结核分枝杆菌Esx-1底物蛋白Rv3615c的原核表达及其免疫功能研究

目的:构建结核分枝杆菌(M.tb)Esx-1底物蛋白Rv3615c的原核表达质粒p ET30b-Rv3615c并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达;以全血IFN-γ分析试验(WBIA)检测rRv3615c蛋白能否被淮南市M.tb感染者T细胞所识别;在小鼠模型中检测其免疫原性。方法:以分子克隆技术构建重组载体p ET30b-Rv3615c并表达、纯化rRv3615c蛋白,以WBIA检测rRv3615c抗原刺激淮南市M.tb感染者和未感染者外周血淋巴细胞产生的特异性IFN-γ水平。此外联合佐剂SAS免疫C57BL/6小鼠,评价其体液免疫应答和Th1型应答水平。结果:成功构建p ET30b-Rv3615c质粒,SDS-PAGE和Western blot显示其正确表达和纯化。rRv3615c蛋白特异性刺激淮南市M.tb感染者淋巴细胞产生的IFN-γ浓度显著高于健康对照者。Rv3615c/SAS诱导小鼠产生的IgG、IgG1、IgG2a以及Rv3615c1SAS诱导小鼠脾淋巴细胞分泌的特异性IFN-γ、TNF-α和IL-2,均显著高于PBS组和SAS组,显示rRv3615c可诱导趋向于Th1型免疫应答。结论:Rv3615c可被淮南市M.tb感染者T细胞识别,具有较强的免疫原性,是用于结核病(TB)预防和诊断的潜力靶抗原。

复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c ELISPOT辅助诊断活动性肺结核的应用价值

目的:评估结核分枝杆菌复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c在活动性肺结核诊断中的应用价值。方法:选取肺结核病患者78例,非结核性肺部疾病患者27例和健康体检者39例,分别用复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c、ESAT-6肽段库和CFP-10肽段库作为抗原刺激单个核淋巴细胞(PBMCs),采用酶联免疫斑点试验检测斑点形成细胞数,判断肺结核感染情况。结果:复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c、ESAT-6肽段库和CFP-10肽段库检测结核分枝杆菌感染的敏感性依次为87.2%(68/78)、80.8%(63/78)、76.9%(60/78),特异性依次为81.8%(54/66)、84.8%(56/66)、87.9%(58/66)。结论:复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c有较高的敏感性和特异性,对活动性肺结核的辅助诊断有一定的临床应用价值。