种常发事件,且可以发生在癌变的早期阶段。

口腔鳞状细胞癌Runt相关转录因子3启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的研究口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中Runt相关转录因子3(runt-relatedtranscription factor 3,RUNX3)基因启动子区的甲基化状态与其表达及病理参数之间的相关性。方法应用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术分析10例口腔正常黏膜组织和30例OSCC组织中RUNX3 mRNA和蛋白的表达;应用甲基化特异性聚合酶链反应分析10例口腔正常黏膜组织和30例OSCC组织及其相应癌旁组织中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态;分析RUNX3启动子区甲基化及表达与临床病理参数之间的关系。结果 30例OSCC组织中,73.3%(22/30)呈现mRNA以及蛋白表达下调或缺失。30例OSCC组织及对应癌旁组织中CpG岛甲基化检出率分别为70.0%(21/30)和55.3%(16/30),两者之间差异无统计学意义(P=0.184)。统计学分析表明RUNX3的表达与其启动子区CpG岛高甲基化呈显著负相关(P=0.001),但发现其甲基化状态与临床病例参数间的关系无统计学意义。结论 OSCC中RUNX3的表达下调或缺失是一种常发事件,启动子区CpG岛高甲基化是其主要的失活机制,且后者可以发生在癌变的早期阶段。

抑癌基因Runt相关转录因子3在胃癌中的表达及其与临床病理学因素的关系

目的探讨胃癌组织中Runt相关转录因子3(Runx3)基因的表达情况及其与胃癌临床病理学因素的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法分别检测52例胃癌组织和配对的正常胃黏膜组织中Runx3 mRNA以及蛋白的表达水平,并分析Runx3表达与胃癌临床病理学因素的关系。结果59.6%(31/52)的胃癌组织出现Runx3 mRNA表达缺失,48.1%(25/52)出现Runx3蛋白表达缺失,其缺失率均明显高于对应的正常胃黏膜组织(P<0.05)。Runx3的表达缺失与肿瘤大小、组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05,P<0.01)。Runx3 mRNA表达与蛋白表达呈正相关(r=0.840,P<0.01)。结论Runx3基因与胃癌的发生、发展密切相关,有望成为胃癌诊断和治疗的新靶点。

runt相关转录因子3在毛细支气管炎患儿中的表达及临床意义

目的研究毛细支气管炎患儿runt相关转录因子3(RUNX3)mRNA水平,评估其在毛细支气管炎中的临床意义。方法选取54例毛细支气管炎患儿为毛细支气管炎组,其中有特应性体质患儿28例为特应性毛细支气管炎组,非特应性体质患儿26例为非特应性毛细支气管炎组;另选取健康婴幼儿48例为健康对照组,其中有特应性体质婴幼儿24例为特应性健康对照组,非特应性体质婴幼儿24例为非特应性健康对照组。荧光定量PCR法测定外周血单个核细胞中RUNX3 mRNA水平,ELISA法检测血清IL-4和IFN-γ浓度。结果毛细支气管炎组RUNX3 mRNA水平显著低于健康对照组,其中特应性毛细支气管炎组RUNX3 mRNA水平显著低于非特应性毛细支气管炎组、特应性健康对照组和非特应性健康对照组(P < 0.05);毛细支气管炎组血清IL-4浓度显著高于健康对照组,其中特应性毛细支气管炎组显著高于非特应性健康对照组(P < 0.05);毛细支气管炎组血清IFN-γ浓度显著低于健康对照组,其中特应性毛细支气管炎组显著低于非特应性毛细支气管炎组、特应性健康对照组和非特应性健康对照组(P < 0.05);相关性分析显示RUNX3 mRNA水平与血清IL-4浓度呈负相关,与血清IFN-γ浓度呈正相关(P < 0.05)。结论外周血单个核细胞中RUNX3基因表达量的检测对甄别毛细支气管炎中有特应性体质的哮喘高危儿具有一定临床价值。

Runt相关转录因子3 mRNA在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的检测口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中Runt相关转录因子3(runt-relatedtranscription factor 3,RUNX3)mRNA的表达。方法应用逆转录聚合酶链反应分析临床收集的10例口腔正常黏膜组织和30例OSCC组织中RUNX3 mRNA的表达及其与组织病理分型之间的关系。结果 OSCC组织中RUNX3 mRNA表达水平较正常口腔黏膜组织明显下调。30例OSCC标本中73.3%(22/30)的病例呈现表达下调或缺失,且与肿瘤的分化程度呈负相关(P=0.001)。结论 OSCC中RUNX3 mRNA的表达下调或缺失是一种常发事件。

人Runt相关转录因子3、zeste基因增强子同源物2蛋白表达与局部进展期直肠癌新辅助化疗敏感性的关系

目的探究人Runt相关转录因子3(RUNX3)和zeste基因增强子同源物2(EZH2)在直肠癌中的表达情况和相关性,探究RUNX3和EZH2蛋白表达与局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗敏感性的关系。方法31例术前未经抗肿瘤治疗的直肠腺癌患者的癌组织和癌旁组织作为癌组和癌旁组,实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应检测两组中RUNX3和EZH2 mRNA相对表达量,同时采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析RUNX3和EZH2在癌组织和癌旁组织中的表达差异;将26例术前行3周期XELOX方案新辅助化疗的局部进展期直肠癌患者的治疗前活检蜡块作为治疗前组,其术后病理蜡块作为治疗后组,病理肿瘤缩退学分级评估患者新辅助化疗疗效,采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析两基因蛋白表达模式与新辅助化疗疗效的关系。结果与癌旁组相比,癌组RUNX3 mRNA的表达下调,蛋白的阳性表达率降低(P=0.001),EZH2 mRNA的表达上调,蛋白的阳性表达率升高(P=0.022);癌组中RUNX3和EZH2的mRNA表达呈负相关(r=-0.599,P=0.000);12例接受新辅助化疗的患者达到TRG0~TRG2级,新辅助化疗总体有效率为46.15%(12/26);与治疗前组相比,治疗后组RUNX3蛋白阳性表达率有上升趋势,但差异无统计学意义(P=0.163),EZH2蛋白阳性表达率有下降趋势,但差异无统计学意义(P=0.095);治疗前组RUNX3阳性表达的患者新辅助化疗有效率为75.00%(9/12),EZH2阴性表达的患者新辅助化疗有效率为77.78%(7/9),RUNX3+/EZH2-的患者新辅助化疗有效率为100%(7/7),高于其他蛋白表达模式(P=0.019),多因素Logistic回归显示RUNX3蛋白的表达情况是患者新辅助化疗疗效的影响因素。结论RUNX3在直肠癌组织中阳性表达率低于癌旁组织,EZH2在直肠癌组织中阳性表达率高于癌旁组织,二者在直肠癌中的表达呈负相关;XELOX方案新辅助化疗可能会对直肠癌中RUNX3和EZH2的表达产生影响;RUNX3高表达和EZH2低表达的局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗更敏感。

Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC_(50)值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC_(50)值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC_(50)值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。

骨肉瘤组织中Runt相关转录因子3表达量与细胞增殖、血管新生的相关性

目的:探讨骨肉瘤组织中Runt相关转录因子3(RUNX3)表达量与细胞增殖、血管新生的相关性。方法:收集2014年2月~2017年2月间在本院接受治疗的骨肉瘤患者80例,检测肿瘤组织及肉瘤旁组织中RUNX3的表达量。进一步根据肿瘤组织RUNX3表达量分为RUNX3高表达组、RUNX3低表达组,对比其增殖基因、血管新生基因表达量的差异。结果:骨肉瘤组织中RUNX3、KISS-1、RanBP9mRNA表达量显著低于肉瘤旁组织,VCP、Six1、S100A6、IF-1α、MMP-14、bFGF、Ang-2mRNA表达量显著高于肉瘤旁组织;RUNX3高表达组骨肉瘤组织中KISS-1、RanBP9 mRNA的表达量高于RUNX3低表达组,VCP、Six1、S100A6、HIF-1α、MMP-14、bFGF、Ang-2mRNA mRNA的表达量低于RUNX3低表达组。结论:骨肉瘤组织中RUNX3表达量减少,是导致肿瘤增殖活性增高、血管新生旺盛的直接原因之一。

Runt相关转录因子3在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)在结直肠癌组织中的表达,分析其与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系。方法选择2017年2月至2020年6月郑州大学附属洛阳市中心医院胃肠外科收治的100例结直肠癌患者为研究对象,取患者术中留取的结直肠癌组织及距离癌组织边缘5 cm以上的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测结直肠癌组织和癌旁组织中RUNX3蛋白的表达,蛋白免疫印迹法检测结直肠癌组织、癌旁组织及人正常结肠上皮细胞NCM460和结肠癌细胞系HCT-116、SW-480细胞中RUNX3蛋白相对表达量。采用Kaplan-Meier绘制生存率曲线,Log-rank检验和Cox回归分析癌症患者的预后影响因素。结果结直肠癌组织中RUNX3蛋白高表达率为35.0%(35/100),癌旁组织中RUNX3蛋白高表达率为74.0%(74/100);结直肠癌组织中RUNX3蛋白高表达率显著低于癌旁组织(χ^(2)=30.670,P<0.05)。结直肠癌组织中RUNX3蛋白相对表达量显著低于癌旁组织(t=2.904,P<0.05);结肠癌细胞系HCT-116和SW-480细胞中RUNX3蛋白相对表达量均显著低于正常结肠上皮细胞NCM460(t=-14.738、-8.082,P<0.05);结肠癌细胞系HCT-116中RUNX3蛋白相对表达量与SW-480细胞比较差异无统计学意义(t=0.554,P>0.05)。结直肠癌组织中RUNX3表达水平与患者淋巴结转移、远处转移及肿瘤TNM分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤直径、位置、大体分型、浸润深度及分化程度无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,结直肠癌组织中RUNX3低表达患者生存率为60.0%(39/65),高表达患者生存率为71.4%(25/35);高表达患者生存率显著高于低表达患者(χ^(2)=4.413,P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、肿瘤TNM分期及RUNX3表达水平与患者生存有关(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,有无远处转移、肿瘤TNM分期及RUNX3表达水平是影响患者生存的独立危险因素(P<0.05)。结论RUNX3在结直肠癌组织中呈低表达,其与结直肠癌发生、发展及不良预后有关,可作为判定患者预后的潜在指标。

Runt相关转录因子3在小鼠心肌纤维化中的作用

目的探讨Runt相关转录因子3(runt related transcription factor 3,Runx3)在心肌梗死(myocardial infarction,MI)后心脏成纤维细胞分化、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)合成和增殖中的作用。方法选择C57BL/6J雄性小鼠为研究对象。分为模型组(MI)和假手术组(Sham),MI组采用结扎左冠状动脉建立MI模型,分别在建模后7、14、28 d处死小鼠;Sham组不结扎左冠状动脉。另将Sham组和MI组小鼠建模前尾静脉分别注射Runx3小干扰RNA(si-Runx3)或阴性对照siRNA(si-NC),建模后28 d处死,分为Sham+si-NC组、Sham+si-Runx3组、MI 28 d+si-NC组和MI 28 d+si-Runx3组,每组8只。应用免疫荧光染色和Western blot检测小鼠心脏中Runx3、α-SMA和ColⅠ的水平,采用超声心动图评价心功能,免疫组化方法检测Ki67阳性细胞。体外实验中,从1~3 d龄的C57BL/6小鼠中分离心脏成纤维细胞,观察TGF-β1以不同浓度和刺激时间对细胞中Runx3蛋白影响,并分析Runx3基因敲除对心脏成纤维细胞的ColⅠ合成和增殖的响。结果免疫荧光染色和Western blot结果,随着MI时间的延长,小鼠纤维化区域Runx3、α-SMA和ColⅠ表达上调。MI后28 d,与注射si-NC小鼠相比,注射si-Runx3小鼠左心室射血分数(ejection fraction,EF)、缩短分数(shortened fraction,FS)、心输出量(cardiac output,CO)。上调(P<0.05),而舒张末期左心室内径(decreased left ventricular end-diastolic diameter,LVIDd)和收缩期左心室内径(decreased left ventricular,LVIDs)下调(P<0.05)。MI后28 d,MI诱导的Runx3和α-SMA表达和对Ki67阳性细胞增殖作用被si-Runx3阻断。TGF-β1以浓度和时间依赖性方式上调Runx3蛋白表达;Runx3基因敲除不仅抑制TGF-β1诱导的心脏成纤维细胞分化,减少ColⅠ合成,而且减弱了心脏成纤维细胞增殖。结论 Runx3参与了心脏成纤维细胞分化和增殖。

LncRNA HAGLR激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体对胫骨骨折愈合的影响

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)HAGLR对胫骨骨折(TF)小鼠的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达和骨折愈合的影响并探讨机制。方法体外对成骨细胞MC3T3-E1沉默HAGLR,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,qPCR法检测骨碱性磷酸酶(BALP)和骨钙素的表达。Western blot法检测RUNX2、磷酸化RUNX2(p-RUNX2)以及NLRP3、半胱天冬酶1(Caspase1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。通过小鼠TF手术建立TF小鼠模型,在模型小鼠体内过表达HAGLR,并在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2或加入炎症小体抑制剂MCC950。qPCR法检测HAGLR和RUNX2的表达,Western blot法检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达。microCT测量小鼠骨痂体积(MBV),称量小鼠的全长胫骨湿重。结果沉默HAGLR导致MC3T3-E1细胞活力降低且凋亡率增加(P<0.05),且RUNX2、p-RUNX2、BALP和骨钙素表达量均降低(P<0.05),NLRP3、Caspase1、ASC、IL-1β的表达量都增加(P<0.05)。与健康组织比较,TF小鼠体内HAGLR和RUNX2表达量降低(P<0.05)。过表达HAGLR促进TF小鼠体内的HAGLR和RUNX2表达,并增加MBV和全长胫骨湿重以及IGF-1的表达量(P<0.05)。在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2导致TF小鼠的MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达量都降低(P<0.05)。而在过表达HAGLR的基础上加入NLRP3炎症小体抑制剂MCC950导致MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达又增加(P<0.05)。结论LncRNA HAGLR通过激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体促进TF的愈合。

白皮杉醇调控miR-106b-5p/RUNX3轴对宫颈癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探究白皮杉醇(PIC)调控微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)/RUNT相关转录因子3(RUNX3)轴对宫颈癌(CC)细胞迁移及侵袭的影响。方法使用不同浓度PIC(0、20、40、80和160μmol/L)培养液处理人CC Hela细胞,通过CCK-8法检测PIC对细胞增殖活力的影响,以确定PIC最佳使用浓度。将Hela细胞分为Control组、PIC组、PIC+NC mimics组、PIC+miR-106b-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组及miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组。实时荧光定量PCR检测各组Hela细胞miR-106b-5p表达水平;Transwell法检测各组Hela细胞迁移及侵袭能力;Western blot法检测各组Hela细胞中RUNX3、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-106b-5p与RUNX3靶向关系。结果Hela细胞增殖活力随着PIC处理浓度的增高而呈现降低趋势(P<0.05),其中80μmol/L PIC对Hela细胞的抑制作用接近半数抑制浓度(IC50),故选择80μmol/L为后续研究的PIC浓度。与Control组相比,PIC组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平均降低,迁移和侵袭细胞数量减少,RUNX3表达水平增加(P<0.05);与PIC+NC mimics组相比,PIC+miR-106b-5p mimics组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多,RUNX3表达水平降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验证实RUNX3为miR-106b-5p的靶基因。与NC inhibitor组相比,miR-106b-5p inhibitor组RUNX3表达水平增加,miR-106b-5p、MMP2与MMP9表达水平降低,迁移和侵袭细胞数量减少(P<0.05);与miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组相比,miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组RUNX3表达水平降低,miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多(P<0.05)。结论PIC通过抑制miR-106b-5p表达、促进RUNX3表达来抑制CC细胞迁移及侵袭。