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猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备
被引量:
7
1
作者
李洁森
孙荣航
+3 位作者
邝燕齐
陈路漫
刘青
郭霄峰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第12期4641-4651,共11页
为进一步探究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的抗原表位及其功能,本试验通过优化S1D基因的密码子,构建了S1D基因未优化的重组原核表达质粒pET-S1D和已优化的pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。使用SDS-P...
为进一步探究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的抗原表位及其功能,本试验通过优化S1D基因的密码子,构建了S1D基因未优化的重组原核表达质粒pET-S1D和已优化的pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1D、ΔS1D蛋白在大肠杆菌内得到正确表达,利用Image J软件对S1D、ΔS1D蛋白表达量进行灰度扫描,通过t检验分析两者差异性。将纯化的ΔS1D蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得单克隆细胞株。利用体内诱生法制备抗PEDV S1D蛋白的单克隆抗体腹水,使用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光试验3种方法对腹水效价及特异性进行检测和验证。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,表达S1D、ΔS1D蛋白的样品均在34 ku处出现正确的目的条带。t检验结果表明,S1D、ΔS1D两者蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。ELISA结果显示,腹水的抗体效价达到了1∶1000000,腹水与PEDV病毒粒子和纯化后的ΔS1D蛋白反应均呈阳性,与PEDV N蛋白、pET-32a(+)空载体蛋白和猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)5种病毒反应均呈阴性。Western blotting结果显示,腹水与ΔS1D蛋白和PEDV S蛋白分别在34和180 ku处有特异性条带出现,与pET-32a(+)空载体蛋白、正常Vero细胞蛋白均无特异性条带出现。间接免疫荧光试验结果显示,腹水及阳性对照组均能使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。密码子优化可在原核表达系统中显著提高重组蛋白的表达水平,本研究基于高效表达的ΔS1D蛋白,成功制备了1株能稳定分泌与PEDV S蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究PEDV S蛋白抗原表位及蛋白功能的研究奠定了基础。
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关键词
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
原核表达
s1d
蛋白
单克隆抗体
下载PDF
职称材料
猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量:
10
2
作者
丁振江
库旭钢
+2 位作者
闫贵伟
陈淑华
何启盖
《畜牧与兽医》
北大核心
2014年第11期1-5,共5页
将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释...
将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释度为1∶10。该检测方法敏感性高,可重复性好。该研究建立的间接ELISA方法为母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒IgA抗体的检测提供了一种快速简便的诊断方法。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
s1d
蛋白
乳汁
IGA
间接ELISA
原文传递
题名
猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备
被引量:
7
1
作者
李洁森
孙荣航
邝燕齐
陈路漫
刘青
郭霄峰
机构
华南农业大学兽医学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第12期4641-4651,共11页
基金
兽医微生物菌种资源标准化整理整合及共享试点工作(2005DKA21205-9)。
文摘
为进一步探究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的抗原表位及其功能,本试验通过优化S1D基因的密码子,构建了S1D基因未优化的重组原核表达质粒pET-S1D和已优化的pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1D、ΔS1D蛋白在大肠杆菌内得到正确表达,利用Image J软件对S1D、ΔS1D蛋白表达量进行灰度扫描,通过t检验分析两者差异性。将纯化的ΔS1D蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得单克隆细胞株。利用体内诱生法制备抗PEDV S1D蛋白的单克隆抗体腹水,使用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光试验3种方法对腹水效价及特异性进行检测和验证。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,表达S1D、ΔS1D蛋白的样品均在34 ku处出现正确的目的条带。t检验结果表明,S1D、ΔS1D两者蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。ELISA结果显示,腹水的抗体效价达到了1∶1000000,腹水与PEDV病毒粒子和纯化后的ΔS1D蛋白反应均呈阳性,与PEDV N蛋白、pET-32a(+)空载体蛋白和猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)5种病毒反应均呈阴性。Western blotting结果显示,腹水与ΔS1D蛋白和PEDV S蛋白分别在34和180 ku处有特异性条带出现,与pET-32a(+)空载体蛋白、正常Vero细胞蛋白均无特异性条带出现。间接免疫荧光试验结果显示,腹水及阳性对照组均能使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。密码子优化可在原核表达系统中显著提高重组蛋白的表达水平,本研究基于高效表达的ΔS1D蛋白,成功制备了1株能稳定分泌与PEDV S蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究PEDV S蛋白抗原表位及蛋白功能的研究奠定了基础。
关键词
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
原核表达
s1d
蛋白
单克隆抗体
Keywords
Porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)
prokaryotic expression
s1d protein
monoclonal antibody
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量:
10
2
作者
丁振江
库旭钢
闫贵伟
陈淑华
何启盖
机构
农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2014年第11期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金(31272572)
文摘
将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释度为1∶10。该检测方法敏感性高,可重复性好。该研究建立的间接ELISA方法为母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒IgA抗体的检测提供了一种快速简便的诊断方法。
关键词
猪流行性腹泻病毒
s1d
蛋白
乳汁
IGA
间接ELISA
Keywords
porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)
s1d protein
milk
IgA
indirect ELISA
分类号
S851.34 [农业科学—预防兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备
李洁森
孙荣航
邝燕齐
陈路漫
刘青
郭霄峰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021
7
下载PDF
职称材料
2
猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立
丁振江
库旭钢
闫贵伟
陈淑华
何启盖
《畜牧与兽医》
北大核心
2014
10
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