转染及培养条件对外源性钙离子ATP酶SERCA1a表达的影响

目的评估不同转染及培养条件下COS1细胞过表达钙离子ATP酶SERCA1a的量及活性,探讨影响真核细胞目标蛋白质表达量及活性的因素。方法应用常规的全量或者半量DNA、lipofactamin和plus reagent转染COS1细胞,37℃、34℃或31℃培养2至5d。提取微粒体蛋白后定量并测定SERCA1a的ATP酶活性。结果微粒体蛋白量在细胞培养3至4d达到高峰,改变转染及细胞培养条件,未见明显变化;降低细胞培养温度及提高DNA转染用量,可增加SERCA1a表达量;SERCA1a表达量在8μg DNA转染细胞31℃培养3d达到最高,然而降低细胞培养温度后,SERCA1a的ATP酶活性及EP生成量也随之下降;31℃表达的SERCA1a,其ATP酶活性降低比EP生成量减少的幅度更大,并且ATP酶活性及EP生成量随着细胞培养时间延长而增加。结论应用常规的半量转染试剂、全量DNA瞬时转染COS1细胞,37℃培养3-4d可获得最大量具有正常酶活性的SERCA1a蛋白。降低培养温度虽然可以提高外源性SERCA1a的表达,但却可能影响细胞内蛋白质的准确折叠及正常降解。

模拟失重后再超重对猴咬肌细胞SERCA mRNA表达的影响

目的:探讨模拟失重后再超重环境对猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA表达的影响。方法:健康雄性猕猴23只,随机分为正常对照组(A组)和实验组:模拟失重(B组),模拟超重(C组),失重后再超重分别为+11Gx/270s(D1组)、+13Gx/230s(D2组)、+15Gx/200s(D3组)和+13Gx/230s恢复第10d(D4组)。实验期间,各组喂养条件相同,在实验结束后动物恢复第2d(A、B、C、D1、D2、D3组)和恢复第10d(D4组)处死取材,组织置于液氮中保存。采用常规方法制作冰冻切片,通过HE染色观察猴咬肌细胞组织形态学变化;使用RT-PCR方法检测猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA的表达。结果:组织病理学观察可见,对照组猴咬肌细胞结构正常;实验组咬肌细胞胞膜边界模糊不清,间质增宽;模拟失重后再超重组肌细胞肿胀,偶见细胞核呈扁平状,移位胞浆中央。采用RT-PCR检测发现,各实验组与对照组相比,猴咬肌细胞SERCA1a mRNA表达均增强,SERCA2a mRNA除D4组外,其他实验组表达增强,其差异有统计学意义(P<0.05);D2、D3组与B组相比,SERCA1a mRNA表达升高,差异显著(P<0.01);D2、D3组与C组比较,SERCA1a mRNA表达增强,有显著差异(P<0.01);D4组与D2组比较,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达均下降,有统计学意义(P<0.05)。结论:模拟失重、模拟超重和模拟失重后再超重环境均可造成猴咬肌细胞组织形态学不同程度地改变,并可引起SERCA1a、SERCA2a mRNA表达增强,其中模拟失重后再超重恢复第10d咬肌细胞组织形态学趋于正常结构,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达呈恢复下降趋势。

基于心肌细胞钙稳态调节的防治心力衰竭中药作用探讨

近些年来,中药对心力衰竭相关研究及治疗规避了西药治疗所带来的毒副作用,在心力衰竭临床与实验中,中药单独用药或联合用药均成效显著。文章主要围绕心肌细胞内钙稳态的相关因子和相关中药对心力衰竭的影响等方面进行综述。