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鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立
被引量:
1
1
作者
刘敏
杜航
+4 位作者
宋傲臣
高帅
唐丽杰
蒋烨
李一经
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期56-62,共7页
为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据Gen Bank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增S AV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控...
为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据Gen Bank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增S AV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品,以E2F:5'CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3',E2R:5'CCT-CAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'为引物,优化反应条件,建立SAV的RT-PCR检测方法。结果表明,该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段,引物最适反应浓度为1.0μmol·L-1,最佳退火温度为57.5℃,对SAV的三种亚型SAV1(V4640)、SAV2(V4619)、SAV5(V4638)检测结果均为阳性,对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性;并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg;以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测,检测结果一致。表明此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性较好,可用于SAV临床诊断和检测。
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关键词
鲑鱼甲病毒
sav
e2
核酸物质
RT-PCR
检测方法
下载PDF
职称材料
题名
鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立
被引量:
1
1
作者
刘敏
杜航
宋傲臣
高帅
唐丽杰
蒋烨
李一经
机构
东北农业大学动物科学与技术学院
东北农业大学动物医学学院
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期56-62,共7页
基金
国家科技支撑计划项目(2013BAD12B02)
文摘
为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据Gen Bank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增S AV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品,以E2F:5'CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3',E2R:5'CCT-CAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'为引物,优化反应条件,建立SAV的RT-PCR检测方法。结果表明,该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段,引物最适反应浓度为1.0μmol·L-1,最佳退火温度为57.5℃,对SAV的三种亚型SAV1(V4640)、SAV2(V4619)、SAV5(V4638)检测结果均为阳性,对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性;并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg;以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测,检测结果一致。表明此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性较好,可用于SAV临床诊断和检测。
关键词
鲑鱼甲病毒
sav
e2
核酸物质
RT-PCR
检测方法
Keywords
salmonid alphavirus
sav e2
nucleic acid
RT-PCR
detection method
分类号
S942.3 [农业科学—水产养殖]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立
刘敏
杜航
宋傲臣
高帅
唐丽杰
蒋烨
李一经
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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