结核分枝杆菌Rv2629基因产物的亚细胞定位和穿梭质粒转化耻垢分枝杆菌

目的研究结核分枝杆菌利福平耐药相关蛋白Rv2629在细胞内的亚定位及其与药敏的相关性。方法采用差速离心进行细胞组分分离及蛋白质印迹法(Western blot)检测初步判定蛋白亚细胞定位;采用pMV261转化耻垢分枝杆菌,BACTEC MGIT960测定转化菌株的利福平耐受性。结果Rv2629蛋白主要定位于结核分枝杆菌的细胞壁和细胞膜,重组有Rv2629突变位点191C质粒的耻垢分枝杆菌对利福平的最低抑菌浓度(MIC)为160mg/L,相应的携带有野生型基因191A的宿主菌MIC为20mg/L。结论Rv2629基因191A/C突变同利福平耐药相关。

结核分枝杆菌Rv2629基因编码蛋白的生物信息学分析

目的应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌Rv2629基因编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI GenBank中获得结核分枝杆菌H37Rv利福平敏感菌株Rv2629的基因序列,利用在线分析软件预测和分析其编码蛋白的理化性质和亲疏水性,跨膜结构域及信号肽,糖基化位点及磷酸化位点,二级和三级结构及B、T淋巴细胞抗原表位。结果Rv2629蛋白由374个氨基酸组成,具有亲水性,主要存在于细胞壁及细胞膜。Rv2629含有信号肽及跨膜结构域,6个糖基化位点和4个磷酸化氨基酸位点,二级结构中α螺旋约占45.72%,β折叠约占17.11%。该蛋白含有3个潜在的B细胞抗原表位,其优势抗原表位主要集中在67-70,91-95,229-232位氨基酸,4个CTL细胞表位分别位于279、283、98、346位氨基酸,11个T h细胞表位分别位于26、127、256、25、34、116、204、215、350、363、367位氨基酸。结论Rv2629蛋白存在于细胞壁及细胞膜,是一分泌蛋白,在结核病的潜伏期可上调表达。该蛋白含有B、T细胞抗原表位,可作为结核利福平耐药株的研究靶点。