HDAC抑制剂SAHA对脉络膜黑色素瘤细胞OCM1的作用

目的探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对脉络膜黑色素瘤(choroidal melanoma,CM)细胞系OCM1增殖侵袭的机制。方法使用显微镜观察不同浓度SAHA(0.625,1.25,2.5μmol/L)对OCM1细胞形态结构的影响,利用CCK-8实验观察不同浓度SAHA(0.625,1.25,2.5μmol/L)对OCM1细胞活力的影响,通过EdU染色法和克隆形成实验观察control组(0μmol/L SAHA)和1.25μmol/L SAHA组OCM1细胞增殖的变化,通过划痕实验和迁移侵袭实验观察control组和1.25μmol/L SAHA组OCM1细胞迁移侵袭能力的变化。采用Western blot实验检测不同浓度SAHA(0.625,1.25,2.5μmol/L)组中HDAC4、CyclinD1、c-Myc、E-cadherin和Snail蛋白表达水平。结果与control组相比较,光镜下明显可见0.625μmol/L SAHA组、1.25μmol/L SAHA组、2.5μmol/L SAHA组OCM1细胞增殖能力减弱,促进细胞皱缩和死亡,且细胞增殖活力降低(P<0.05)。与control组比较,1.25μmol/L SAHA组OCM1细胞增殖和迁移侵袭能力明显降低(P<0.05)。此外,与control组相比较,0.625μmol/L SAHA组、1.25μmol/L SAHA组、2.5μmol/L SAHA组E-cadherin蛋白表达逐渐升高,而HDAC4和Snail蛋白表达逐渐降低(P<0.05)。结论SAHA可通过抑制HDAC4明显降低OCM1细胞增殖活力和迁移侵袭能力。

SAHA诱导的p21表达致U251MG细胞抗凋亡效应

目的探讨SAHA诱导的p21在脑胶质瘤细胞U251MG中的生物学作用。方法采用免疫印迹技术、RAN干扰技术和流式细胞技术分析了p21的表达水平与SAHA引起的U251MG细胞周期阻滞和细胞死亡的相关性。结果与对照组相比较,p21-ShRNA组明显提高了U251MG细胞凋亡的比例,达到45%左右,活化的凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9表达水平明显增加;p21-ShRNA组细胞周期调控蛋白cdc25c、cdc2的磷酸化水平和总蛋白质水平也明显上调,clycinB1和磷酸化的H3水平明显提高。结论在SAHA处理条件下,p21下调使U251MG细胞阻滞于细胞周期G2/M期,促进了细胞凋亡。

SAHA在Leptin诱导的乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中的调控作用

目的为了阐明SAHA调控Leptin诱导的乳腺癌ER+细胞系MCF-7细胞增殖的分子机制,我们采用实时无标记细胞分析系统,动态监测Leptin对MCF-7细胞生长状况的影响。方法通过自动细胞分析仪Muse Cell Analyzer分析Leptin和SAHA对MCF-7细胞活力、细胞凋亡以及细胞周期产生的影响,并应用细胞凋亡抗体芯片测定Leptin和SAHA两种处理因素作用MCF-7细胞后相关凋亡通路分子表达变化的情况。结果低浓度Leptin对MCF-7细胞生长有诱导作用,其浓度为0.625 nmol·L^(-1)时作用效果最明显。细胞分析结果表明,SAHA能明显抑制Leptin诱导的MCF-7细胞增殖,经SAHA处理后MCF-7细胞活力明显下降,细胞凋亡率明显增多,细胞被大量阻滞于G_0/G_1期。凋亡抗体芯片筛查结果发现,SAHA可明显诱导MCF-7细胞内促凋亡因子Bax、Caspase-3的表达,并且与凋亡产生密切相关的TRAIL DR5、p21^(CIP1)蛋白的表达也明显上升,Claspin、Clusterin、XIAP、Survivin蛋白的表达明显下降,而Leptin对上述蛋白的表达具有相反作用。结论 Leptin、SAHA对乳腺癌ER^+细胞MCF-7的影响可能与乳腺癌细胞内凋亡通路激活有关,特别是与内源性线粒体凋亡通路引发的Caspase-3释放密切相关。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA阻断MAPK信号通路并诱导HL-60细胞凋亡

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂-SAHA(suberoylanilide hydroxamicacid)诱导人急性髓性白血病细胞株HL-60凋亡的分子机制。采用MTT法,瑞氏-姬姆萨染色和Hoechst33342/PI荧光染色方法,检测SAHA对HL-60细胞生长的抑制作用及细胞的形态变化;通过流式细胞术、Western-blot方法测定HL-60细胞的周期变化以及多种信号蛋白的表达。结果表明:SAHA可以呈剂量时间依赖性抑制HL-60细胞的生长;经2μmol/L SAHA处理12-48小时,HL-60细胞显示细胞周期被阻滞于G0/G1期;经Hoechst33342荧光染色后细胞核出现明显的凋亡小体结构;Western blot检测证实,SAHA作用HL-60细胞后caspase3被激活,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶[po-ly(ADP-ribose)polymerase,PARP]发生剪切,细胞发生凋亡;对细胞凋亡相关信号转导通路P44/42 MAPK及PI3K/Akt检测结果表明,涉及MAPK信号通路的Raf及ERK激酶磷酸化受到明显抑制,而Akt及其下游mTOR激酶的活性没有明显改变。结论:SAHA对HL-60细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与细胞增殖相关的P44/42 MAPK信号通路被阻断是细胞凋亡发生的机制之一。

SAHA靶定组织蛋白酶V诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬

目的探讨组织蛋白酶V(cathepsin V,CTSV)在辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬中的作用机制。方法以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的影响;Real-time PCR和Western blot检测SAHA对CTSV的mRNA和蛋白的作用;CTSV-siRNA转染细胞,Real-time PCR和Western blot检测CTSV的mRNA和蛋白的情况;细胞免疫荧光法检测SAHA对LC3B表达的影响;Real-time PCR和Western blot检测SAHA诱导自噬相关ATG分子和LC3的mRNA和蛋白的变化;Bafilomycin A1抑制自噬,随后Western blot测定p62蛋白水平,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的作用。结果SAHA在抑制MDA-MB-231细胞增殖的同时促进CTSV的表达。CTSV-siRNA转染细胞后,CTSV的mRNA和蛋白水平均明显降低。SAHA促进LC3免疫荧光点的增加,与CTSV-siRNA联合作用后可以恢复由CTSV-siRNA干扰引起的细胞自噬减弱。SAHA增强了Beclin1的表达,并伴有LC3B升高和mTOR降低。CTSV-siRNA的加入逆转了SAHA的效应。Bafilomycin A1阻断自噬后,被SAHA抑制的p62蛋白的表达和细胞活力明显增加。结论SAHA靶定CTSV诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬。

应用Saha方程计算氩等离子体的Hugoniot物态方程

应用Saha模型加Debye Huckel修正计算氩等离子体的Hugoniot物态方程 ,温度在 10 0 0 0 - 30 0 0 0K之间 ,压力在 0 .0 13 3 - 0 .16 6GPa范围内 ,非理想参数Γ≈ 0 .38。实验值和理论计算结果符合较好 ,说明Saha模型加Debye

组织蛋白酶B在SAHA诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中的调控作用

目的阐明组织蛋白酶B(cathepsin B,Cat B)在SAHA诱导的乳腺癌雌激素受体阳性细胞系MCF-7细胞凋亡中的调控作用。方法采用MTT法检测SAHA对乳腺癌MCF-7细胞生长状况的影响;应用ELISA方法测定SAHA作用于MCF-7细胞后相关蛋白表达变化的情况;通过Bio Station^(IM)活细胞工作站实时收集各种处理因素对乳腺癌MCF-7细胞增殖干预的形态学影响;并通过自动细胞分析仪Muse Cell Analyzer分析SAHA对MCF-7细胞活力和细胞凋亡的影响。结果 SAHA能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其最佳作用浓度为10μmol·L^(- 1),最佳作用时间为24 h。ELISA结果表明,SAHA能诱导乳腺癌MCF-7细胞中Cat B的表达。实时活细胞工作站成像实验从形态学上证明,Cat B抑制剂Cystatin C和SAHA联合应用可有效阻止SAHA对MCF-7细胞生长的抑制作用。细胞学实验结果表明,SAHA能使MCF-7细胞活力下降,细胞凋亡发生率明显增高;然而经过Cystatin C处理后的MCF-7细胞活力增加,细胞凋亡发生率下降。结论 Cat B在SAHA诱导乳腺癌雌激素受体阳性细胞MCF-7凋亡过程中具有重要的调控作用。

SAHA和TRAIL联合使用对乳腺癌雌激素受体阳性细胞MCF-7生长的影响

目的实时观测SAHA和TRAIL联合使用后对乳腺癌雌激素受体阳性细胞MCF-7生长的影响。方法实时无标记动态细胞分析系统(real time cell analysis,RTCA)动态监测各种处理因素对乳腺癌MCF-7细胞生长状况的影响并通过Biostation^(TM)活细胞工作站实时收集各种处理因素对乳腺癌MCF-7细胞增殖干预的形态学证据。结果xCELLigence RTCA实时无标记动态细胞分析系统显示,随着TRAIL的加入,SAHA对MCF-7细胞的抑制作用明显增强。SAHA和TRAIL的联合用药可能提高了SAHA对MCF-7细胞的敏感性。实时活细胞工作站成像实验进一步证明SAHA和TRAIL联合用药对MCF-7乳腺癌细胞的抑制作用强于SAHA或TRAIL单独用药。结论SAHA和TRAIL的联合使用对MCF-7细胞的生长具有协同抑制作用。

SAHA处理对猪手工克隆胚胎体外发育潜能的影响

为了探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对德保猪手工克隆胚胎（HMC）发育潜能的影响,试验摸索SAHA的适宜处理浓度[0（对照）,1.0,2.5,5.0,7.5,10.0μmol/L]和时间（0,6,12,24 h）;之后分为4组,SAHA组、体外受精（IVF）组、孤雌激活（PA）组、对照（HMCC）组,分别在体外发育的1细胞期、2细胞期、4细胞期、囊胚期收集胚胎,在相同时期下比较各组胚胎组蛋白H4K8乙酰化（Ac H4K8）水平差异和相关基因（HDAC1、HAT1、ASF1A、OCT-4）相对表达量。结果表明：7.5μmol/L SAHA处理囊胚率显著高于对照（P〈0.05）,12 h囊胚率显著高于0 h（P〈0.05）;所以适宜处理浓度为7.5μmol/L,适宜处理时间为12 h。在1细胞期、2细胞期、囊胚期,SAHA组Ac H4K8水平接近IVF组水平（P〉0.05）。在囊胚期,SAHA组HDAC1基因相对表达量接近IVF组（P〉0.05）;在囊胚期,SAHA组OCT-4基因相对表达量接近IVF组（P〉0.05）。说明SAHA可以使HMC胚胎Ac H4K8水平接近IVF水平,并纠正克隆胚胎乙酰化的异常,从而提高克隆胚胎发育潜能。

利用Saha方程和H线的Stark加宽研究闪电放电通道的电子密度

依据在西藏那曲用无狭缝光栅摄谱仪获得的1次云对地(CG)闪电回击过程的光谱,结合Gigosos得到的等离子体中电子密度的诊断方法,分别利用Hα和Hβ线的Stark加宽研究了闪电放电等离子体的电子密度.同时,运用Saha方程以及以往使用的谱线加宽公式计算了此次闪电放电等离子体的电子密度,并将3种方法所得结果进行了比较、分析,为完善闪电放电等离子体电子密度的诊断方法,进一步研究闪电等离子体特性参数提供了理论依据.

VPA和SAHA对内膜癌细胞凋亡和E-cad基因表达影响

目的:观察组蛋白脱乙酰基酶抑制制(HDACls)丙戊酸(VPA)和软木酰苯胺氧肟酸(SAHA)抑制子宫内膜癌细胞RL-952和HEC-1-B增殖过程中,细胞周期和凋亡情况以及E-cad基因表达的变化。方法:以VPA和SAHA作用于内膜癌细胞,应用噻唑蓝(MTT)比色法对细胞增殖进行检测。流式细胞仪检测细胞的周期变化和凋亡诱导作用,透射电镜观察细胞凋亡形态。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察药物作用后细胞内E-cadmRNA表达的情况。结果:VPA和SAHA作用HEC-1-B和RL-952细胞随着药物浓度的增加生长抑制率明显增加,VPA为6.77%～93.25%和3.24%～89.25%,SAHA为5.61%～97.36%和2.56%～87.85%(P<0.01);随着VPA和SAHA作用时间的延长(24～96h),HEC-1-B和RL-952细胞生长抑制率明显增加,VPA为42.41%～82.74%和36.17%～71.05%,SAHA为43.15%～82.09%和40.38%～85.93%(P<0.01)。RL-952和HEC-1-B细胞在VPA和SAHA作用后能增加在G_0/G_1期比例(60.24%/65.23%和64.46%/67.36%,P<0.01),诱导肿瘤细胞凋亡(26.83%/15.86%和16.02%/11.48%,P<0.01),出现特征性凋亡形态特征。VPA和SAHA作用后RL-952和HEC-1-B细胞E-cad mRNA表达增加,显著高于对照组(P<0.05)。结论:VPA和SAHA可有效地抑制内膜癌RL-952和HEC-1-B细胞增殖,有细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,对E-cad基因有明显的上调作用。

SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长

目的研究SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的作用和机制。方法以人乳腺癌MCF-7细胞为研究目标,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的作用;Real-time PCR和Western blot检测SAHA对CTSV的mRNA及蛋白表达的影响,同时检测利用siRNA干扰技术敲除CTSV后的细胞CTSV表达水平;细胞免疫荧光法检测SAHA对LC3II分子的作用;Real-time PCR和Western blot检测SAHA诱导自噬过程中相关ATG分子和LC3的mRNA和蛋白的变化;Bafilomycin A1抑制自噬,随后利用Western blot和Muse细胞分析仪分别检测p62蛋白水平和SAHA作用后的细胞活力。结果SAHA可以抑制MCF-7细胞的增殖,并促进CTSV的表达。CTSV-siRNA转染细胞后,CTSV的mRNA和蛋白水平均显著性降低。SAHA增加了LC3免疫荧光点的分布,与CTSV-siRNA共同作用可恢复由CTSV-siRNA敲减引起的细胞自噬减弱。SAHA在增强ATG4C和Beclin1表达的同时,LC3B也随之升高而mTOR则下降。抑制CTSV表达后也同时逆转了SAHA的效应。Bafilomycin A1阻断自噬后,被SAHA抑制的p62蛋白的表达和细胞活力显著增强。结论SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。

去乙酰酶抑制剂SAHA增强顺铂抗肝癌细胞活性研究

目的:探讨去乙酰酶抑制剂SAHA与化疗药物顺铂(DDP)联合应用对肝癌细胞HepG2增殖的抑制效果。方法:通过SAHA联合顺铂处理培养的肝癌细胞HepG2,用倒置显微镜观察细胞形态学改变,通过MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率。结果:MTT结果显示,2.5μmol/L SAHA与6.25μg/ml DDP联合应用后5d,HepG2细胞增殖抑制率达(95.47±2.38)%,显著高于单用SAHA组的(49.36±1.73)%和DDP组的(42.52±1.35)%(均P<0.05);流式细胞术结果显示,SAHA与DDP联合应用明显导致细胞S期减少,G2/M期阻滞;SAHA联合DDP组细胞凋亡率为(16.26±1.29)%,显著高于单用SAHA组的(9.25±0.81)%和DDP组的(5.48±0.19)%(均P<0.05);倒置显微镜下可见,联合治疗组中细胞皱缩及细胞数量明显减少。结论:SAHA与DDP联合应用能显著提高对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用。

SAHA、TRAIL与乳腺癌细胞凋亡

乳腺癌是影响女性身心健康的最常见恶性肿瘤之一。研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能够诱导乳腺癌细胞凋亡,并且SAHA和TRAIL的联合应用具有协同作用,SAHA可明显增强乳腺癌细胞对TRAIL作用的敏感性,因此SAHA和TRAIL的联合应用已成为治疗乳腺癌一种可喜的、有前景的治疗方法。

RTCA实时监控SAHA对乳腺癌MCF-7细胞生长状态的影响

目的:应用实时无标记动态细胞分析(RTCA)技术研究SAHA抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的情况。方法:采用RTCA系统动态监测不同剂量(0、0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)SAHA对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响。结果:5、10μmol/L的SAHA孵育48 h后可显著抑制细胞的生长,为SAHA抑制MCF-7细胞生长的最佳实验剂量和作用时长;而相关剂量的DMSO无抑制作用。结论:RTCA系统可准确地监测SAHA抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的情况。

SAHA联合顺铂对裸鼠宫颈癌抑瘤作用及其机制

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制药SAHA联合顺铂（cis-diamminedichloroplatinum,DDP）抑瘤作用及机制。方法饲养40只Balb/c-nu/nu雌性裸鼠,细胞悬液皮下注射法构建人宫颈癌Si Ha细胞株裸鼠移植瘤模型,当移植瘤8~10 mm大小时,36只荷瘤裸鼠被随机分为6组（对照组、25 mg/kg SAHA组、50 mg/kg SAHA组、5 mg/kg DDP组、25 mg/kg SAHA＋DDP组、50 mg/kg SAHA＋DDP组）,给药第17天拉颈处死裸鼠。对移植瘤的湿重、瘤体积、肿瘤生长抑制率输入SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果与各对照组比,联合组显示出最大程度的肿瘤体积的缩小及肿瘤生长抑制率增加（P〈0.05）。结论 SAHA与DDP联合治疗宫颈癌,其作用机制可能与组蛋白去乙酰化酶1（histone deacet ylase 1,HDAC1）蛋白水平下调有关。

SAHA抑制瘦素诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的分子机制

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA抑制瘦素诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的分子机制。方法:采用固相细胞凋亡抗体芯片技术测定瘦素和SAHA对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响。结果:SAHA显著增强MDA-MB-231细胞中Bax、p21^(CIP1)和p27^(KIP1)的表达,并降低Survivin蛋白的含量;经SAHA作用后MDA-MB-231细胞中Caspase-3和Clusterin的表达水平明显上升,而肿瘤坏死因子受体超家族成员1A(TNFRSF1A)的表达水平明显下降。结论:SAHA可通过激活乳腺癌细胞内凋亡途径,并抑制细胞周期的进程而达到抑制乳腺癌发生的目的。

用Hartree-Fock-Slater-Boltzmann-Saha模型研究等离子体细致组态原子结构及其状态方程

用平均原子自洽势计算等离子体的自由电子背景 ,通过在Hartree Fock Slater自洽场原子结构中引入背景修正计算离子组态结构 ,为Boltzmann Saha方程提供能级参数 ,再通过调节共同的背景电子实现Saha方程与Hartree Fock Slater方程的耦合 ,自洽求解等离子体细致组态原子结构 ,提高Saha方程的计算精度。以碳、铝等离子体作为算例 。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合ZD55-TRAIL溶瘤腺病毒对肝癌细胞杀伤作用的研究

研究组蛋白去乙酰化抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合ZD55-TRAIL对人肝癌细胞株的体外杀伤效果,实验采用MTT法检测SAHA、ZD55-TRAIL以及二者联合对肝癌细胞株Huh-7、Bel-7404、Hep3B以及人正常肝细胞株QSG-7701增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色对联合处理的细胞进行凋亡形态学观察;通过结晶紫实验进一步检测联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况;通过Western blot实验在蛋白水平上检测一些凋亡相关蛋白表达情况的变化。实验结果表明:SAHA联合ZD55-TRAIL处理3d后对肝癌细胞株Huh-7的增殖抑制率达到50%,对Hep3B、Bel-7404也达到近40%的杀伤效率,并且联合治疗后对人正常细胞株QSG-7701未见明显的毒副作用。同时结晶紫实验也证明联合治疗对肿瘤细胞的杀伤力强于用SAHA或ZD55-TRAIL单独使用。Western blot实验证明了药物和病毒的联合作用使促凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL的表达量明显减少,caspase-8和caspase-9蛋白也有相应剪切现象的发生。流式细胞仪同样检测出SAHA和ZD55-TRAIL联合作用对肝癌细胞有很好的杀伤作用。

伏立诺他(SAHA)对一株牛蒡内生真菌生物活性物质的激活

将不同浓度表观遗传修饰剂伏立诺他(SAHA)作用于一株来源于牛蒡叶的黑曲霉,并对激活后发酵液粗提物进行了杀虫抗菌活性测试、活性追踪和GC/MS分析。研究表明:激活后,黑曲霉发酵液粗提物的杀虫活性由激活前的LD50值由0.17mg·mL^(-1)提高至0.011mg·mL^(-1);并且粗提物对多种植物致病菌株均具有活性。对粗提物低极性组分进行GC/MS分析鉴定出了38个化合物,采用柱色谱方法对激活后的发酵液粗提物进行活性跟踪,最佳杀虫活性为LD50=7.304μg·mL^(-1)。