蔓茎堇菜基因组DNA3种提取方法的比较研究

以SDS作为解离剂,采用常规SDS法、改进的SDS法及SDS高盐低pH法分离提取蔓茎堇菜基因组DNA.比较3种方法的提取效果,结果表明:常规SDS法DNA得率高但完整性及纯度较差;改进的SD S法D N A质量好但得率相对较低;只有SDS高盐低pH法是最为理想的提取方法,不同组织提取的DNA相对分子质量均大于48kb,260nm/280nm光密度比值在1.7～1.9之间,产率为479.0～543.9μg/g,所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切,并适于进行RAPD分析.

刺桫椤DNA的简便快速提取方法

采用 SDS高盐提取介质简便快速提取刺桫椤 ( Alsophila spinulosa)叶片 DNA,整个提取过程可在 1 0 0 min内完成 ,且对鲜叶或用硅胶快速干燥的干叶均适用 .提取的 DNA相对分子量为48kb,OD2 60 /OD2 80 =1 .84± 0 .0 3;DNA 得率分别为 :60 0～ 1 2 0 0 μg/( g·鲜叶 ) ,35 0～ 5 5 0 μg/( g·干叶 ) ;提取的 DNA无需经 RNase消化等后处理 ,即可用于限制性内切酶酶切和

草鱼消化道碱性蛋白酶的分析鉴定

试验结果表明,草鱼肠道粗提取物在pH 10.3有最高酶活力。SDS-底物-PAGE电泳表明,草鱼肠道粗酶中有4种碱性蛋白酶,其中3种是丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶),1种是非丝氨酸蛋白酶,它们的相对分子质量分别为:26 400、30 750、43 000、约105 000。

酶法制备玉米慢消化淀粉的研究

用α-淀粉酶和Bacillus stearothermophilus来源的分支酶(BE)对普通玉米淀粉连续处理,制备慢消化淀粉(SDS)。通过单因素实验和响应面实验,考察酶作用时间、酶添加量、酶解温度和淀粉浆质量分数4个因素对产物中SDS含量的影响,确定SDS的制备工艺,并对改性淀粉理化性质进行测定。酶法制备SDS最优工艺条件为:酶作用时间为6.5 h,酶添加量为320 U/g,酶解温度为75.5℃,淀粉浆质量分数为21.5%。在此条件下,SDS质量分数为37.28%。淀粉颗粒因酶解作用而具有致密规则的孔洞、短链比例增加、相对结晶度降低,促使SDS质量浓度提高,并且改性后的淀粉具有良好的溶解性和膨胀度。

海水养殖沉积环境微生物总DNA的提取方法研究

传统的微生物分离与培养技术：无法揭示微生物群落的动态变化．为了阐释虾池沉积环境微生态格局的原始组成情况，本研究先以TENP缓冲液去除沉积物中的腐殖酸。继之以溶菌酶-SDS温和裂解，其总DNA的提取效率达90％以上．所获DNA产量达2～20μg／g沉积物（湿），片段大小均在23kb左右，不经纯化即可直接进行PCR扩增和限制性酶切．以该DNA为模板进行PCR—DGGE分析，揭示了虾池沉积物丰富的微生物多样性，该方法是一种适用于虾池沉积物总DNA提取的简便、可靠方法．

福建柏总DNA的快速简便提取和鉴定

本文介绍了福建柏Fokieniahodginsii(Dunn)HenryetThomas总DNA的提取介质组成分 ,建立了一个快速、简便且高效提取和鉴定福建柏鲜叶、干叶、种子总DNA的方法。该方法所提DNA的产率分别为 :1 5 0～ 2 5 0 μg/g鲜叶 ,1 0 0～ 1 5 0 μg/g干叶和 1 4 0～ 1 6 0 μg/g种子 ;绝大多数粗提总DNAOD2 6 0 /OD2 80 =1 .80±0 .0 2 ;提取的鲜叶、种子和单种子胚乳总DNA皆为 4 8kb,而干叶总DNA为 5 0Kb ,都适于限制性酶切和RAPD反应 ;一般实验时间为 4h。该方法既不需氯化铯梯度离心和柱层析纯化 ,也不需氯仿 :异戊醇抽提 ,粗提的总DNA样品不经RNase消化即可用于RAPD反应或经RNase消化用于限制性酶切 ,因此 ,具有高产率、高纯度、高质量和快速简便等优点。尤其是它所提取的干叶DNA ,适于限制性酶切和PCR反应 ,解决了取材上的不便。实验中还发现 :( 1 )提取DNA之前去除叶绿素与否 ,对提取福建柏总DNA无明显影响。 ( 2 )只有去除RNA的福建柏总DNA样品 ,才能被限制性内切酶完全切开。 ( 3)RAPD模板中含RNA及一定量的蛋白质 ,均不影响扩增效果。 ( 4 )同一个体的鲜叶、干叶、种子总DNA样品 ,皆可得到完全一致的扩增产物。

适用于AFLP分析的泡桐DNA提取方法研究

分别采用3种方法提取了豫杂一号泡桐组培苗叶片DNA,并对其得率和质量进行了检测.结果表明,DNAkit,CTAB-Ⅰ和CTAB-Ⅱ法提取DNA的得率分别为0.250,0.284,0.312 mg.g-1;CTAB法提取的DNA片段大于DNAkit法;利用CTAB-Ⅱ法得到的DNA可被EcoRI,MspI和HpaⅡ完全酶切,该DNA经AFLP-PCR扩增电泳后,产物带型清晰,稳定,重复性好.CTAB-II法为泡桐DNA提取的最佳方法.

一种改良式质粒DNA提取方法的建立与应用

目的建立一种稳定、可靠的质粒DNA提取改良方法,探讨其在分子生物学实验研究中的应用价值。方法将含有目的质粒的菌株扩增后,运用改良后的碱裂解法进行质粒DNA小量提取,微量核酸仪测定提取质粒DNA的产量及纯度;采用琼脂糖凝胶电泳、内切酶酶切及质粒转染真核细胞鉴定提取质粒DNA的质量及转染效率。结果改良式质粒提取方法获得质粒DNA产量为3.2 mg/L菌液,A260/280=1.91;内切酶酶切完全;质粒DNA以超螺旋结构为主;真核细胞转染效率为20%左右。结论改良式质粒DNA抽提方法操作简单、实用,获得质粒DNA产量多、质量高,能达到分子生物学常规实验的要求。

早期限饲对肉鸡心肌易颤性和血清心肌酶活性、电解质水平的影响

艾维因商品肉鸡于 4～ 12日龄时进行 10 %限饲 ,分别于 2 5、32日龄进行心肌易颤性的评价和血清心肌酶活性、血清电解质水平的检测。结果如下 :(1)早期限饲可以提高肉鸡的输钾诱颤阈 ,表明可降低肉鸡的心肌易颤性 ;(2 )早期限饲可以降低血清心肌酶 (AST、L DH、CK)的活性 ,表明可增强肉鸡的心肌机能 ;(3)早期限饲对血清电解质水平无明显影响。

悬铃木叶片DNA提取方法研究

以悬铃木组织培养苗叶片为材料,比较了提取叶片DNA的4种方法:SDS-Ⅰ,SDS-Ⅱ,CTAB-Ⅰ,CTAB-Ⅱ,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶酶切、RAPD等方法进行鉴定.研究结果表明,4种方法提取的DNA的得率约为0 347～0 518μg·mg-1,分子量约为23kb,均可被酶切.此外,CTAB-Ⅰ和CTAB-Ⅱ提取的DNA可用于RAPD分析.综合考虑得率、纯度等因素,作者认为CTAB-Ⅱ法可作为悬铃木叶片DNA提取的最佳方法.

花生DNA快速简便提取方法的研究

在花生新鲜针叶和干叶ＤＮＡ提取过程中，应用ｐＨ值较低，无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质，其中加入２％的β－巯基乙醇可有效地防止次生代谢物质使ＤＮＡ变色。提取出的ＤＮＡ样品产率在９２．６～２１６．３１ｎｇ／ｍｇ．ｆｗ，ＤＮＡ质量和纯度较高，２６０ｎｍ／２８０ｎｍ光密度比值在１．８～１．９之间。所得ＤＮＡ可直接用于限制性内切酶酶切，并可用于随机引物ＰＣＲ扩增。该方法为花生分子生物学研究提供基础。

RF-RAPD分子标记在杏鲍菇菌株鉴定上的应用

本研究首先通过拮抗实验对5个不同来源供试杏鲍菇栽培菌株进行初步分类,进而采用RF-RAPD技术对供试菌株进行分析。结果显示,RF-RAPD分析结果与拮抗实验结果相一致,并且由于RF-RAPD同时采用了RFLP和RAPD两种分子标记,可更好地区分亲缘关系较近的香杏PL-3和京杏PL-10间的差异。由此可见,RF-RAPD是一种快速、准确鉴定杏鲍菇的新方法,可用于食用菌品种分类与鉴定。

运用PCR方法鉴别四种犬科动物的研究

建立了狐狸、貉子、水貂和家犬四种犬科动物的PCR鉴别方法。分别用狐狸、貉子、水貂和家犬的特异性引物对,以提取的狐狸、貉子、水貂、家犬的总DNA为模板进行PCR扩增,分别获得701、840、382、473bp的DNA片段,通过限制性内切酶,验证了该PCR扩增的特异性。结果表明,该方法可以有效鉴别出狐狸、貉子、水貂和家犬四种犬科动物。

阔叶榧总DNA的提取及其RAPD反应条件的研究

在阔叶榧新鲜针叶DNA提取过程中 ,应用 pH值较低 ,无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质 ,其中加入 2 %的 β 巯基乙醇可有效地防止次生代谢物质使DNA变色 .提取出的DNA样品产率在 83.7～ 197.5ng/mg .f.,DNA质量和纯度较高 ,2 6 0nm/ 2 80nm光密度比值在 1.8～ 1.9之间 .所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切 ,并可用于随机引物PCR扩增 .在优化RAPD各种反应条件研究中 ,确定了阔叶榧最佳RAPD反应体系为 :15 μL反应体系中含有 5 0mmol/LKCl、10mmol/LTris HCl (pH 9.0 )、0 .1%Triton 10 0、3nmol/ μLMgCl2 、0 .6nmol/ μLdNTPs、6 μg/ μLBSA、1UTaq酶、6 0ng引物、5 0～ 10 0ng左右的阔叶榧DNA .

超高压-限制性酶解法降低豆乳粉致敏性工艺优化

以传统湿法工艺技术制备豆乳粉为基础,对浆渣分离后的豆乳进行超高压-限制性酶解处理,降低豆乳粉致敏性。在单因素试验基础上,采用响应面分析法对超高压-限制性酶解制备低致敏性豆乳粉工艺进行优化,确定最优超高压-限制性酶解的工艺参数为超高压处理压强320.00 MPa、超高压处理时间15 min、酶解时间60 min、酶添加量0.3 U/g,此条件下致敏性降低率为88.09%,但制备的豆乳粉具有微苦味,需要进一步调配以改善口感。超高压处理与酶解具有协同效应,可显著提高豆乳粉蛋白质体外消化率、显著降低豆乳粉致敏性,对不同加工工艺豆乳粉进行蛋白质体外消化率、蛋白质分散指数、过敏原含量及蛋白电泳分析,进一步证明超高压与酶解的协同效应。

利用特异性SNP位点鉴定花生杂交F_1代真假杂种

以鲁花14、Tifrunner和四粒红为亲本通过正、反交获得的杂种F_1代群体为材料,结合亲本间特异性单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism,SNP）位点,建立起一套利用限制性内切酶酶切方法鉴定花生杂交F_1代真假杂种的技术。结果表明,真杂种表现出父、母本带型,而假杂种只表现出母本带型;4个组合中F_1代真杂种率为10.5%-36.7%。因此,该技术能够有效应用于花生杂交F_1代的真假杂种鉴定。

应用反转录聚合酶链式反应检测鸡Th1样淋巴因子mRNA表达的研究

应用反转录聚合酶链式反应(RT_PCR) 和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ConA刺激的情况下,其Th1 样淋巴因子mRNA的表达水平进行了研究。实验结果表明,ConA诱导培养3 小时的鸡脾细胞表达α_干扰素(ChIFN_α) 、γ_干扰素(ChIFN_γ)和白细胞介素_2(ChIL_2) 等鸡的Th1 样淋巴因子mRNA。未诱导但培养了3 小时的鸡脾细胞可表达ChIFN_α和ChIFN_γmRNA,而未检测到ChIL_2m RNA的表达。正常SPF鸡的脾细胞可表达ChIFN_αmRNA。本研究应用不同公司生产的反转录酶和Taq 多聚酶,取得了相同的结果。表明该方法具有很好的重复性,而且该法敏感而方便。

酶消化法分离培养原代肺动脉平滑肌细胞及免疫组化鉴定

目的建立体外胶原酶消化法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）及免疫鉴定的方法。方法采用I型胶原酶对PASMCs进行体外培养。在无菌环境下,分离提取雄性Sprague Dawley（SD）大鼠肺动脉主干,剥离外膜、剔除内皮细胞,经酶消化法,体外培养PASMCs。倒置相差显微镜观察PASMCs生长状态及特点;台盼兰测定细胞活力;免疫细胞染色法进行平滑肌α-肌动蛋白（α-SM actin）鉴定。结果酶消化法分离培养的PASMCs 3 d后,可见细胞贴壁呈梭形生长,6 d后生长迅速呈典型的峰-谷状生长,9 d后达90%融合。通过形态学观察及免疫荧光染色法鉴定表明：培养的细胞为PASMCs;细胞存活率为98.5%;原代培养8-10 d后即可传代,3-10代细胞生长迅速、细胞形态不易发生改变,可用于进行细胞实验。结论采用I型胶原酶消化法简单易行、可靠、PASMCs生长迅速、传代周期短的特点;尤为重要的是,培养的原代PASMCs可用于肺动脉高压和肺血管重构的研究工作。

东北虎幼体消化系统蛋白水解酶的初步研究

The kinds and activities of proteolytic enzymes in the digestive systems (tongue, esophagus, stomach, duodenum, liver, pancreas and large intestine) of two Amur tiger cubs (Panthera tigris altaica) were investigated using protein detection and SDS-G-PAGE. The results showed:1) the digestive system of Amur tiger cubs had 30 different kinds of proteolytic enzymes ; 2) the mostly optimal pH for these enzymes was a neutral environment, and an acid condition highly restrained their activity; 3) the proteolytic enzymes in the tongue and esophagus were fewer than in other digestive organs and their activities were weak as well; 4) the duodenum had the most kinds of proteolytic enzymes with the strongest activities under various pH conditions; 5) the 16 kD enzyme bands always existed under neutral and alkalescence pH conditions in all digestive organs except the tongue.

泡桐叶片DNA提取

以兰考泡桐组织培养苗叶片为材料,分别采用CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ、SDS-Ⅰ、SDS-Ⅱ四种方法提取叶片DNA,并对不同提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切、RAPD等方法的鉴定。结果表明,用四种方法提取的泡桐叶片DNA得率约为3.5-5.2μg/10mg,A260/A280约为1.7-1.8,A260/A230在2.0以上,分子量在23Kb以上,能够被EcoRⅠ、HindⅢ酶切,能够进行RAPD分析。综合考虑得率、纯度、质量等因素,以SDS-Ⅰ法为最佳方案。