重组禽呼肠孤病毒S1133σ3基因表达及其免疫原性研究

【目的】构建禽呼肠孤病毒(ARV)S1133σ3基因的真核重组质粒,研究其表达蛋白的免疫原性,为研发ARV基因疫苗奠定基础。【方法】采用RT-PCR对ARVS1133毒株的σ3基因进行RT-PCR扩增,扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接后,转化大肠杆菌DH5α,然后提取重组质粒的DNA,经双酶切、PCR扩增鉴定和纯化。以阳性重组质粒pcDNA3.1-σ3免疫7日龄SPF雏鸡,同时设灭活S1133、表达σ3蛋白及生理盐水对照,二次加强免疫两周后,采用Westernblotting检测鸡群血清抗体;并用S1133毒株进行攻毒,4d后进行ARV检测。【结果】重组质粒pcDNA3.1-σ3的双酶切和RT-PCR扩增鉴定结果一致,均能扩增出约999bp目的条带;免疫攻毒试验结果表明,pcDNA3.1-σ3处理、灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为7.4%、3.7%、11.1%和29.6%,pcDNA-σ3处理与生理盐水处理的差异显著(P<0.05),但与灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理的差异不显著(P>0.05);病毒检出部位最高是关节,其次是胸腺和肾脏,胸腺检出率为零。【结论】真核表达ARVS1133σ3蛋白具有较好的免疫保护,可作为免疫抗原进行下一步的疫苗中和试验。

呼肠孤病毒弱毒S1133株特性研究

呼肠孤病毒S1133株细胞毒在鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长良好,每0.1mL病毒液可达106.5～107.5TCID50。以104.5TCID50/只接种3周龄SPF雏鸡无致病性。免疫雏鸡可抵抗强毒足垫攻击,未免疫对照鸡则不能抗强毒攻击。表明该毒株安全且具有良好的免疫原性。