人源化SCID-beige鼠模型的建立及口腔鳞癌荷瘤模型建立

目的:建立人源化SCID-beige小鼠模型,并将其应用于口腔鳞癌移植瘤模型的建立。方法:采用人外周血淋巴细胞腹腔注射的方法建立人源化SCID-beige鼠模型,评估其体内人源化免疫球蛋白水平,并采用常用的人舌癌细胞系建立荷瘤模型。结果:1、人源化SCID-beige鼠模型具有高水平的人源IgG;2、常用的人舌癌细胞系TCA8113、SCC9及SCC25均可成功建立荷瘤模型。结论:SCID-beige鼠可以用于人源化小鼠模型的建立,可以用于口腔鳞癌的相关免疫研究。

红芪多糖和硒化红芪多糖对口腔癌细胞作用的体外实验研究

目的研究红芪多糖(sedysarum polybotys saccharides,HPS)和硒化红芪多糖(selenizated hedysarum polybotyssaccharides,SE HPS)对口腔癌细胞SCC25的影响。方法取对数生长期的口腔癌细胞系SCC25,分别加入不同浓度(0、10、25、50、100、200、400μg/mL)的HPS和SE HPS,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT qPCR及Westernbloting观察细胞凋亡相关的指标。结果各浓度HPS和SE HPS均可抑制SCC25增殖,50μg/mLHPS和SE HPS抑制SCC25增殖的效果最强,并呈现时间依赖性,48h内抑制增殖效果明显,48h后效果达到平台期;SE HPS抑制SCC25细胞增殖的效果强于HPS(P<0.05)。流式细胞术结果显示50μg/mLHPS和SE HPS作用于SCC2548h,凋亡率分别为25.8%、30.8%,与对照组(0μg/mLHPS和SE HPS)相比差异有统计学意义(P<0.05);RT qPCR及Westernbloting结果显示50μg/mLHPS和SE HPS作用于SCC2548h,凋亡基因Fas/Fasl的mRNA与蛋白表达均上调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPS和SE HPS均可以抑制口腔癌细胞SCC25的增殖,SE HPS效果优于HPS,可能通过Fas/Fasl途径发挥诱导凋亡作用。

NRP-1在调控人舌鳞状细胞癌细胞分化中的作用

目的:构建神经纤毛素1(Neuropilin-1,NRP-1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对人舌鳞状细胞癌细胞株SCC25(squamous cell carcinoma 25)分化的影响。方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰NRP-1编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PL-KO.1/NRP-1-shRNA感染SCC25,western blot和实时荧光定量PCR检测NRP-1的表达,划痕实验和实时荧光定量PCR检测其对SCC25分化的影响。结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,SCC25转染了NRP-1-shRNA后NRP-1表达水平降低,干扰效率达65%。划痕实验结果表明NRP-1下调明显降低了SCC25的迁移能力。实时荧光定量PCR结果表明NRP-1下调可以导致SCC25上皮标记蛋白钙粘附蛋白(epi-thelial cadherin,E-cadherin)表达上调,而间充质标记蛋白纤粘蛋白(fibronectin,FN)和波形蛋白(Vimentin,VIM)表达下调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:慢病毒介导的NRP-1-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响SCC25的分化。

沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默内质网应激相关蛋白calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法将calnexin siRNA转染到舌鳞状细胞癌细胞SCC9和SCC25中,采用qRTPCR检测calnexin表达情况;Western blot实验进一步验证calnexin siRNA沉默效果。通过CCK8实验检测沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响;运用Transwell法检测沉默calnexin对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果qRTPCR显示calnexin siRNA能够有效沉默calnexin的表达;Western blot实验进一步证实calnexin siRNA对calnexin的沉默效果。CCK8实验显示沉默calnexin表达的第4天,第5天能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.01);Transwell实验提示沉默calnexin的表达能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移(P<0.001)。结论沉默calnexin可抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移。