SAG2基因片段的体外扩增及在孕妇弓形虫感染诊断中的应用

目的 根据弓形虫表面抗原SAG2基因序列 ,设计弓形虫特异性引物一对 ,采用聚合酶链反应技术 ,进行弓形虫感染的检测。结果 从弓形虫DNA提取物中扩增出 5 93bp的基因片段 ,与预期的扩增片段大小相符 ;与弓形虫亲缘关系相近的三株恶性疟原虫、间日疟原虫、利什曼原虫和正常人全血核酸抽提物经扩增后均未见特异性的扩增条带 ;该检测体系至少可检测出相当于每 μl血样中 2个弓形虫的水平 ;将该检测体系用于临床孕妇产前诊断 ,5 6份标本中检查出 3例。结论 所建立弓形虫PCR检测体系灵敏、特异 ,适用于孕妇弓形虫感染的诊断。

柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG2基因的克隆与表达

根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。