转录组分析揭示荷叶离褶伞菌多糖LDS-1抗小鼠S180肿瘤的分子机制

以荷叶离褶伞菌多糖LDS-1、甘露聚糖肽和空白对照作用下的小鼠S180肿瘤细胞为研究材料,运用RNA-Seq测序技术进行生物信息学分析,结果显示LDS-1组、甘露聚糖肽组和空白对照组分别获得8.27、 8.35和8.97 G的分析数据.高表达基因(FPKM>2 200)分析显示LDS-1主要通过下调Rplp1基因调控细胞分裂,将S180细胞停滞在G1期以抑制其分裂.差异基因分析结果显示LDS-1主要通过上调Alb、 Timp4、 Apoa1基因调节蛋白表达或者细胞黏连性,抑制S180肿瘤细胞迁移.KEGG(京都基因与基因组百科全书)通路富集结果显示, LDS-1抑制S180肿瘤生长的关键基因主要富集在过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路中,上游Fabp3基因下调,激活下游Apoa1、Slc27a2和Adipoq等多个基因上调,调控S180细胞的脂质代谢和胆固醇代谢. LDS-1能够通过调控高表达关键基因Rplp1,差异表达关键基因Alb、 Timp4、 Apoa1,以及PPAR信号通路抑制S180肿瘤细胞的增殖分裂、能量获取和迁移侵袭.

草黄口蘑多糖对S180荷瘤小鼠抗肿瘤活性分子机制研究

多糖作为口蘑属真菌的主要功能成分之一,具有免疫调节、抗氧化及抗肿瘤等活性。为明确草黄口蘑多糖的结构特征及其对S180荷瘤小鼠抗肿瘤活性相关分子机制,该研究以草黄口蘑子实体经热水浸提法提取的草黄口蘑多糖[Tricholoma lascivum (Fr.)Gillet polysaccharide,TLG-1]为实验材料,初步解析TLG-1结构,以S180荷瘤小鼠为模型检测体内抗肿瘤活性,并采用转录组测序技术对S180肿瘤组织总RNA进行测序分析。结果表明,TLG-1重均分子质量为13 442 Da,由木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖4种单糖组成,其比例为1.57∶1.45∶2.84∶4.14。TLG-1可显著抑制荷瘤小鼠S180肿瘤的生长(P<0.01),抑瘤率为53.8%。转录组测序分析显示,TLG-1能显著上调mt-Co1、Prlr、Foxa1以及下调Pitx2、Rplp1、Eef1a1及Lgals1等基因,影响S180肿瘤细胞的代谢途径,调控细胞周期并抑制上皮间质转化过程。基因本体富集分析表明,TLG-1可激活细胞因子介导的信号通路,引发细胞免疫。京都基因与基因组百科全书富集分析显示,在Jak-STAT信号通路中的Il21、Il12rb2、Il12b、Il2ra、Il2rb、Il2rg、Il15ra和Ifng等基因显著上调,通过转换肿瘤相关巨噬细胞表型及分泌干扰素-γ等,增强小鼠抗肿瘤免疫应答。该研究结果为草黄口蘑多糖的开发和利用提供了一定的理论基础。

双黄连可溶性粉对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞C3b和Fc受体的影响

旨在探究双黄连可溶性粉对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞表面C3b受体、Fc受体活性的影响,为扩大双黄连可溶性粉临床使用范围提供科学依据。以双黄连可溶性粉为研究材料,S180荷瘤小鼠为研究对象,YC-花环、EA-花环试验为研究手段,巨噬细胞C3b、Fc受体活性为检测指标,研究双黄连可溶性粉对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞C3b、Fc受体活性的影响。结果显示,小鼠接种S180瘤细胞,荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞Fc、C3b受体活性不受影响,免疫抑制剂环磷酰胺具有降低C3b受体活性的作用(对Fc受体活性没有影响),连续给予4 d~14 d不同剂量的双黄连口服液,荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞Fc、C3b受体活性增强,吞噬能力增强,作用优于或相当于黄芪多糖。研究结果为双黄连可溶性粉的临床应用研究提供了科学依据。

红芪总多糖诱导S180瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究红芪总多糖(THPS)诱导小鼠S180瘤细胞凋亡作用及其机制。方法:昆明小鼠60只接种S180瘤后随机分为5组。(1)模型组(S):生理盐水腹腔注射,(2)环磷酰胺组(CY):CY腹腔注射,(3)THPS低剂量(H100),(4)THPS中剂量(H200)和(5)THPS高剂量组(H400):分别给予THPS低剂量、中剂量和高剂量腹腔注射,14 d后处死小鼠。电镜观察各组瘤细胞的形态,激光共聚焦(LSCM)测定每组瘤细胞DNA、RNA含量、细胞内钙离子浓度、自由基含量及线粒体膜电位。结果:中剂量的THPS可明显升高细胞内钙离子浓度、自由基含量及降低线粒体膜电位和瘤细胞DNARNA含量的作用。结论:THPS中剂量通过升高细胞内钙离子浓度、自由基含量及降低线粒体膜电位诱导小鼠S180瘤细胞凋亡。

熟地黄多糖对H_(22)、S180荷瘤小鼠抑瘤作用及存活时间的影响

目的:探讨熟地黄多糖对H22腹水瘤、S180肉瘤小鼠抑瘤作用及生存时间的影响。方法:观察熟地黄多糖对H22、S180荷瘤小鼠的抑瘤率、生命延长率、肝/体比、脾脏指数等指标的影响。结果:与模型组比较,熟地黄多糖组抑瘤率、生命延长率、肝/体比、脾脏指数明显改善(P<0.05)。结论:熟地黄多糖能明显地抑制H22、S180肿瘤生长,延长荷瘤小鼠存活时间,并能保护小鼠的肝脏、脾脏和体质量。

中药复方抑瘤饮影响荷S180瘤小鼠免疫功能的动态研究

研究荷S180瘤小鼠灌服中药复方抑瘤饮(简称抑瘤饮)不同时间点脾细胞免疫功能的动态变化,揭示其体内抗瘤的免疫机制。于BALB/c小鼠右腋皮下接种S180细胞,24 h后,抑瘤饮组开始每日灌服抑瘤饮,对照组灌服等量凉开水。分别于灌服第0、10、20、30、40天处死动物,称取体重和瘤重;无菌获取脾细胞,MTT法检测NK细胞杀伤活性、ConA诱导转化及IL-2诱生活性,流式细胞仪检测CD4+细胞和CD8+细胞百分率。结果显示,抑瘤饮对小鼠体内S180移植肿瘤的生长,有明显的渐增性抑制作用;抑瘤饮能够明显逆转S180移植肿瘤对小鼠脾细胞的NK细胞杀伤率、转化指数、IL-2诱生活性、CD4+细胞和CD8+细胞百分率的抑制作用,且逆转作用呈时间依赖性增强。表明抑瘤饮体内能够渐增地上调被S180移植肿瘤抑制的免疫功能,从而发挥抗瘤作用。

白花蛇舌草多糖对S180和H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的研究白花蛇舌草多糖对S180和H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫器官的影响。方法应用肉瘤S180、肝癌H22荷瘤小鼠作为动物模型,连续灌胃给药10 d后脱颈椎处死,剥离肿瘤、胸腺、脾脏,称质量,计算抑瘤率及胸腺、脾脏指数。结果分别以30,20和10 mg.kg-1剂量的白花蛇舌草多糖灌胃,对肉瘤S180的抑制率分别为36.09%,28.66%和17.54%,对肝癌H22的抑制率分别为49.68%,40.47%和27.19%,相比模型组有显著性差异(P<0.05),对荷瘤小鼠的胸腺指数、脾脏指数无明显影响。结论白花蛇舌草多糖对S180和H22荷瘤小鼠均有抗肿瘤作用,并呈现一定的量效关系。

纳米中药对S180荷瘤小鼠肠道菌群影响的研究及其防治作用

目的研究纳米中药对S180荷瘤小鼠肠道菌群的影响及其抑制作用。方法将S180荷瘤瘤株以2×105/(0.2 m l.鼠)用注射器接种于小鼠右前肢腋下,建立实体瘤模型,肿瘤发生率为100%。观察小鼠的一般状态,用梯度稀释法和培养法测定小鼠4种肠道正常菌群,即乳酸杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌。用电子天平称瘤重并计算瘤抑制率。病理行HE(苏木精-伊红)染色,在光学显微镜下观察。结果与模型组比较,纳米中药组双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显升高,肠球菌和肠杆菌数量明显减少,肿瘤坏死因子数量增加,抑瘤率达64%,病理显示肿瘤组织间坏死灶明显,有大量的炎性细胞浸润。结论纳米中药提高机体免疫屏障功能,增强药物的靶向性,扶植机体正常菌群的生长,实现抗肿瘤的目的。

核桃青皮对S180实体瘤的作用研究

目的 考察核桃青皮的体内抗肿瘤作用。方法 采用荷瘤鼠实验测定核桃青皮有效组分对S180实体瘤的抑制率,试剂盒测定注射核桃青皮有小组分对荷瘤鼠血浆中SOD和MDA含量的影响。结果 核桃青皮对S180实体瘤的抑制率为46.7%,能明显降低荷瘤鼠血浆中MDA的含量,提高SOD的含量。结论 核桃青皮可明显抑制S180实体瘤的生长。

地鳖纤溶活性蛋白对S180和H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制及诱导细胞凋亡作用

目的研究地鳖虫纤溶活性蛋白(fibrinolytic proteinsof Eupolyphaga sinensis,EFP)对肿瘤细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法采用纤溶平板法检测了EFP纤溶活性;采用流式细胞术检测了EFP高、中、低浓度对小鼠S180和H22实体瘤组织细胞凋亡的诱导作用;采用免疫组织化学法检测了Caspase-3的表达;采用TRAP-PCR银染法检测了腹水瘤组织端粒酶活性。结果 EFP对S180和H22实体瘤有一定的抑瘤作用,对H22和S180腹水瘤细胞端粒酶活性有一定降低作用,可提高Caspase-3表达水平,诱导细胞凋亡。结论 EFP具有诱导S180和H22肿瘤细胞凋亡作用。

“吴氏消瘤散”抗S180实体瘤及免疫调节作用的实验研究

目的研究吴氏消瘤散对荷瘤S180小鼠肿瘤生长的影响,并观察其免疫调节作用。方法①S180移植瘤模型小鼠随机分为溶剂对照组(n=20)、环磷酰胺组(n=10)及吴氏消瘤散低、中、高剂量组(每组n=10),分别给予相应的干预措施,末次给药后24 h测定各组瘤重及抑瘤率。②将C57BL/6小鼠随机分为溶剂对照组(n=16)、香菇多糖组(n=8)及吴氏消瘤散低、中、高剂量组(每组n=8),分别给予相应的干预措施。以3H-TdR掺入法测定药物对脾T淋巴细胞增殖及NK细胞活性的影响。结果①与溶剂对照组比较,吴氏消瘤散各组小鼠瘤重明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。②与溶剂对照组比较,吴氏消瘤散各组小鼠能显著增强刀豆蛋白诱导的T淋巴细胞增殖,差异具有统计学意义(P<0.01)。与YAC-1细胞共同培养后,吴氏消瘤散组NK细胞活性明显升高,与溶剂对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论吴氏消瘤散具有抗肿瘤作用,并可促进小鼠脾T淋巴细胞增殖,增强NK细胞活性。

二氢卟吩e6在小鼠S180肉瘤中的代谢分布

探讨二氢卟吩e6在肿瘤组织中的富集情况,以便在给药后选择合适的超声辐照时间进行处理,达到最佳杀伤肿瘤细胞的效应.在S180荷瘤小鼠尾静脉注射二氢卟吩e6后不同时间点取材,采用荧光分光光度法测定不同组织提取液中二氢卟吩e6的荧光强度,研究其在不同组织中的分布以及代谢变化.实验表明,给药后0.5h内血浆、肝、肾、皮肤、肌肉和肿瘤组织内二氢卟吩e6含量均达含量较高的水平,之后逐渐下降;肿瘤组织中二氢卟吩e6含量在注射后4h内都在一个相对较高的水平,随后开始下降.不同组织对二氢卟吩e6的代谢能力有所区别,二氢卟吩e6在S180肉瘤中有一定的滞留作用,不同肿瘤在给药后应选择适当的时间点进行声照处理.

大蒜乳剂对小鼠S180腹水癌细胞作用的电镜和电镜细胞化学观察

本文证实大蒜乳剂具有显著抑制肿瘤的作用,荷瘤小鼠的生命延长率和抑瘤率分别为81％和72％。在此基础上,我们利用电镜和电镜细胞化学技术,观察大蒜乳剂对S180腹水癌细胞超微结构及几种酶活性的影响。单次用药后2、6小时,部分肿瘤细胞表面微绒毛肿胀、脱落,核染色质浓缩,胞质内出现大量空泡;48小时后,肿瘤细胞膜表面微绒毛肿胀,脱落现象仍很严重,但细胞核和细胞质的受损程度已经减弱;72小时受损肿瘤细胞恢复正常。连续4次给药后,肿瘤细胞数量明显减少,细胞体积变小,部分肿瘤细胞的损伤程度与单次用药后6小时基本相似。连续4次给药后,肿瘤细胞的碱性磷酸酶(AlPase)、5核苷酸酶(5Nase),葡萄糖6磷酸酶(G6-Pase)活性下降。实验结果证明,大蒜乳剂对小鼠S180腹水癌细胞有明显的细胞杀伤作用。

E_(838)对小鼠移植瘤S180放疗增敏的实验研究

目的观察E838的体内抗肿瘤活性,探讨其体内抑瘤作用的机制。方法取E838三个剂量对小鼠S180癌细胞实体瘤模型,进行体内抑瘤及合用137Csγ射线放射增效实验,测定肿瘤生长曲线、骨髓有核细胞(BMNC)数及脾脏、胸腺重量的变化,计算肿瘤生长抑制率。结果E838低、中、高三个剂量对小鼠S180的抑瘤率分别为49.52%、54.81%、53.85%,合用1Gy137Csγ射线抑瘤率分别为52.12%、59.62%、59.62%,其成瘤时间晚于对照组,肿瘤生长速度明显减慢,BMNC数均高于对照组,有统计学意义。结论E838对小鼠S180肿瘤的生长有明显的抑制作用,同时具有放射增敏效应。

松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用

目的探讨松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用。方法按标准方法给小鼠接种S180肉瘤细胞,随机分组,分别灌胃给予1 000、500、250 mg/kg松茸乙醇提取物,10 d后观察肿瘤抑制率、免疫器官质量分数、体重的变化及HE染色肿瘤组织结构。结果不同剂量松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤的抑制率分别为41.82%、36.36%、8.48%;脾脏质量分数、胸腺质量分数与肿瘤模型组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤的生长有抑制作用。

软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠免疫功能的初步研究

目的:研究软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠的免疫功能及灭活S180细胞对小鼠免疫功能的影响,分析其免疫机制。方法:用MTT法测定软骨多糖治愈的S180腹水瘤小鼠的血清、脾细胞及胸腺细胞对S180细胞和MCF-7乳腺癌细胞的生长影响,并以灭活的S180细胞对健康小鼠免疫,观察其对小鼠免疫功能的影响。结果:软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠的血清、脾细胞及胸腺细胞对肿瘤生长均有一定抑制效果。其中在不含胎牛血清的RPMI1640培养基培养下,治愈小鼠10%的血清对S180细胞和MCF-7乳腺癌细胞的抑制率分别为64.09%、73.48%,而其20%血清对两种肿瘤细胞的抑制率则分别为88.70%、96.80%。结论:软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠对肿瘤有一定的免疫能力。

穿心莲内酯对S180小鼠体内抗肿瘤作用的研究

观察穿心莲内酯对小鼠移植性肿瘤S180生长的抑制作用,并探讨其可能的机制。采用MTT法检测穿心莲内酯对体外培养的S180细胞增殖的抑制作用;建立小鼠移植瘤模型,采用荷瘤小鼠抑瘤率检测穿心莲内酯对小鼠肉瘤S180的体内抗肿瘤作用。以对荷瘤小鼠免疫器官质量,巨噬细胞对中性红的吞噬率,巨噬细胞产生TNF-α的影响评价穿心莲内酯对小鼠免疫功能的作用。结果穿心莲内酯能够剂量依赖型的抑制体外培养的S180细胞的增殖;25、50mg/kg的穿心莲内酯对移植性动物肿瘤S180的抑瘤率分别为45.27%和56.87%,对荷瘤小鼠脾脏和胸腺质量无明显的影响。经穿心莲内酯刺激后,小鼠巨噬细胞对中性红的吞噬功能明显地增强,并能显著刺激巨噬细胞分泌TNF-α。说明穿心莲内酯具有明显的体内抗肿瘤作用,其抗肿瘤活性是通过抑制肿瘤细胞的生长,激活小鼠巨噬细胞两方面共同产生的。

S180荷瘤小鼠血液中指标的变化

目的:通过对S180荷瘤小鼠血液中白细胞分类、血生化、T细胞亚群和各种酶类等指标的测定,确定S180荷瘤小鼠血液中各项指标的改变情况,为进一步的抗肿瘤试验提供指标选择的依据。方法:建立S180小鼠实体瘤模型,采用全自动生化分析仪、血球计数仪和流式细胞仪等测定荷瘤小鼠血中的总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、白/球(A/G)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、磷酸肌酸激酶(CK)、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞(GR%)、淋巴细胞(LY%)、单核细胞(MO%)、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8和丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等各项指标。结果:和正常动物对照组比较,S180荷瘤模型小鼠血生化指标中TP、ALB、GLB、ALT、AST、GLU、CR、LDH,白细胞计数和分类中的GR%、LY%、MO%,T细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8,以及混合功能氧化酶MDA、CAT、SOD等指标均出现不同程度改变,且具有统计学差异。结论:小鼠血生化指标中TP、ALB、GLB、ALT、AST、GLU、CR、LDH,白细胞分类中WBC、GR%、LY%、MO%,T细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8,以及混合功能氧化酶MDA、CAT、SOD等指标可作为动物抗肿瘤试验效果评价中的特异性或非特异性指标进行选择。

红曲霉M1发酵糙米代谢产物抗S180细胞增殖效应研究

以红曲霉M1分别发酵大米和糙米,比较其代谢产物的变化;采用MTT比色法,初步研究了Monacolin K标准品、红曲糙米及红曲大米乙醇提取物对S180小鼠腹水瘤细胞的抑制作用.结果表明:在MBR乙醇提取物中,可检测到MK的酸式构型,MK含量约为MR乙醇提取物的1.3倍.经红曲霉M1发酵后,MBR中γ-氨基丁酸(GABA)质量浓度达到2.98 mg/g,是MR乙醇提取物的3.1倍.MBR中桔霉素质量浓度低于MR.MK标准品、MBR及MR乙醇提取物均对S180小鼠腹水瘤细胞具有一定的抑制作用.MK质量浓度在3～50μg/mL,三者抑制S180小鼠腹水瘤细胞增殖效应随MK质量浓度的增大而增大.在MK含量相同的条件下,MR和MBR乙醇提取物的抑制效果显著大于MK标准品(P<0.01).

解毒消痰方抑制S180肉瘤VEGF TNF-α TGF-β1表达的实验研究

目的:探讨解毒消痰方对S180荷瘤鼠VEGF、TNF-α、TGF-β1的影响。方法:建立小鼠S180皮下移植瘤模型。解毒消痰方灌胃3周后处死,测定抑瘤率,采用免疫组化法检测小鼠肿瘤组织VEGF、TNF-α、TGF-β1的表达情况。结果:解毒消痰方抑瘤率为53%,VEGF、TNF-α、TGFβ1表达水平低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:解毒消痰方抑制S180肉瘤生长,机理可能与抑制VEGF、TNF-α、TGF-β1等炎症因子、生长因子有关。