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血清preS1水平与慢性乙型肝炎患者肝纤维化的关系及对癌变的诊断价值
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作者 高兴娟 程磊 +5 位作者 马秀清 刘守珠 王宝英 刘海燕 才德吉 杨兴唐 《传染病信息》 2024年第2期132-136,共5页
目的分析血清乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前S1蛋白(precursor S1 protein,preS1)与慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)肝纤维化及癌变进展的相关性。方法对2019年10月—2021年10月期间在青海红十字医院接受检查的228例乙... 目的分析血清乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前S1蛋白(precursor S1 protein,preS1)与慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)肝纤维化及癌变进展的相关性。方法对2019年10月—2021年10月期间在青海红十字医院接受检查的228例乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性慢性HBV感染者进行回顾性分析,其中CHB患者75例、肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者93例(LC组)、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者60例(HCC组)。根据LC和HCC组肝组织活检分析肝脏炎症活动及肝纤维化程度。结果HCC组血清preS1水平[496.32(457.63,988.0)ng/mL]和LC组[338.72(247.93,554.61)ng/mL]血清preS1水平均显著高于CHB组[113.69(87.09,177.40)ng/mL],且差异具有统计学意义(P均<0.05)。HCC组血清preS1水平亦高于LC组(P=0.002)。经受试者工作特征曲线分析,血清preS1水平鉴别诊断CHB与LC的曲线下面积(area under the curve,AUC)是0.881(95%CI:0.830~0.932),鉴别诊断CHB/LC与HCC的AUC是0.861(95%CI:0.815~0.908)。3组患者的血清preS1水平与HBsAg(rs=0.799,P<0.001)呈强正相关和Log HBV DNA(rs=0.262,P<0.001)呈弱正相关。此外LC组和HCC组血清preS1水平与肝脏炎症活动分级(rs=0.201,P=0.009)及肝纤维化分期也呈弱正相关性(rs=0.295,P<0.001)。结论血清preS1水平与血清HBsAg、HBV DNA水平和肝脏炎症和纤维化进展呈正相关,有可能成为鉴别诊断HBV相关慢性肝病肝硬化或癌变的候选标志物。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 HBV前s1蛋白 慢性乙型肝炎 肝纤维化 肝硬化 肝细胞癌
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不同猪源受体菌表达猪流行性腹泻病毒保护性抗原S1诱导免疫应答的比较研究
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作者 马茹梦 赵玉梁 +12 位作者 马明爽 国桂海 刘芯孜 李佳璇 崔文 姜艳平 单智夫 周晗 王丽 乔薪瑗 唐丽杰 王晓娜 李一经 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2090-2099,共10页
旨在比较猪源副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)、罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)作为口服疫苗载体,表达外源蛋白刺激仔猪产生免疫能力的强弱,以期选取合适乳酸菌作... 旨在比较猪源副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)、罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)作为口服疫苗载体,表达外源蛋白刺激仔猪产生免疫能力的强弱,以期选取合适乳酸菌作为受体菌载体。本研究首先体外鉴定表达PEDV S1蛋白的重组猪源副干酪乳酪杆菌(pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2)、猪源罗伊氏黏液乳杆菌(pPG-T7g10-S1/L.reuteri J31)、猪源约氏乳酸杆菌(pPG-T7g10-S1/L.johnsonii 6332)的耐酸耐胆盐能力,考察3株重组菌的抗逆性。结果表明,3株重组菌均能够耐受酸和胆盐环境,且与其野生型菌株没有显著差异。接下来为比较3株重组菌的免疫效果,口服免疫初生仔猪后,利用间接ELISA和中和试验检测仔猪产生的特异性抗体水平及其中和活性;并测定免疫后仔猪血清和肠黏膜中各细胞因子水平。结果显示,口服免疫后,与对照组相比,3株免疫组仔猪血清IgG抗体和鼻拭子、肛拭子、肠黏液中SIgA抗体水平均显著升高,且可持续至第28天左右,其中pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2组诱导产生的抗体水平显著高于其他两组免疫组(P<0.05);仔猪产生特异性的IgG和SIgA对PEDV均具有中和活性。仔猪血清中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平和对照组相比显著升高(P<0.05),但3株重组菌组间细胞因子水平未见明显差异;仔猪空肠黏膜中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-17、IL-21、TGF-β、APRIL和BALL水平与对照组相比有所升高,且pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2组IL-4、IL-5、IL-6、TGF-β、IL-17、IL-21和BALL相比其他组显著升高(P<0.05)。综上所述,本研究分别将质粒组成型表达PEDV主要保护性抗原S1的重组猪源副干酪乳酪杆菌、猪源罗伊氏黏液乳杆菌和猪源约氏乳酸杆菌口服免疫仔猪,结果显示能够刺激机体产生针对PEDV的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫,且相较于其他2株重组菌,重组猪源副干酪乳酪杆菌pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2的口服免疫效果最好。该试验结果为构建更为有效的乳酸菌口服疫苗提供了科学数据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 s1蛋白 副干酪乳酪杆菌 罗伊氏黏液乳杆菌 约氏乳杆菌 口服疫苗 免疫分析
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猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立
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作者 杨小曼 时洪艳 +8 位作者 张燎原 张鑫 张记宇 刘大凯 冯廷帅 曾苗苗 陈建飞 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期608-613,共6页
为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析... 为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 s1蛋白 间接ELISA方法 抗体检测
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牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用
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作者 黄金 李思远 +6 位作者 毛立 蔡旭航 谢玲玲 王府 周华 李基棕 李彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2050-2060,共11页
为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫Hi... 为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫High5细胞培养基上清,经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好;经反应条件优化,确定抗原包被浓度为0.125μg·mL^(-1),血清稀释度为1∶200;采用1%明胶,于37℃封闭3 h;血清样品于37℃孵育30 min;酶标二抗的稀释度1∶25000,37℃孵育45 min;37℃避光显色13 min;临界值为0.297;经检验,该方法特异性良好;批间及批内变异系数均小于10%。当临界值为OD_(450 nm)为0.297时,若以IFA为标准,ELISA的敏感性为96.88%(31/32),特异性为87.50%(7/8),与IFA具有很强的一致性(κ=0.844,P<0.01);若以中和试验为标准,ELISA的敏感性为100.00%(31/31),特异性为88.89%(8/9),与血清中和试验具有很强的一致性(κ=0.925,P<0.01)。采用该方法对303份牛血清进行检测,BCoV阳性率为74.91%。由此说明,本研究建立的ELISA方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于BCoV的血清学调查和临床诊断,并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 昆虫杆状病毒表达系统 s1蛋白 间接ELISA
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猪流行性腹泻病毒S1基因遗传进化分析及蛋白结构预测
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作者 孙在兴 邱文英 +3 位作者 扶海 罗皓 曹敏 李玉锋 《现代农业科技》 2024年第21期146-152,164,共8页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,可引起血清阴性新生仔猪急性腹泻、呕吐、脱水,死亡率较高。PEDV感染引起的猪流行性腹泻(PED)给欧洲和亚洲养猪业造成了重大的经济损失。地方性PED是一个重大问题,多种PEDV潜在输... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,可引起血清阴性新生仔猪急性腹泻、呕吐、脱水,死亡率较高。PEDV感染引起的猪流行性腹泻(PED)给欧洲和亚洲养猪业造成了重大的经济损失。地方性PED是一个重大问题,多种PEDV潜在输入或变体的出现加剧了这一问题。为了解PEDV的流行与变异情况,应用生物信息学方法对50个PEDV毒株进行了遗传进化分析。结果表明,不同基因型PEDV S1基因具有稳定突变点,同一地域主要流行毒株具有相对遗传稳定性,2020年后我国流行毒株多为G2c基因群。本研究为进一步监测和分析我国猪群腹泻的流行病学及研究PEDV的遗传变异规律提供参考,同时为PED的防控和疫苗研发提供理论依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 s1基因 生物信息学 遗传进化 蛋白结构 疫苗
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Synthesis,Expression and Purification of S1 and S2 Fragments of SARS S Protein in E.coli 被引量:1
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作者 ZHENG Shang-yong PAN Wei-qing 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2011年第4期18-21,33,共5页
[Objective] To obtain pure recombinant S1 and S2 of SARS S protein. [Method] Using asymmetric PCR and ligation with endonuclease, S1 and S2 fragments of SARSV HK strain S gene were synthesized. Then, these two fragmen... [Objective] To obtain pure recombinant S1 and S2 of SARS S protein. [Method] Using asymmetric PCR and ligation with endonuclease, S1 and S2 fragments of SARSV HK strain S gene were synthesized. Then, these two fragments were inserted into plasmid pET28a to obtain recombinant vectors pET28a-S1 and pET28a-S2, respectively. These recombinant vectors were transformed into E. coli BL21, and expression of S1 and S2 fragments were induced by IPTG. The conditions of expression and purification were optimized. [Result] The S1 and S2 fragments were amplified and successfully expressed in E. coli. [Conclusion] This research provides detection antigens for follow-up development of SARS vaccine. 展开更多
关键词 SARS S protein s1 protein S2 protein Prokaryotic expression PURIFICATION
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内蒙古地区牛冠状病毒的分离鉴定及S1基因遗传进化分析 被引量:1
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作者 梁彤 曹存 +6 位作者 于德斌 王芳 姜志刚 徐晓静 刘春东 尹鑫 常继涛 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第19期82-87,141,共7页
为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛冠状病毒(BCoV)的种质资源和流行病学数据,试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征,同时... 为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛冠状病毒(BCoV)的种质资源和流行病学数据,试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征,同时通过序列比对分析与GenBank中具有代表性的BCoV S1基因组序列的同源性,利用MEGA 7.0.14软件构建S1基因组系统进化树。结果表明:9份样本中有2份为BCoV N基因阳性,PCR扩增得到大小约为730 bp的目的条带;用阳性样本接种HRT-18G细胞并进行3次传代培养,可见细胞出现以变圆、融合形成合胞体、融合细胞脱落为主要特征的典型细胞病变;分离株能够与兔抗BCoV N蛋白的多克隆抗体发生特异性反应,透射电镜观察可见有囊膜、表面有纤突、直径约为120 nm的病毒粒子;将分离获得的BCoV毒株命名为HM-XC,该分离株感染HRT-18G细胞的病毒含量为1×10^(5.75)TCID_(50)/0.1 mL;分离株HM-XC S1基因的核苷酸序列与我国青海省牦牛源毒株BCoV Yak/BCoV-China/QH1的相似性最高,为99.61%,与近年来辽宁省流行毒株的相似性为96.4%~99.0%,与美国经典参考毒株BCoV Mebus的相似性较低,为96.3%;与相似性最高的Yak/BCoV-China/QH1毒株相比,分离株HM-XC的S1蛋白存在7个氨基酸突变,分别是H115D、S186W、Y509H、V528A、N531D、L563S和I640T。说明内蒙古地区牛场中已有BCoV的流行,并且在犊牛腹泻粪便中分离获得BCoV内蒙古流行毒株,分离株具有我国新流行BCoV株的序列特征。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 分离 鉴定 s1蛋白编码基因 序列分析
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稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞系的构建与鉴定 被引量:1
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作者 孙雪珂 丁培阳 +6 位作者 王思桥 刘思源 李明慧 常泽杰 陈艺兰 李瑞琪 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2023年第6期131-138,共8页
为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的CHO细胞系,利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞,通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化,采用间接EL... 为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的CHO细胞系,利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞,通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化,采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性。将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。结果显示,稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立,并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白;且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好,具有良好的免疫原性,中和效价为1∶128。综上,成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系,且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 s1蛋白 CHO细胞 稳定表达 蛋白质纯化
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猪流行性腹泻病毒纤突蛋白S1抗原表位的串联表达及免疫原性分析
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作者 刘阳坤 王国川 +2 位作者 韩雪英 冷超粮 姚伦广 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第15期1-7,129,共8页
为了获得猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)纤突蛋白S1抗原表位的串联重组蛋白并评价其免疫原性,试验将S1蛋白的抗原表位COE和S1D连接起来组成串联表位S1CD,合成相应的基因片段后克隆至转移载体pFastBac1上,然后... 为了获得猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)纤突蛋白S1抗原表位的串联重组蛋白并评价其免疫原性,试验将S1蛋白的抗原表位COE和S1D连接起来组成串联表位S1CD,合成相应的基因片段后克隆至转移载体pFastBac1上,然后转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑和PCR扩增筛选重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-S1CD,再转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒,采用间接免疫荧光试验和Western-blot检测方法鉴定重组蛋白S1CD的表达情况。将小鼠随机均分为S1CD蛋白组、PEDV灭活疫苗组和PBS组,分别经背部皮下多点注射重组蛋白S1CD、PEDV HeN170821灭活病毒和PBS与弗氏佐剂等体积混合制成的抗原,检测特异性IgG抗体水平及白细胞介素-4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)含量以评价重组蛋白S1CD的免疫原性。结果表明:重组蛋白S1CD成功在Sf9昆虫细胞中表达,并能与鼠抗His单克隆抗体和PEDV阳性血清发生特异性反应;首次免疫后第28天,S1CD蛋白组的特异性IgG抗体水平极显著高于PBS组(P<0.01);首次免疫后第42天,S1CD蛋白组的特异性IgG抗体水平及IL-4和IFN-γ含量均极显著高于PBS组(P<0.01)。说明利用杆状病毒表达系统表达的重组蛋白S1CD具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) s1蛋白 抗原表位 串联表达 免疫原性
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基于哺乳动物细胞表达S1蛋白的猪流行性腹泻病毒单克隆抗体
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作者 李虎林 颜仁和 +7 位作者 陈泽典 仇珍珍 李堪贺 马曼欣 毛莹莹 李建军 吕宗吉 李红卫 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第4期694-698,共5页
目的 制备抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体。方法 本研究以哺乳动物细胞293T表达的PEDV S1重组蛋白免疫BALB/c小鼠;利用细胞融合技术,经间接ELISA方法筛选和细胞克隆,得到5株能稳定分泌抗PEDV S1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。筛选效价最... 目的 制备抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体。方法 本研究以哺乳动物细胞293T表达的PEDV S1重组蛋白免疫BALB/c小鼠;利用细胞融合技术,经间接ELISA方法筛选和细胞克隆,得到5株能稳定分泌抗PEDV S1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。筛选效价最高的杂交次瘤细胞株制备单克隆抗体并进行特性鉴定。结果 免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合后,经多次克隆及亚克隆筛选,共得到5株能与PEDV S1蛋白产生特异性反应的单抗表达细胞株。分别命名为:12D14H4、13F5B9、10D2B10、11A7C9和14E6F5,其分泌的抗体效价分别为:1∶51 200、1∶25 600、1∶12800、1∶12 800、1∶3 200。5株单抗与PEDV S1蛋白反应后,均在130 KDa附近出现清晰条带。所得单克隆抗体为IgGⅠ亚型,轻链为κ链;杂交瘤细胞用无血清培养基培养,上清中抗体效价最高可达到1∶1 024 000,且经连续传代20代效价没有显著降低。Western blot及间接免疫染色检测结果显示,单克隆抗体能识别PEDV S1蛋白,并与Vero细胞、PPRV、PRRSV、PCV2、PP和CSFV等均无交叉反应,具有良好的特异性,可用于PEDV感染检测。结论 PEDV单克隆抗体的成功研制,为PEDV免疫诊断、表位识别及蛋白研究奠定了良好基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 s1蛋白 单克隆抗体 免疫染色 免疫诊断
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乙肝五项血清标志物联合乙型肝炎病毒前S1抗原在乙型肝炎病毒感染患者临床治疗中的意义
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作者 文静 郝静 赤英民 《当代医学》 2023年第31期102-105,共4页
目的分析乙肝五项血清标志物联合乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre S1)在乙型肝炎病毒(HBV)感染患者临床治疗中的意义。方法选取2021年1—10月空军军医大学西京医院门诊及住院部收治的147例HBV感染患者作为研究对象,患者均采用核苷类似物治疗,... 目的分析乙肝五项血清标志物联合乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre S1)在乙型肝炎病毒(HBV)感染患者临床治疗中的意义。方法选取2021年1—10月空军军医大学西京医院门诊及住院部收治的147例HBV感染患者作为研究对象,患者均采用核苷类似物治疗,观察患者治疗后乙肝五项血清标志物及Pre S1定量及定性变化,比较预后良好患者与合并症患者乙肝五项血清标志物联合Pre S1抗原检测含量、抗原阳性率。结果治疗后3、6个月,患者HBs Ag、HBs Ab、HBe Ag、HBe Ab、HBc Ab、Pre S1含量及阳性率均低于治疗前,且治疗后6个月低于治疗后3个月,差异有统计学意义(P<0.05);预后良好患者HBs Ag、HBs Ab、HBe Ag、HBe Ab、HBc Ab、Pre S1含量及阳性率均低于合并症患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙肝五项血清标志物和Pre S1抗原是稳定、可靠的生物学标志物,联合定量检测可反映不同治疗时期乙型肝炎患者病毒的感染水平、复制程度、传染性,对于HBV感染患者病情发展判断及后续治疗具有良好的临床意义。 展开更多
关键词 乙型肝炎 乙肝五项血清标志物 乙型肝炎病毒前s1抗原抗原
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应用微阵列技术筛选HBV前-S1蛋白的反式调节基因谱 被引量:5
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作者 纪冬 成军 +3 位作者 董菁 刘妍 王建军 郭江 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期871-874,共4页
目的 阐明前 S1蛋白的表达对乙型肝炎病毒 (HBV)感染肝细胞基因表达谱的影响。方法 以含有HBV全基因组的质粒G376 7(GenBank号 :AF384 371)作为模板 ,应用PCR扩增前 S1蛋白编码基因片段 ,以常规的分子生物学技术构建表达载体 pcDNA3 ... 目的 阐明前 S1蛋白的表达对乙型肝炎病毒 (HBV)感染肝细胞基因表达谱的影响。方法 以含有HBV全基因组的质粒G376 7(GenBank号 :AF384 371)作为模板 ,应用PCR扩增前 S1蛋白编码基因片段 ,以常规的分子生物学技术构建表达载体 pcDNA3 1(- ) preS1,以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取总mRNA ,逆转录为cDNA ,与转染空白表达载体pcDNA3 1(- )的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较。结果 在 115 2个基因表达谱的筛选中 ,发现有 30个基因表达水平显著上调 ,38个基因表达水平显著下调。结论 前 S1基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。DNA芯片技术是分析反式调节靶基因的有效技术途径。 展开更多
关键词 HBV 基因表达谱 反式调节基因 肝细胞 蛋白编码基因 微阵列技术 PCDNA3 基因表达水平 表达载体 DNA芯片
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应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活的相关基因 被引量:9
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作者 纪冬 成军 +6 位作者 王建军 董菁 郭江 刘妍 杨倩 党晓燕 王春花 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第1期3-8,共6页
目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建乙型肝炎病毒 (HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活的相关基因cDNA消减文库 ,克隆前 S1反式激活相关基因 ,以期发现前 S1蛋白反式激活作用的靶位点 ,为阐明前 S1蛋白的反式激活作用的分子生物... 目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建乙型肝炎病毒 (HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活的相关基因cDNA消减文库 ,克隆前 S1反式激活相关基因 ,以期发现前 S1蛋白反式激活作用的靶位点 ,为阐明前 S1蛋白的反式激活作用的分子生物学机制 ,以及HBV相关肝细胞癌 (HCC)形成的分子生物学机制开辟新的研究方向。方法 以HBV前 S1表达质粒pcDNA3 .1(-) preS1转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1(-)为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与pGEM Teasy载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌DH5α进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果 文库扩增后得到 67个阳性克隆 ,经菌落PCR分析 ,得到 5 1个 2 0 0~ 10 0 0bp插入片段。对所得片段测序 ,并进行同源性分析 ,获得 3 2种编码基因 ,其中 2 6个为已知功能基因 ,另外 6个为未知功能序列 ,可能是前 S1蛋白反式激活新的靶基因。结论 成功构建HBV前 S1反式激活的相关基因cDNA消减文库 ,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定基础。为进一步阐明前 展开更多
关键词 抑制性消减杂交技术 克隆 乙型肝炎病毒 前-s1蛋白 反式激活 分子生物学
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乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白l基因的克隆化研究 被引量:4
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作者 纪冬 成军 +5 位作者 郭江 王建军 刘妍 杨倩 王春花 党晓燕 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第1期9-12,共4页
目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒 (HBV)前 S1蛋白(pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制。方法 以HBV前 S1蛋白表达质粒pcDNA3 .1(-) Pr... 目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒 (HBV)前 S1蛋白(pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制。方法 以HBV前 S1蛋白表达质粒pcDNA3 .1(-) PreSl转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1(-)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HBV前 Sl反式激活作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被前 S1蛋白反式激活 ,故命名为前Sl反式激活蛋白 1(PSlTPl) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY42 6672。PSlTPl基因的编码序列全长为64 2个核苷酸 (nt) ,编码产物由 2 13个氨基酸残基 (aa)组成。结论 HBV前 Sl蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要的作用 ,最近的研究表明前 Sl蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的应答水平 ,引起病变。HBV前 Sl反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究HBV前 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前-s1蛋白 反式激活蛋白1 克隆 分子生物学 生物信息学
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表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白重组腺病毒的构建及免疫原性的初步分析 被引量:3
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作者 宋菲菲 康震 +4 位作者 齐艳君 袁颖烁 张守峰 张乐萃 扈荣良 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1449-1454,共6页
拟构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)QS10株S1蛋白的重组复制缺陷型人5型腺病毒,并在本动物上进行初步的免疫学试验。通过RT-PCR获得S1基因,插入腺病毒表达系统穿梭质粒,构建重组穿梭质粒pac-Ad5CMV-S1,转染293AD细胞获得表达S1蛋白的... 拟构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)QS10株S1蛋白的重组复制缺陷型人5型腺病毒,并在本动物上进行初步的免疫学试验。通过RT-PCR获得S1基因,插入腺病毒表达系统穿梭质粒,构建重组穿梭质粒pac-Ad5CMV-S1,转染293AD细胞获得表达S1蛋白的重组腺病毒。PCR检测显示,S1基因已重组到腺病毒基因组;间接免疫荧光和Western blot检测证明该重组病毒在293AD细胞中真实表达了具有免疫反应性的IBV S1糖蛋白。重组病毒培养滴度可达到107 TCID50.mL-1。免疫接种SPF鸡后,通过ELISA检测,免疫鸡产生了针对IBV的特异性抗体。作者成功构建了表达IBV S1蛋白的重组腺病毒,该重组病毒可在SPF鸡体内诱导产生IBV特异性抗体。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 s1蛋白 人5型腺病毒载体 免疫原性
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乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2基因的克隆化研究 被引量:6
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作者 郭江 成军 +4 位作者 纪冬 赵龙凤 王建军 刘妍 刘蔚 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2004年第4期212-215,共4页
目的 :应用抑制性消减杂交 (SSH )技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 :以HBV前 S1蛋白表达质粒 pcDNA3 1( -) p... 目的 :应用抑制性消减杂交 (SSH )技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 :以HBV前 S1蛋白表达质粒 pcDNA3 1( -) pre S1转染HepG2细胞 ,以空载体 pcDNA3 1( -)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HBV前 S1反式激活作用的新的靶基因。结果 :对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被前 S1蛋白反式激活 ,故命名为前 S1反式激活蛋白 2 (PS1TP2 ) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY42 6673。PS1TP2基因的编码序列全长为 5 73个核苷酸 (nt) ,编码产物由 190个氨基酸残基 (aa)组成。结论 :HBV前 S1蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要作用 ,最近的研究表明前 S1蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的免疫应答水平 ,引起病变。HBV前 S1反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究HBV前 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前-s1蛋白 反式激活蛋白2 基因克隆化
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乙型肝炎病毒前S1抗原/抗体检测及其临床意义 被引量:6
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作者 李兴禄 邱君凤 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第12期1171-1172,共2页
目的 探讨乙型肝炎病毒前S1蛋白与乙型肝炎病毒复制的关系及其在临床上的应用。方法 通过对 10 1例乙型肝炎患者血清进行“两对半”、HBV DNA和前S1蛋白的检测分析。结果  10 1例HBsAg阳性与HBV DNA同时阳性的血清 ,Presl检出率为 94... 目的 探讨乙型肝炎病毒前S1蛋白与乙型肝炎病毒复制的关系及其在临床上的应用。方法 通过对 10 1例乙型肝炎患者血清进行“两对半”、HBV DNA和前S1蛋白的检测分析。结果  10 1例HBsAg阳性与HBV DNA同时阳性的血清 ,Presl检出率为 94 .1% ,HBeAg/Ab的阳性率分别为 5 8.4 %和 30 .7% ;78例preS1Ab阳性血清中 ,抗HBs阳性率为 4 7.4 % ,抗HBe阳性率为 2 8.2 %。结论 乙型肝炎病毒前S1蛋白表达主要在HBVDNA复制期 。 展开更多
关键词 检测 乙型肝炎病毒 乙肝病毒前s1蛋白 抗原 抗体 乙型肝炎
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鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白抗原表位多肽的预测、鉴定及免疫效果的初步研究 被引量:5
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作者 范文胜 朱丹 +5 位作者 张愉 廖健淇 王露 雍璐 韦平 磨美兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期2257-2264,共8页
旨在对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120株S1蛋白的B细胞及T细胞可能的表位进行预测并合成相应的多肽,然后免疫小鼠,并分析其免疫效果,以验证候选表位多肽的免疫原性。利用表位预测软件筛选并化学合成针对IBV H120株S1蛋白的5条表位多肽,... 旨在对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120株S1蛋白的B细胞及T细胞可能的表位进行预测并合成相应的多肽,然后免疫小鼠,并分析其免疫效果,以验证候选表位多肽的免疫原性。利用表位预测软件筛选并化学合成针对IBV H120株S1蛋白的5条表位多肽,然后免疫小鼠,通过间接ELISA、中和试验和流式细胞技术检测各表位多肽诱导的特异性抗体、中和抗体和外周血T细胞亚群。ELISA检测结果显示,5条表位多肽均具有良好的反应原性,免疫小鼠的血清效价高低顺序依次为Pep76-106>Pep240-257>Pep511-537>Pep403-421>Pep135-172;中和试验结果表明,5条多肽免疫小鼠的血清中和滴度均高于空白对照组,其高低顺序依次为Pep240-257=Pep403-421=Pep511-537>Pep76-106=Pep135-172;流式检测结果表明,5条多肽免疫小鼠在CD3^+、CD4^+CD8-、CD8^+CD4-T淋巴细胞水平上均极显著高于空白对照组(P<0.01),CD3^+T及CD4^+CD8-T淋巴细胞数大小顺序依次为Pep403-421>Pep240-257>Pep76-106>Pep511-537>Pep135-172,CD8^+CD4-T淋巴细胞数大小顺序依次为Pep403-421>Pep76-106>Pep511-537>Pep240-257>Pep135-172。合成的5条表位多肽中,Pep240-257、Pep76-106和Pep403-421可以诱导体液免疫,Pep403-421可以诱导细胞免疫,其中,Pep403-421可以同时诱导细胞免疫及体液免疫。本研究结果为深入了解S1蛋白的免疫学特性以及研发诊断试剂和有效表位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 H120株 s1蛋白 表位多肽 特异性抗体 中和抗体 T淋巴细胞亚群
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HBV-DNA含量升高患者血清PreS1抗原和其他标志物相关性分析 被引量:3
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作者 张婷 廖伟娇 +2 位作者 陈涛 高俊 温丹萍 《热带医学杂志》 CAS 2007年第11期1106-1107,1110,共3页
目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与HBV-DNA、HBV血清标志物(HBV-M)和ALT之间的相关性和临床应用价值。方法收集380例荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量升高患者血清,用酶联免疫法(ELISA)检测乙肝病毒前S1抗原和HBV血清标志物、用速率法检测... 目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与HBV-DNA、HBV血清标志物(HBV-M)和ALT之间的相关性和临床应用价值。方法收集380例荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量升高患者血清,用酶联免疫法(ELISA)检测乙肝病毒前S1抗原和HBV血清标志物、用速率法检测ALT。结果380例HBV-DNA含量升高乙肝患者中,PreS1的阳性率为84.6%,HBeAg阳性率为67.8%,两者比较差异有统计学意义(P<0.005);在各种模式HBV血清标志物中,HBeAg阳性组PreS1阳性率和ALT异常升高与HBeAg阴性组比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着HBV-DNA含量的增加,HBeAg和PreS1的阳性率也增加,HBV-DNA拷贝数为5×102~1×105范围时,PreS1的阳性率高于HBeAg阳性率(P<0.005),当HBV-DNA拷贝数高于1×105时,HBeAg阳性率与PreS1阳性率相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙肝病毒前S1抗原和HBeAg两者阳性率与HBV-DNA含量密切关联,乙肝病毒前S1抗原检测可作为乙肝病毒复制、传染性及肝细胞损伤的指标,同时也可用于指导临床由于病毒变异和其他原因造成HBeAg阴性乙肝患者的诊断和治疗。 展开更多
关键词 乙肝病毒前s1抗原 HBV—DNA HBV血清标志物 ALT
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共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒部分生物学特性测定 被引量:2
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作者 王云峰 石星明 +9 位作者 王玫 刘胜旺 童光志 崔红玉 木古丽 徐灵龙 何来 贺笋 葛俊伟 李一经 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1077-1082,共6页
将共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IFNγS1)接种4周龄SPF鸡,免疫3周后用异源病毒LSC99I株攻击,考察重组疫苗对异源病毒攻击的保护作用。结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中很快出现抗体;外周血中C... 将共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IFNγS1)接种4周龄SPF鸡,免疫3周后用异源病毒LSC99I株攻击,考察重组疫苗对异源病毒攻击的保护作用。结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中很快出现抗体;外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分含量略高于非免疫对照组,但这种差异并不显著。LSC99I株IB病毒攻击后的保护率结果表明,免疫组的发病率为50%(5/10),死亡率为20%(2/10),非免疫对照组的发病率为100%(10/10),死亡率为50%(5/10);另外免疫鸡的病理损伤程度与非免疫对照组相比,二者差异不明显,在排毒时间和排毒量上也没有明显变化。体重分析结果显示,攻毒前免疫组与对照组相比,体重均没有显著变化,但攻毒后免疫组鸡体重增长的幅度要高于非免疫对照组。从以上结果可以说明,重组疫苗虽然能在动物体内很好地表达,但不能对实验动物产生很好的保护作用,而鸡干扰素-γ基因能在动物体内表达并发挥其免疫调节作用,减轻了重组疫苗对体重增长的影响。 展开更多
关键词 传染性支气管炎 重组鸡痘病毒 干扰素-Γ s1蛋白
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