IFN-β通过STAT1诱导SARI表达抑制AML细胞增殖并促进凋亡

目的:探讨IFN-β诱导SARI表达对急性粒细胞性白血病(AML)细胞增殖、凋亡的作用,并筛选其潜在的调控分子。方法:qPCR、Western blot筛选SARI低表达的AML细胞作为实验细胞株;不同浓度IFN-β干预AML细胞,于不同时间采用qPCR、Western blot检测SARI表达,选取IFN-β作用的适当浓度和时间;采用RNA-Seq转录组测序及KEGG富集分析初步筛选IFN-β诱导AML细胞SARI表达的潜在调控分子;通过相应分子抑制剂联合IFN-β处理AML细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;明确该分子参与IFN-β诱导SARI表达对AML细胞增殖及凋亡的作用。结果:HL60和NB4细胞SARI表达相对较低,选为实验细胞株;1 ng/ml IFN-β作用12 h后AML细胞SARI表达升高且细胞增殖被抑制,凋亡增多;筛选STAT1为IFN-β诱导SARI表达的潜在调控分子;抑制STAT1后,IFN-β对AML细胞SARI表达、增殖抑制、凋亡促进的作用被明显逆转。结论:IFN-β可通过STAT1诱导AML细胞SARI表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

苏州地区5岁以下严重急性呼吸道感染(SARI)住院患儿的病毒病原学和临床特征分析

目的了解苏州地区5岁以下严重急性呼吸道感染(severe acute respiratory infection,SARI)住院患儿的病毒病原学构成、季节分布和临床特征,为苏州地区SARI病例的临床诊断治疗及防控提供线索和依据。方法对2011年3月至2012年2月期间在苏州大学附属儿童医院内科急诊病房及呼吸科病房住院治疗的5岁以下SARI病例采集鼻咽部分泌物进行实验室检测,同时收集患儿的既往病史及临床特征等相关信息。结果共纳入SARI病例746例,其中474例采集了鼻咽部分泌物。病毒阳性检出率为46.0%,其中流感病毒A型2.1%、B型11.0%、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)26.6%、腺病毒3.2%、副流感病毒Ⅰ型2.7%、Ⅲ型4.0%,未检测到副流感Ⅱ型病毒。RSV全年均有流行,流感A、B型病毒则主要在冬、春季流行。男性患儿RSV阳性率高于女性患儿(P<0.05);流感病毒、RSV、腺病毒、副流感病毒在不同年龄段SARI患儿的阳性率差异皆有统计学意义(P<0.05)。病毒检测阳性患儿咳嗽、喘息及肺炎的发生率显著高于阴性患儿(P<0.05);RSV及副流感病毒在肺炎患儿中的检出率明显高于其他诊断(P<0.05)。纳入研究的SARI患儿平均住院天数7.38天,中位数为7天。SARI患儿在病程中接受糖皮质激素治疗与住院时间密切相关。结论苏州地区5岁以下SARI住院患儿病毒检出率最高的是RSV和流感病毒,病毒感染可能是加重SARI病例临床症状的原因之一;不同病毒感染所致疾病特征有所差异,流感病毒以上呼吸道感染和肺炎为主,RSV以毛细支气管肺炎为主。

BATF2/SARI通过抑制p53依赖的NF-κB转录活性诱导肿瘤细胞凋亡

BATF2/SARI是一种新发现的转录因子,具有与BATF和BATF3类似的碱性亮氨酸拉链结构,可抑制AP-1转录因子家族(AP-1 transcription factors)活性,从而发挥抑癌作用.但目前关于BATF2表达调节与功能尚不十分清楚.本研究证明,BATF2通过抑制p53相关的NF-κB活性诱导细胞凋亡.实时定量PCR检测mRNA揭示,BATF2/SARI在p53-野生型的A549、HeLa细胞高水平表达,但在p53-缺失型的H1299细胞表达较低.基因转染结合MTT法、TUNEL法显示,过表达BATF2可诱导凋亡,抑制肿瘤细胞增殖;这种抑制效应与细胞p53表达水平相关.采用含NF-κB或AP-1结合位点的(人工合成)启动子驱动的荧光素酶报告基因活性分析发现,过表达BATF2既可抑制AP-1,又可抑制NF-κB转录活性;抑制NF-κB活性与细胞p53状态有关.RNA干扰敲减A549、HeLa细胞的p53表达可消除过表达外源BATF2引起的NF-κB活性下降.本研究结果提示,BATF2通过抑制NF-κB及AP-1转录活性诱导凋亡,从而抑制细胞增殖;BATF2对NF-κB活性的抑制作用依赖p53.因此,BATF2作为一种抑癌基因产物,其作用机制可能比当前的认识和预期更为复杂.

α/β干扰素通过上调SARI表达抑制淋巴瘤细胞的增殖

目的初步探讨α/β干扰素抑制淋巴瘤细胞增殖的分子机制。方法用IFN-α/β处理淋巴瘤细胞(Namalwa、JeKo-1)和白血病细胞(Jurkat、THP-1)24 h,CCK-8法检测IFN-α/β对上述细胞的增殖抑制效果;RT-PCR、real-time PCR、Western blot检测其SARI mRNA和蛋白水平的变化;对SARI基因启动子区的转录因子结合位点进行生物信息学预测。结果 IFN-α和IFN-β均可有效杀伤Namalwa和JeKo-1淋巴瘤细胞(P<0.05),且均能显著诱导淋巴瘤细胞SARI mRNA和蛋白的表达(P<0.05),但两种干扰素对Jurkat和THP-1白血病细胞的存活及SARI的表达均无显著影响(P>0.05);生物信息学分析显示,SARI启动子区含有转录因子STAT的结合位点。结论上调SARI表达可能是IFN-α/β抑制淋巴瘤细胞增殖的机制之一,而SARI的上调可能是由STAT介导的。

SARI过表达对CBFL细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果。设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE)3组。MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleavedPARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化。结果:Kasumi-1细胞具有c-KIT N822K突变。成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞。与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达;Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高;PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P<0.05)。结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3K/Akt信号通路失活有关。

SARI基因促进急性髓性白血病细胞凋亡机制的探讨

目的:通过慢病毒载体过表达SARI(Suppressor of AP-1,regulated by IFN)基因,探讨SARI基因促进急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia,AML)细胞凋亡的分子机制。方法:构建SARI基因过表达的慢病毒载体,感染AML细胞HL-60和NB4,应用实时荧光定量PCR和Western blot对感染后细胞进行过表达的鉴定。两株AML细胞均设空白对照组(CON组)、空载体对照组(NC组)及SARI组,应用Western blot检测SARI过表达后两株AML细胞组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bax和凋亡途径相关蛋白CytoC、Caspase8、Caspase9、Caspase3、Actived-Caspase3、PARP的表达变化。结果:SARI组细胞的SARI mRNA和蛋白表达水平均显著高于CON组和NC组(P<0.05),表明SARI过表达成功。SARI过表达的HL-60和NB4细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达均下调,促凋亡蛋白Bax表达上调。CytoC表达增加,Caspase8、Caspase9、Caspase3剪切激活,Actived-Caspase3上调,PARP下调,PARP剪切体上调。结论:SARI基因促进AML细胞凋亡可能是通过激活外源性凋亡途径及与外源性凋亡途径交叉的内源性凋亡途径。

SARI基因过表达对K562细胞系生物学影响的研究

目的:通过构建SARI慢病毒表达载体,探讨SARI基因过表达对K562细胞生物学功能的影响。方法:采用RT-PCR方法获得目的基因并重组p LOV.CMV.GFP质粒,构建pLOV.CMV.GFP-SARI表达载体。通过测序鉴定、病毒包装和滴度测定后,获得阳性病毒颗粒,并以病毒颗粒感染K562细胞系。采用Q-PCR及Western blot方法验证感染后K562细胞SARI基因转录和蛋白水平的表达情况,同时采用CCK-8法检测K562细胞的增殖情况,以流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期变化。结果:利用RT-PCR方法获得SARI基因并成功构建了含SARI基因的慢病毒表达载体,从分子及蛋白水平验证了其在感染后K562细胞中的高表达;与空白组和感染空载体的Mock组相比,过表达SARI载体组的细胞增殖显著受抑、细胞凋亡率增加,而细胞周期无显著变化。结论:SARI基因过表达可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,提示诱导SARI基因过表达可能对于抑制CML发生发展具有重要的作用。

SARI算法安全性分析和改进方法

SARI(Self-authentication and recovery image watermarking system)算法是LIN和CHANG小组提出的,可以承受JPEG压缩的多媒体内容认证技术,它的安全性取决于分组函数和阀值的选定,简单的线性函数和单一的阀值必然导致其破解系统的复杂度较低,理论分析和仿真实验结果说明这种模型的弱点.将加密技术与分组函数配合使用并采用编码技术可以有效地提高破解系统的复杂度,增加系统的安全性.

Zebularine对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖和SARI表达的影响

目的:探讨Zebularine对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖和SARI表达的影响。方法:选用MDA-MB-231细胞株,分别通过不同浓度的Zebularine作用细胞株24 h后收集细胞,运用MTT法测定Zebularine对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞的增殖;通过Western Blot检测Zebularine对乳腺癌细胞株SARI的表达。结果:随着药物浓度的增加,Zebularine能够明显抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖(P<0.05),Zebularine能够显著提高乳腺癌细胞株MDA-MB-231 SARI蛋白的表达(P<0.05)。结论:Zebularine通过抑制乳腺癌细胞增殖,促进SARI蛋白的表达,从而发挥肿瘤抑制作用。

过表达SARI通过抑制AP-1转录并下调抗凋亡分子Mcl-1的表达诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探讨过表达SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)对宫颈癌细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法在He La细胞和Ca Ski细胞转染可表达SARI的质粒后,使用Real-time PCR和Western blot检测细胞中SARI表达水平的变化;CCK-8法检测上述宫颈癌细胞模型的增殖;流式细胞术分析上述细胞模型的周期及凋亡;报告基因检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot检测抗凋亡分子Mcl-1及Bcl-2的表达。结果成功构建过表达SARI的细胞模型。SARI表达水平上调后,细胞增殖受到抑制(P<0.01);早期凋亡细胞增加但细胞周期无明显变化。转录因子AP-1的转录活性及Mcl-1的表达明显下调(P<0.05),但Bcl-2的表达无明显变化。结论宫颈癌细胞中过表达SARI诱导宫颈癌细胞发生早期凋亡,可能是通过抑制AP-1的转录并下调抗凋亡分子Mcl-1的表达来实现的。

SARI基因真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立

目的构建人SARI基因真核表达载体,并建立稳定转染的HeLa细胞系。方法采用RT-PCR技术从正常人外周血单个核细胞cDNA文库中扩增SARI基因序列,连接插入至pCMV-N-Flag真核表达载体,并对重组质粒进行酶切及测序鉴定;阳离子聚合物介导重组质粒转染HeLa细胞后,用G418抗生素筛选稳定转染的细胞系。间接免疫荧光检测Flag-SARI融合蛋白在HeLa细胞系中的表达定位。RT-PCR及Western blot检测SARI mRNA及蛋白的表达变化。结果双酶切和DNA测序表明pCMV-Flag-SARI真核表达质粒构建成功。经G418筛选后,RT-PCR和Western blot表明,转染重组质粒的HeLa细胞系中SARI mRNA及蛋白的表达明显升高。间接免疫荧光结果显示,Flag-SARI融合蛋白在HeLa细胞系的胞质和胞核中均有表达,且胞质荧光信号强于胞核。结论成功构建pCMV-Flag-SARI真核表达载体,表达的FlagSARI蛋白主要定位于HeLa细胞系的胞质中。

5-氮杂胞苷逆转SARI基因甲基化对人乳腺癌细胞生长和侵袭的影响

目的:观察5-氮杂胞苷(5-Aza)逆转SARI(suppressor of activator protein-1 regulated by interferon)基因甲基化对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和侵袭的影响。方法:用5和10μmol/L 5-Aza处理MDA-MB-231细胞72 h,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测SARI基因启动子的甲基化状态,RT-PCR的方法检测SARI基因mRNA的表达,Western blot的方法检测SARI蛋白的表达,MTT实验和集落形成实验检测MDA-MB-231细胞的生长状态,Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭能力。结果:MSP实验检测观察到,经5-Aza处理后,MDA-MB-231细胞中SARI基因启动子甲基化水平显著下降(P<0.01);RT-PCR和Western blot结果显示,经5-Aza处理后,MDA-MB-231细胞中SARI表达显著升高(P<0.05)。MTT和集落形成实验表明,经5-Aza处理后,MDA-MB-231细胞的增殖能力显著下降(P<0.05)。Transwell侵袭实验表明,经5-Aza处理后,MDA-MB-231细胞的侵袭能力显著减弱(P<0.05)。结论:5-Aza能够逆转MDA-MB-231细胞中SARI基因启动子甲基化状态,上调SARI表达水平,恢复其抑制肿瘤细胞生长和侵袭的能力。

AAV介导的BATF2/SARI过表达抑制肝癌细胞HepG2增殖

目的探讨腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的BATF2/SARI过表达对肝癌细胞HepG2细胞活力的影响及其分子机制。方法通过分子克隆技术构建AAV介导的BATF2/SARI过表达载体,用包装纯化后的AAV-BATF2感染HepG2细胞,MTT检测其对细胞活力的作用,荧光素酶分析其对NFκB转录活性的影响。结果重组AAV-BATF2载体构建成功,AAV-BATF2感染的HepG2细胞生长活力受到明显抑制,NFκB转录活性明显下调。结论重组AAV-BATF2病毒感染人肝癌细胞HepG2可抑制肿瘤细胞增殖,其对NFκB转录活性的抑制可能是其发挥作用的机制之一。

BCR-ABL抑制剂STI571对慢性髓系白血病细胞株K562中SARI基因表达影响的研究

为了探讨抑癌基因SARI(suppressor of AP-1regu lated by IFN)在慢性髓系白血病(CML)中表达调控可能的分子机制,收集了46名CML患者和40名健康志愿者外周血样品,使用实时定量PCR技术检测2组人群中SARI基因的相对表达水平。在体外以CML细胞株K562为研究模型,使用BCR-ABL抑制剂STI571(im atinib)处理K562细胞,用实时定量PCR技术检测SARI基因的相对表达水平。结果表明,CML患者外周血中SARImRNA相对表达量明显低于健康志愿者,2组间具有明显的统计学差异(p<0.001)。使用STI571(2.5μm o l/L)处理K562细胞24小时后SARImRNA相对表达量明显高于未处理K562细胞,两组间差异具有显著性(p<0.001)。结论:CML患者外周血SARImRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联,而且SARI基因表达下调与BCR-ABL抑制作用有关。本研究为CML患者基因治疗的研究提供了新线索。

SARI的发动机结构可靠性研究工作的一些回顾

从发动机研制和使用中的一些重大结构故障可以看出,结构可靠性是发动机研制中的头等重要工作之一。本文叙述了沈阳航空发动机研究所(SARI)对设计,研制和使用中的发动机做过的一些改进结构可靠性的工作,重点介绍了应力分析、光弹性试验、构件强度与疲劳试验以及在发动机试车中的应力实测,强调了必须在设计初期就综合考虑设计,制造和维修要求,采用计算机辅助设计、优化设计、损伤容限分析和可靠度分析等先进设计方法,才能最有效地提高结构可靠性。

CAD/CAM在SARI的应用

本文结合计算机辅助设计(CAD)/计算机辅助制造(CAM)在上海汽车研究所(SARI)的实践,介绍其基本内容。

347例SARI病例15种常见呼吸道病原特征分析

了解新疆维吾尔自治区人民医院住院严重急性呼吸道感染(Severe acute respiratory infection,SARI)病例呼吸道病原的构成及主要病原的流行规律,为SARI的防控提供线索和依据。应用多重PCR方法对2015年8月至2016年7月期间在新疆维吾尔自治区人民医院儿科、呼吸科、急诊科住院,且符合SARI病例定义的每周二、周四、周六新入院的患者进行检测。347份标本中检出14种呼吸道病原,未检测出衣原体,检出病毒阳性标本144份,阳性率为41.50%,检出前4位的病毒依次是,流感病毒72份、鼻病毒18份、呼吸道合胞病毒15份、偏肺病毒和副流感病毒各13份,阳性率分别为为20.75%,5.19%,4.32%,3.75%,3.75%,检出细菌阳性标本数为155份,阳性率为44.67%,其中肺炎链球菌阳性108份、流感嗜血杆菌阳性62份,肺炎支原体阳性13份,阳性率分别为31.12%、17.87%、3.75%;在108份肺炎链球菌阳性标本中41份标本合并病毒感染。新疆维吾尔自治区人民医院SARI病例病原主要以流感病毒,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌为主,各年龄组均有检出,检出病原阳性高峰为冬春季;5岁及以下标本中检出腺病毒和百日咳杆菌会增加收住ICU的风险。

SARI监测中儿科肺炎病例9种呼吸道病毒特征分析

目的了解新疆维吾尔自治区人民医院(简称人民医院)儿科住院严重呼吸道感染(severe acute respiratory infection,SARI)监测中肺炎病人感染呼吸道病毒病原学流行特征,为SARI监测中肺炎病例的治疗和防控提供线索。方法应用多重PCR方法检测2016年1月—2017年12月在人民医院儿科住院且出院诊断为肺炎的病例,以R语言统计学分析病例数据。结果 2016—2017年人民医院儿科出院诊断为肺炎的SARI病例主要症状为咳嗽(97.98%,χ~2=0.654)、咳痰(48.27%,χ~2=2.692)、听诊呼吸音异常(28.90%,χ~2=0.589),病毒组和非病毒组症状差异无统计学意义(P>0.05)、发病至住院时间间隔差异有统计学意义(t=2.203,P=0.028);346份样本中检出病毒224次、检出率64.74%,检出次数从高到低依次为呼吸道合胞病毒61次、流感病毒51次、副流感病毒30次、鼻病毒25次、偏肺病毒21次、腺病毒20次、冠状病毒7次、博卡病毒7次、肠道病毒2次,各亚型均有检出;多重感染率6.36%,36个月以上组感染呼吸道合胞病毒(χ~2=6.506,P=0.011)和乙型流感病毒(χ~2=10.206,P=0.001)与36个月及以下组比较差异有统计学意义,13.29%住院期间收住ICU,36个月及以下组9种病原均有病例入住ICU。结论儿科肺炎住院病例以呼吸道合胞病毒和流感病毒感染为主;从症状和入院前时间无法准确区分病原,快速诊断病原可为治疗和不同病毒感染病例的隔离提供依据。