内蒙古地区传统发酵酸马奶不同发酵时期乳清蛋白SDS-PAGE分析

[目的]探究内蒙古地区传统酸马奶发酵过程中乳清蛋白的变化情况。[方法]以从内蒙古锡林郭勒盟镶黄旗采集的马奶为原料制备传统发酵酸马奶,发酵温度为(22±2)℃,人工捣拌频率5次/d,每次300下;每隔12 h采集1次发酵0~96 h的酸马奶样品;离心提取酸马奶乳清蛋白样品,利用条件优化后的SDS-PAGE电泳技术分析酸马奶乳清蛋白在发酵过程中变化情况。[结果]优化后的SDS-PAGE电泳分析条件为:分离胶浓度12%,浓缩胶浓度5%,分离胶电泳电压180 V、电泳时间300 min,上样浓度0.5μg/μL,上样体积16μL,改良考马斯亮蓝法染色、脱色各12 h。在发酵0~12 h内,酸马奶乳清蛋白含量增加,在12 h时达到最高值(5.12μg/μL),之后随发酵时间延长呈下降趋势,发酵96 h时降低至3.92μg/μL。SDS-PAGE电泳图谱分析显示,在分子量10~70 kDa区间内共获得乳清蛋白有效条带13个。在发酵过程中,β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白3种蛋白质含量呈现不同程度的波动,发酵72 h时三者含量之和最高,占乳清蛋白总含量的85.73%,并且在发酵过程中始终保持较高水平,是传统发酵酸马奶发酵96 h内乳清蛋白的主要组分,其中,β-乳球蛋白含量最高,平均占乳清蛋白总含量的38.92%。分子量在20~40 kDa的酪蛋白含量在发酵24 h之后开始下降,至60 h时条带消失。分子量为10.33 kDa的蛋白质在发酵12 h内被消耗,60 h时再次出现且含量随发酵时间延长逐渐增加,在84 h时达到峰值,占乳清蛋白总含量的9.84%。分子量为49.80 kDa的蛋白质在发酵72 h之后开始出现,含量在96 h时达到乳清蛋白总含量的4.11%。与其他乳清蛋白组分相比,β-乳球蛋白和免疫球蛋白含量在发酵过程中变化较小。[结论]内蒙古地区传统发酵酸马奶在发酵96 h内,分子量为10~70 kDa的乳清蛋白含量表现出有规律的消长,主要被消化分解的蛋白质是酪蛋白。不同发酵阶段酸马奶乳清蛋白组成及含量存在一定差异,但原有主要组分β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白始终保持较高水平。自发酵中期开始,酸马奶乳清蛋白中相对分子质量较小的肽(10.33 kDa)所占比例逐渐升高,由此可见,传统发酵酸马奶中不仅保留马奶中乳清蛋白原有的营养价值,而且通过发酵还增添了易吸收的小分子量蛋白质。

SDS-PAGE凝胶电泳对驴皮胶及常见伪品胶中的蛋白分析研究

目的:研究驴皮胶及常见伪品胶马皮胶和牛皮胶的蛋白凝胶电泳行为。方法:自制3种皮胶,计算出胶率,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白含量,计算上样量,使上样量为20~30μg。垂直电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳,采用考马斯亮蓝及银染法显色。结果:3种皮胶的凝胶电泳行为相似,蛋白成分主要集中在分子量大于25 kDa段上,银染法灵敏度更高,可显示较多条带。结论:3种皮胶分子量分布宽泛,具有共同的条带,进一步可用多肽蛋白质谱鉴定技术对各混合物组分进行更深入分析。

胃癌组织中KAI1/CD82、p27和p53的表达水平及其临床意义

目的研究胃癌组织中KAI1/CD82、p27、p53蛋白的表达水平及其临床意义。方法收集中南大学湘雅医学院附属海口医院胃肠外科2020年6月至2021年6月期间接受胃癌切除术治疗的43例胃癌患者标本,将标本分为43例胃癌组、43例配对的癌旁组(距癌2 cm)和43例配对的正常组(距癌5 cm以上),运用免疫印迹(Western blot)方法检测并比较三组组织中的KAI1/CD82、p27、p53蛋白表达水平,分析胃癌组织中KAI1/CD82、p27、p53的表达水平与临床病理参数的关系,采用Pearson相关分析法分析其与胃癌的临床病理特征的关系。结果胃癌组中的KAI1/CD82、p27、p53蛋白表达水平明显低于癌旁组和正常组,且癌旁组明显低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);KAI1/CD82、p27、p53蛋白的阳性表达率与肿瘤组织的分化程度、临床分期和淋巴结是否转移有关(P<0.05),而与年龄、性别无关(P>0.05);经Pearson相关分析结果显示,胃癌组织中KAI1/CD82与p27蛋白和p53蛋白的表达均呈正相关(r=0.586、0.426,P<0.05)。结论胃癌组织中的KAI1/CD82、p27、p53蛋白表达水平明显降低,联合检测KAI1/CD82、p27、p53可能成为胃癌诊断及预后评估的新的分子标记物。

圈养非洲白犀牛初乳蛋白组分及5种酶活性测定

为了积累圈养非洲白犀牛初乳蛋白组分和酶活性的基础数据,本研究对非洲圈养白犀牛分娩后1-5天的初乳成分进行分析。用考马斯亮蓝法对白犀牛初乳蛋白质含量进行测定,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续垂直板状电泳分离乳蛋白各组分,并用分光光度法测定淀粉酶(AMS)、乳过氧化物酶(LP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰胺转移酶(γ-GT)等5种酶活性。结果显示:白犀牛初乳中蛋白质浓度第1天最高为150.33±4.2 mg/mL,后呈下降趋势,约为荷斯坦牛乳蛋白质浓度的5倍。白犀牛初乳中Igs含量最为丰富,第1天最高为38.59%,后呈下降趋势;荷斯坦牛乳以CN为含量最丰富的蛋白质,为49.41%。AMS、LP和ALP的活性第2天最高为46.27±0.42 U/100 mL、299.33±15.5 U/mL和193.22±1.63 U/100 mL,后逐渐下降,其中各天LP活性均高于荷斯坦牛乳;NAGase活性第1天最高为48.22±1.15 U/L后逐渐下降,各天活性均高于荷斯坦牛乳;γ-GT活性呈上升趋势,第5天最高为1053.85±6.78 U/100 mL,高于荷斯坦牛乳。

多倍体麦类作物Wx蛋白检测的SDS-PAGE方法

本文通过对小麦蜡质蛋白的实验和研究 ,详细论述了蜡质蛋白的特性、提取原理、电泳原理和检验原理。对多倍体麦类作物Wx蛋白亚基的检测 ,提出了应用效果良好的电泳系统 ,并就提取方法、凝胶配方和操作步骤进行了描述。本文还列出了部分麦类作物蜡质蛋白亚基基本模式示意图和实验例证 ,具有很好的参考价值。

白果蛋白质提取及SDS-PAGE分析

以白果为原料,采用不同的原料处理及蛋白质提取方法,运用单因素和正交设计的方法,以料液比、提取时间、提取液浓度、提取液pH值为考察因素,研究白果蛋白质提取的最佳工艺条件,并对提取的白果蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳分析。结果表明:经过冷冻干燥处理的白果采用Tris-HCl提取法获得的白果蛋白含量较高;Tris-HCl法提取白果蛋白的最佳工艺为pH8.5、0.15mol/L Tris-HCl溶液、料液比1:20(g/mL)、提取时间4h,白果蛋白质的提取率达到75.01%。白果蛋白SDS-PAGE分析表明,白果蛋白中约含13条亚基,主要为21kD和32kD的两种亚基,白果蛋白的亚基主要集中在31～100kD,占亚基总数的77%。

凝胶成像系统SDS-PAGE法测定乳及乳制品中乳铁蛋白

为了建立一种检测市场上乳及乳制品中的乳铁蛋白含量的简便方法——SDS-PAGE法,采集了10种液态奶、4种奶酪、3种乳清蛋白粉、4种酸奶和4种奶粉,利用SDS-PAGE法分离乳铁蛋白,并优化了分离胶的浓度、电压、上样量和染色方法。经优化的SDS-PAGE法的操作条件为:分离胶浓度为12%,浓缩胶电压为120V,分离胶电压为200V,改良的考马斯亮蓝染色,乳铁蛋白标准品的点样浓度为0.1111mg/mL,点样量为12μL。采用此电泳条件分离不同乳及乳制品中的乳铁蛋白,运用凝胶成像系统测得乳铁蛋白含量的相对标准偏差小于10%,且测得的含量均高于其检出限和定量限。同一样品同一块胶,同一样品不同凝胶乳铁蛋白的含量相对标准偏差小于10%,说明利用本方法得到的实验结果准确度高,重复性好。

新风胶囊中水溶性蛋白的SDS-PAGE分析方法研究

目的:建立新风胶囊中水溶性蛋白SDS-PAGE的分析方法。方法:采用SDS-PAGE电泳方法,根据分子量大小不同,分离新风胶囊中水溶性蛋白;电泳条件:1.0 mm×25齿试样格,浓缩胶浓度为4.5%,分离胶浓度为12.5%,分离电压100 V,上样量5μL,染色2 h,脱色4 h。结果:新风胶囊中水溶性蛋白成分含量不均,其中主带有2条,分子量为16.38、17.07 kDa左右。结论:SDS-PAGE电泳方法可以用于新风胶囊中水溶性蛋白成分测定,为建立该制剂电泳特征图谱提供依据。

小麦高分子量麦谷蛋白亚基的SDS-PAGE方法

小麦高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)与小麦面粉的加工品质密切相关,SDS-PAGE是其常用分离方法。在前人工作的基础上摸索了一套适于分析HMW-GS的SDS-PAGE方法,具有简便、快速、微量、不影响种子萌发出苗、分辨率好、制成干板清晰、不皱缩、易保存等优点,以供有关工作者参考。

燕麦麦谷蛋白SDS-PAGE电泳分析

为了研究燕麦麦谷蛋白亚基组成及遗传多样性,本研究采用SDS-PAGE电泳方法对71份不同染色体组型的燕麦材料的麦谷蛋白,进行了电泳分析,并以中国春为参照,按条带迁移距离大小命名,分析条带多态性并以燕麦麦谷蛋白点泳图谱为依据对供试材料进行聚类分析。电泳结果显示燕麦麦谷蛋白主要集中在分子量较低的C区,高分子量麦谷蛋白没有检测到条带。71份燕麦材料共产生20种不同条带,条带g和条带i比较保守,出现的频率分别为64.8%和85.9%。各种条带组合形成62种不同的组合带型,多态性为87.3%。聚类结果显示燕麦麦谷蛋白的电泳谱型与材料的染色体组有很大关系,具有相同染色体组型的同种属的燕麦材料一般先聚为一类,但各材料之间又存在一定的差异。绝大多数六倍体材料在遗传相似性系数约0.68时聚为一类,多数四倍体材料在遗传相似性系数约为0.60时聚为一类,部分二倍体材料在遗传相似性系数约为0.59和0.76时聚为一类。条带a只在六倍体材料AACCDD中出现,而AACC、AABB、CC染色体组的材料中都没有出现,推测可能是D染色体组的特异条带。AsAs和A1A1染色体组存在一定的差异并不完全相同。燕麦麦谷蛋白SDS-PAGE电泳图谱可以作为燕麦指纹图谱。

SDS-PAGE 法测定His-tag 融合蛋白分子量产生偏差的原因

Ｈｉｓｔａｇ／ＮｉＮＴＡ系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白的有用工具，现常用于基因编码产物的特性研究中。ＳＤＳＰＡＧＥ是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法，而许多实验室用此方法检测Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大，产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题，本实验室在研究一个Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白Ｐ７３Ｈｉｓ时，首先用ＳＤＳＰＡＧＥ法测得其分子量确实比理论计算值大，然后对其进行Ｃ末端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析，结果证实其实际分子量与理论值一致。酶切去除包括Ｈｉｓｔａｇ在内的部分肽段使ＳＤＳＰＡＧＥ法测量蛋白分子量的偏差大大降低，证实Ｈｉｓｔａｇ确实是造成偏差的原因之一。推测由于Ｈｉｓｔａｇ中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在ＳＤＳＰＡＧＥ中迁移变慢，而导致偏差。这一现象值得引起有关研究者的注意。

应用RT-PCR、斑点杂交法和SDS-PAGE检测水稻黑条矮缩病毒

用RT PCR技术、PCR标记的探针点杂交和SDS PAGE检测了生产上严重危害玉米和水稻的水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。由RT PCR扩增的RBSDV第 7片段第 92 1～ 14 11碱基作探针 ,用PCR法DIG标记后点杂交 ,可以从 10 0ng玉米病叶中检测到RBSDV ,灵敏度是RT PCR的 1/10 ;10 %SDS PAGE只能检测到从 1g玉米病叶中提取的病毒dsRNA ,但对江苏玉米田间分离的不同的RBSDV样品电泳发现 ,该病毒基因组dsRNA有差异 。

SDS-PAGE与分子标记相结合分析宁夏小麦HMW-GS组成与变化特点

为了建立准确有效小麦HMW-GS的检测方法,提高优质小麦品种鉴定和筛选效率,以已知HMW-GS组成的16份小麦品种为对照,优化完善SDS-PAGE结合分子标记检测小麦HMW-GS的方法,并对103份宁夏小麦品种进行了验证和分析。结果表明,8.5%的分离胶可以有效区分除了Glu-B1位点的7*、7OE与8*亚基之外的其他亚基,分辨效果优良;SDS-PAGE结合Bx7OE、Bx7*/Bx7和By8基因的分子标记可以准确鉴定小麦HMW-GS。在103份宁夏小麦品种中,发现15种HMW-GS和29种组合类型;首次在该地区小麦品种的Glu-B1位点检测出了携带7OE、7*和8*亚基的品种;1/17+18/5+10为当地小麦HMW-GS的优势亚基组合类型,占20%。自1970年至2010年,HMW-GS的优质亚基(1、17+18和5+10)的出现频率呈明显增长趋势;宁夏小麦的HMW-GS种类和优质亚基出现频率随品种更换呈增加趋势。综上所述,分离胶浓度为8.5%的SDS-PAGE和Bx7OE、Bx7*/Bx7和By8分子标记的方法可准确有效地检测小麦HMW-GS组成,此方法可用于优质小麦品种的鉴定和筛选。

月季花瓣衰老过程中可溶性蛋白的SDS-PAGE分析

对月季花瓣衰老过程中可溶性蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行了分析，结果表明，蛋白条带变化表现出３种情况：（１）从瓶插开始到结束蛋白条带基本保持稳定；（２）随花瓣衰老，蛋白条带逐渐减弱、消失；（３）随着花的衰老，有新的蛋白条带出现。对花进行ＡＢＡ或乙烯促衰处理，也导致相应的某些蛋白条带的变化，说明这些蛋白的变化可能与衰老有关。

家蝇幼虫淋巴液的抑菌作用及其SDS-PAGE分析

目的观察针刺诱导家蝇幼虫血淋巴抗菌物质抑菌作用与抗菌分子。方法室内饲养的家蝇三龄幼虫,经针刺体壁处理后48h,提取其血淋巴,观察单独使用血淋巴和血淋巴与氨苄青霉素混合对9种应试细菌的抑菌效果,血淋巴与抗真菌药氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果,应用SDS-PAGE分析血淋巴抗菌分子表达。结果针刺家蝇幼虫后48h的血淋巴,作用于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、黄色小球菌,结果显示:针刺家蝇幼虫后48h的血淋巴对试验9个标准株细菌,均产生明显抑菌环,经单因素方差分析,显示各抑菌试验组的抑菌效果,皆有显著差异(P<0.001)。其中对黄色小球菌抑菌活力最强。1μ1氨苄青酶素与7μ1针刺诱导家蝇幼虫淋巴液混合对白色葡萄球菌抑菌效果呈现最好的加强抑菌作用。针刺诱导家蝇幼虫血淋巴与抗真菌药物氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果呈现明显协同增强作用。SDS-PAGE分析结果显示:针刺幼虫后发育的成蝇和针刺幼虫血淋巴的电泳条带与未针刺者相比,针刺幼虫后发育的成蝇,在24000￣97000范围内表达尤为增强,在12000附近有一条特异性条带。针刺家蝇3龄幼虫血淋巴SDS-PAGE分析显示,在24000、35000、40000￣96000范围内表达明显增强,其中35000、12000条带较为特异。结论本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性,发现针刺诱导家蝇幼虫血淋巴对黄色小球菌抑菌活力最强,氨苄青霉素与家蝇幼虫淋巴液混合对白色葡萄球菌抑菌效果呈现最好的加强抑菌作用,针刺诱导家蝇幼虫血淋巴与抗真菌药物氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果呈现明显增强作用,上述发现在国内外报道较少,本研究结果,为进一步开发这类抗菌物质,提供了实验资料。

SDS-PAGE蛋白电泳技术在F_1代杂交种纯度鉴定中的应用

随着市场的需要 ,商品种子量越来越大 ,而对杂交种质量问题不容忽视 ,我们在实际工作中对中椒四号 ,中椒五号 ,京欣一号 ,金花宝四个杂交种纯度鉴定尝试了大量的同工酶电泳方法 ,包括 POX,EST,ADH,MDH,ISH,PGM,PGI等同工酶电泳图谱中均未找到父母本与一代杂种的鉴别标记。而在种子蛋白质 SDS- PAGE电泳图谱中找到了一代杂种与父母本的鉴别带 ,并利用这个鉴别带进行了杂交种纯度鉴定。这种鉴定方法的准确性在田间对照纯度鉴定中得到确认 。

青海不同基因型蚕豆蛋白组成及清蛋白和球蛋白亚基的SDS-PAGE分析

采用连续提取蛋白法和SDS-PAGE技术分析了青海省11个不同基因型蚕豆的蛋白质组成以及清蛋白、球蛋白亚基的差异.结果表明:蚕豆蛋白主要由清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白和其他蛋白组成,不同基因型蚕豆的蛋白质含量及其组成存在一定的变异,其中清蛋白和球蛋白是蚕豆蛋白主要组成部分,占总蛋白的75.08%.不同基因型蚕豆的清蛋白和球蛋白亚基存在一定的差异,蚕豆清蛋白亚基由97、66+67、63、50、45、38+41、22ku等7个基本亚基组成外,还有96ku特异亚基;球蛋白亚基由63、56、52、47、22ku等5个基本亚基组成外,还有46ku的特异亚基.

大豆原料及其分离蛋白的SDS-PAGE图谱研究

将大豆原料制备成脱脂豆粕、“碱提酸沉”分离蛋白和超滤法分高蛋白，采用SDS－PAGE技术研究其中的电泳图谱变化。在所有样品的SDS－PAGE图谱中共分离出17种蛋白组分。其分子量（Mr）分别是：1号带，22840：(2，3)号带，26020：4号带，30080：5号带，32820：（6、7）号带，36850；8号带，46500：9号带，5143010号带，5692011号带，65790：12号带，70740；13号带，76060：（14、15、16）号带，9050017号带，104620。大豆原料中有16个蛋白质组分，制备成脱脂豆粕和分高蛋白后出现17号新带，同时消失11、12、13号带。用热处理和β-巯基乙醇处理样品证明了17号新带是由对热切感的蛋白质以二硫键的形式聚合而成。11、12、13号带是对热最敏感的蛋白质，一经加热都会消失，（14、15、16）这一组蛋白组分以及5号带、7号带，对热的敏感性不如11、12、13号带，但随着加热时间的延长，在SDS－PAGE图谱上也会逐渐消失。脱脂豆粕中，还消失了1号带，“碱提酸沉”大豆分离蛋白中消失了4、7号带，超滤法的大豆分离蛋白消失了1、2号带。这些SDS－PAGE图谱的变化，与三种制品各自的工艺特点有关。

半子粒小麦高分子量麦谷蛋白亚基的SDS-PAGE分析方法

对半子粒无胚小麦子粒电泳进行了研究,摸索出了一套适合于小麦半子粒分析的高分子量(HMW)麦谷蛋白亚基的SDS PAGE方法.对2248份半子粒杂交后代的分析结果表明,该方法结果准确,方便快速,分辨率较高.