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毛白杨PtSEP3-1基因启动子的克隆分析及其表达载体构建 被引量:10
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作者 王静澄 李昊 +4 位作者 崔东清 刘军梅 叶梅霞 张志毅 安新民 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期239-244,共6页
SEP(SEPALLATA)类基因属于花器官发育ABCDE模型中的E类基因,拟南芥中的研究表明该类基因可能具有控制花器官形态发育以及激活其它类型基因的功能,是一类花发育过程中的关键基因。因此,研究杨树SEP类基因启动子表达特性对于杨树的开花调... SEP(SEPALLATA)类基因属于花器官发育ABCDE模型中的E类基因,拟南芥中的研究表明该类基因可能具有控制花器官形态发育以及激活其它类型基因的功能,是一类花发育过程中的关键基因。因此,研究杨树SEP类基因启动子表达特性对于杨树的开花调控研究具有重要意义。本文根据毛白杨SEP3基因和毛果杨基因组序列设计引物,通过PCR获得了PtSEP3-1基因上游2000bp的序列。序列分析结果表明该序列具有启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box,还包含大量光响应元件ACE、Box I和Box4等,此外还有脱落酸响应元件ABRE,赤霉素响应元件GARE-motif以及胁迫响应元件HSE、TC-richrepeats等。进一步构建了一个以PtSEP3-1启动子驱动GUS基因的植物表达载体pPtSEP3-1protest,为该启动子的功能鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 毛白杨 sep3基因 启动子 表达载体
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春兰CgSEP3基因的克隆和表达分析 被引量:8
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作者 贾春蕾 向林 +3 位作者 秦德辉 李小白 吴超 孙崇波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1305-1310,共6页
该研究采用RT PCR和RACE技术从春兰(Cymbidium goeringii)中分离到1个SEPALLATA3(SEP3)基因.序列分析表明,该基因含有1个732 bp的开放阅读框(ORF),共编码243个氨基酸.系统进化树分析显示,该基因是MADS-box基因家族AP1/AGL9组SEP... 该研究采用RT PCR和RACE技术从春兰(Cymbidium goeringii)中分离到1个SEPALLATA3(SEP3)基因.序列分析表明,该基因含有1个732 bp的开放阅读框(ORF),共编码243个氨基酸.系统进化树分析显示,该基因是MADS-box基因家族AP1/AGL9组SEP的同源基因,其编码蛋白与其它植物SEP3类蛋白具有较高的一致性,命名为CgSEP3(登录号为KF924272).实时荧光定量分析表明,CgSEP3在春兰花器官中均有表达,其中在唇瓣、侧瓣和萼片中的表达量较高,在子房和蕊柱中的表达量较低;而且CgSEP3在花发育各个时期都有表达,在1~2 cm的花芽中表达量最高,在盛开的花中的表达量最低.研究认为,CgSEP3基因可能在春兰花瓣和萼片的形成过程中具有重要作用. 展开更多
关键词 春兰 sep3基因 实时荧光定量表达 花发育
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绿竹SEP3-like蛋白表达纯化以及不同结构域互作研究 被引量:3
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作者 吴文魁 周佳平 +2 位作者 林新春 徐英武 曹友志 《生命科学研究》 CAS CSCD 2016年第5期389-394,共6页
在双子叶植物中,SEPALLATA3(SEP3)参与生殖生长的很多方面,包括花分生组织和花器官的形成。但是在单子叶植物中,花器官形成的分子机制还不清楚。为了揭示单子叶植物中SEP3蛋白的结构以及聚合体的形成与生物学功能的关系,以单子叶植物绿... 在双子叶植物中,SEPALLATA3(SEP3)参与生殖生长的很多方面,包括花分生组织和花器官的形成。但是在单子叶植物中,花器官形成的分子机制还不清楚。为了揭示单子叶植物中SEP3蛋白的结构以及聚合体的形成与生物学功能的关系,以单子叶植物绿竹Bambusa oldhami为材料,构建绿竹SEP3(BoSEP3)蛋白不同结构域原核表达载体,在大肠杆菌中进行重组蛋白诱导表达,获得不同结构域的可溶蛋白,通过镍柱及分子筛分离纯化表明,BoSEP3蛋白K结构域以四聚体形式存在;同时构建BoSEP3蛋白不同结构域的酵母表达载体,通过酵母双杂交系统检验BoSEP3蛋白同源互作表明,K结构域有参与形成多聚体的功能。实验提供了一套表达纯化BoSEP3蛋白以及检验蛋白质互作的有效方案,为开展BoSEP3蛋白功能和结构生物学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 绿竹sep3(Bosep3) 原核表达 蛋白质纯化 蛋白质互作 酵母双杂交
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铁皮石斛SEP3基因的生物信息学分析及敲除载体的构建 被引量:1
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作者 黄鑫 师凯辉 +9 位作者 胡凇 田英男 冯垒 韩欣妤 孙博 王义琴 王冬梅 何玲 朱永平 和凤美 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2021年第4期555-559,共5页
SEP3(SEPALLATA 3)基因是MADS-box家族中的一员,在花器官的形成和发育过程中具有重要作用。为了解SEP3基因在铁皮石斛(Dendrobiumofficinale)中的成花转变机理,从铁皮石斛转录组序列中获得一个SEP3基因序列,并命名为DoSEP3。预测其编码... SEP3(SEPALLATA 3)基因是MADS-box家族中的一员,在花器官的形成和发育过程中具有重要作用。为了解SEP3基因在铁皮石斛(Dendrobiumofficinale)中的成花转变机理,从铁皮石斛转录组序列中获得一个SEP3基因序列,并命名为DoSEP3。预测其编码区长度为354bp,预测编码117个氨基酸。DoSEP3蛋白相对分子质量13457.87 Da。其不稳定系数为60.53,亲水性的平均值为–0.121,是不稳定的亲水性蛋白,主要在内质网和细胞核中起作用。二级结构主要以α-螺旋为蛋白质最大量的结构元件,跨膜区分析推测Do SEP3蛋白质具有一个跨膜区。进一步的氨基酸比对显示,铁皮石斛Do SEP3蛋白与金钗石斛SEP3蛋白亲缘关系最近,可能具有类似的功能。基于生物信息学分析,利用CRISPR/cas9技术构建铁皮石斛基因敲除载体,并使用农杆菌介导法进行遗传转化,且已获得阳性原球茎,可为后续的SEP3基因表达研究奠定基础。 展开更多
关键词 铁皮石斛 sep3基因 生物信息学分析 载体构建
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金钗石斛SEP3-like基因的克隆及其在春化过程中的表达分析 被引量:11
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作者 陈敏燕 郭无瑕 +2 位作者 刘小如 李洪清 梁山 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1579-1588,共10页
通过同源克隆从低温春化处理的金钗石斛腋芽中分离到1个SEP3-like基因的全长cDNA。该cDNA含有长度为684bp的开放阅读框,可编码由227个氨基酸组成的蛋白质。同源搜索和系统进化分析表明,该蛋白与拟南芥AtSEP3同源,并同属于MADS-BOX家族的... 通过同源克隆从低温春化处理的金钗石斛腋芽中分离到1个SEP3-like基因的全长cDNA。该cDNA含有长度为684bp的开放阅读框,可编码由227个氨基酸组成的蛋白质。同源搜索和系统进化分析表明,该蛋白与拟南芥AtSEP3同源,并同属于MADS-BOX家族的SEP亚家族中的SEP3分支,故将该基因暂定名为DnSEP3-like。与其它的石斛属的SEP3蛋白类似,DnSEP3-like蛋白缺失C-末端的部分基序。DnSEP3-like基因的表达受春化作用的影响,其转录产物随春化时间延长逐渐积累,在春化20d时达到峰值,暗示该基因可能参与春化调控开花的生物学过程。 展开更多
关键词 金钗石斛 sep3 春化作用
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拟南芥SEPALLATA3蛋白质原核表达与纯化 被引量:3
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作者 周佳平 林新春 徐英武 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期14-18,共5页
SEPALLATA3(SEP3)属于花器官建成ABCE模型中的E类基因,为了揭示SEP3蛋白是如何形成多聚体的,以及多聚体与其生物学功能之间的联系,开展了拟南芥Arabidopsis thaliana AtSEP3蛋白质体外可溶性表达实验,构建了原核表达载体,并在大肠埃希菌... SEPALLATA3(SEP3)属于花器官建成ABCE模型中的E类基因,为了揭示SEP3蛋白是如何形成多聚体的,以及多聚体与其生物学功能之间的联系,开展了拟南芥Arabidopsis thaliana AtSEP3蛋白质体外可溶性表达实验,构建了原核表达载体,并在大肠埃希菌Escherichia coli细胞中进行重组蛋白的诱导表达。从蛋白不同的结构域、诱导时间和诱导温度等方面对蛋白的可溶性表达进行了分析。最后以pET-15b为表达载体,大肠埃希菌表达菌株E.coli‘Rosetta’为宿主菌株,22℃诱导表达15 h,获得不同片段的AtSEP3可溶性蛋白。通过镍柱及分子层析色谱柱分离纯化,表明AtSEP3蛋白以四聚体形式存在。 展开更多
关键词 植物学 sep3蛋白 原核表达 蛋白纯化 多聚体
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Antagonistic MADS-box transcription factors SEEDSTICK and SEPALLATA3 form a transcriptional regulatory network that regulates seed oil accumulation 被引量:1
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作者 Shuangcheng He Yuanchang Min +12 位作者 Zijin Liu Fang Zhi Rong Ma Ankang Ge Shixiang Wang Yu Zhao Danshuai Peng Da Zhang Minshan Jin Bo Song Jianjun Wang Yuan Guo Mingxun Chen 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2024年第1期121-142,共22页
Transcriptional regulation is essential for balancing multiple metabolic pathways that influence oil accumulation in seeds.Thus far,the transcriptional regulatory mechanisms that govern seed oil accumulation remain la... Transcriptional regulation is essential for balancing multiple metabolic pathways that influence oil accumulation in seeds.Thus far,the transcriptional regulatory mechanisms that govern seed oil accumulation remain largely unknown.Here,we identified the transcriptional regulatory network composed of MADS-box transcription factors SEEDSTICK(STK)and SEPALLATA3(SEP3),which bridges several key genes to regulate oil accumulation in seeds.We found that STK,highly expressed in the developing embryo,positively regulates seed oil accumulation in Arabidopsis(Arabidopsis thaliana).Furthermore,we discovered that SEP3 physically interacts with STK in vivo and in vitro.Seed oil content is increased by the SEP3 mutation,while it is decreased by SEP3 overexpression.The chromatin immunoprecipitation,electrophoretic mobility shift assay,and transient dual-luciferase reporter assays showed that STK positively regulates seed oil accumulation by directly repressing the expression of MYB5,SEP3,and SEED FATTY ACID REDUCER 4(SFAR4).Moreover,genetic and molecular analyses demonstrated that STK and SEP3 antagonistically regulate seed oil production and that SEP3 weakens the binding ability of STK to MYB5,SEP3,and SFAR4.Additionally,we demonstrated that TRANSPARENT TESTA 8(TT8)and ACYL-ACYL CARRIER PROTEIN DESATURASE 3(AAD3)are direct targets of MYB5 during seed oil accumulation in Arabidopsis.Together,our findings provide the transcriptional regulatory network antagonistically orchestrated by STK and SEP3,which fine tunes oil accumulation in seeds. 展开更多
关键词 seed oil accumulation sep3 STK transcription factor transcriptional regulation
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