总评归一值法优选山豆根茎多糖的微波预处理-超声波提取工艺及生物活性研究

目的:研究山豆根茎多糖的微波预处理-超声波提取工艺及其生物活性。方法:以多糖得率和多糖纯度的总评归一值为评价指标,采用正交设计优选山豆根茎多糖的微波预处理-超声波提取工艺,并对其稳定性、抗氧化活性和清除亚硝酸盐活性三种生物活性进行研究。结果:最佳提取工艺条件为:解析剂比1∶5(g/m L),微波时间30 s,料液比1∶25(g/m L),超声功率140 W,提取时间20 min,该工艺条件下,多糖得率为3.27%,多糖纯度为29.49%,提取效果优于热水浸提法和超声波提取法。多糖稳定性研究表明粗多糖在温度40~70℃、Ca^(2+)或柠檬酸中较稳定,但在温度高于70℃、H_2O_2、Na_2SO_3、VC、Na^+、Al^(3+)、Cu^(2+)或Fe^(3+)的条件下稳定性较差。体外抗氧化活性研究表明粗多糖具有一定的抗氧化活性,当浓度为1.96 mg/m L时,微波预处理-超声波提取法粗多糖对·OH和O-2·的清除率分别可达78.14%和71.16%;亚硝酸盐清除研究表明粗多糖具有良好的清除亚硝酸盐活性,当添加量为20 m L(或19.60 mg)时,清除率可达82.94%,清除效果与0.32 mg VC相当;相同浓度下,微波预处理-超声波提取法所提取的粗多糖对O-2·和亚硝酸盐的清除活性与超声提取法相当,且对·OH的清除活性优于超声提取法。结论:山豆根茎中富含多糖类物质,具有良好的抗氧化活性和清除亚硝酸盐活性,粗多糖稳定性较差,建议低温避光保存。

山豆根多糖的制备、单糖组成及体外抗肿瘤作用

目的:制备山豆根多糖(polysaccharide of Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma, SRP)并分析其单糖组成,探索SRP的体外抗肿瘤作用。方法:水提醇沉法制备SRP,紫外-可见分光光度法测定SRP中多糖、黄酮、皂苷、酚类和蛋白质含量,高效液相色谱法测定生物碱含量,返滴定法测定有机酸含量。通过高效液相色谱仪,色谱柱采用Waters X Bridge C_(18)柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以乙腈:磷酸盐缓冲液(0.05 mol·L^(-1),pH=6.8)=18∶82为流动相,等梯度洗脱,流速为0.8 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为245 nm,建立SRP的单糖组成分析方法,测定SRP中各单糖含量并计算摩尔比。采用MTT法检测SRP抑制肿瘤细胞增殖的活性。结果:水提醇沉法制得SRP,棕黄色粉末,得率为3.95%,其中不含生物碱成分,多糖、黄酮、皂苷、有机酸和酚类含量分别为66.08%,7.17%,3.45%,2.54%和4.33%,蛋白质含量可忽略不计。SRP由甘露糖、鼠李糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,各单糖的摩尔比为1.25∶0.31∶0.28∶0.50∶40.47∶1.00∶10.46,SRP的质量分数为64.97%。SRP对Hepa1-6,HepG2,HT29和4T1细胞均具有显著的增殖抑制作用且呈浓度依赖性,IC_(50)值分别为770,1 910,1 870和1 880μg·mL^(-1)。结论:本研究制备的SRP中多糖含量大于60%,已知成分含量大于80%,其中不含生物碱。1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolo, PMP)柱前衍生化-HPLC法精密度、重复性和准确性良好,可用于分析SRP的单糖组成。SRP是一类以葡萄糖和阿拉伯糖为主要成分的杂多糖。SRP具有明显的细胞毒作用,提示SRP可通过抑制肿瘤细胞增殖发挥抗肿瘤作用。本研究为推进SRP成分的基础研究和促进SRP的抗肿瘤作用研究提供了参考。

广西多叶越南槐HPLC指纹图谱的建立及与山豆根HPLC指纹图谱一致性比较研究

目的:建立多叶越南槐的HLPC指纹图谱分析方法,为科学评价和有效控制多叶越南槐药材的质量提供参考依据;并通过指纹图谱比较多叶越南槐与山豆根的相似性,为多叶越南槐与山豆根同源性研究提供参考数据。方法:采用反相高效液相色谱法,Agilent Eclipse-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用三乙胺调p H 6.4)梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长215 nm,柱温30℃,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版软件进行数据处理。结果:建立的多叶越南槐指纹图谱有14个共有峰,指认了7个共有峰;各批药材指纹图谱比较相似度大部分在0.90以上,基本符合指纹图谱研究技术的要求;多叶越南槐与山豆根指纹图谱相比较,相似度均在0.90以上。结论:该方法精密度、稳定性及重复性较好,特征性及专属性强,可以有效地用于多叶越南槐药材的质量控制,为开发和利用多叶越南槐药材资源提供科学依据,通过多叶越南槐与山豆根指纹图谱的比较,可推测出多叶越南槐与山豆根成分相似,亲缘关系相近。