SEREX技术筛选及鉴定食管癌肿瘤抗原

背景与目的:正常细胞向癌细胞转化过程中,突变的基因或各种异常表达的蛋白可以成为肿瘤抗原诱导机体的免疫反应,因此肿瘤患者的血清中存在着与肿瘤相关的自身抗体。重组cDNA表达文库血清学分析法(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SEREX)是利用肿瘤患者血清中的自身抗体筛选、鉴定肿瘤抗原的技术。本研究拟采用SEREX的方法寻找食管癌自身抗体的相关肿瘤抗原,鉴定与食管癌发生、发展相关的基因和免疫治疗分子靶点,并为食管癌的诊断提供候选血清标志物。方法:用食管癌组织建立库容量达1.6×106pfu的cDNA表达文库,SEREX筛选获得21个不同cDNA序列的阳性克隆,进一步使用SADA法分析其中4个抗原在10例食管癌及10例正常人血清中的反应。结果:在Homosapiensdesmin(DES)等21个阳性克隆中,4个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外17个克隆与已知基因高度同源。RibosomalproteinS4等4个抗原与食管癌患者和正常人血清反应阳性率分别为40%和0%、60%和10%、70%和20%、30%和20%。结论:RibosomalproteinS4等4个抗原普遍参与了食管癌患者的体液免疫反应,与食管癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清。本研究发现的21个食管癌抗原可作为食管癌治疗的潜在分子靶点和食管癌诊断新的候选血清学标志物。

应用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关抗原

目的:应用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关抗原,为鼻咽癌的早期诊断、免疫治疗和预后监测提供候选的生物学指标和理论基础。方法:从鼻咽癌新鲜活检组织中提取mRNA,构建cDNA表达文库。用鼻咽癌患者的血清筛选所构建的cDNA表达文库,获得的阳性克隆经扩增后提取噬菌粒DNA进行测序。所得序列与GenBank数据库中已知基因进行同源比较,分析其生物学特性。结果:所构建的cDNA原始文库含1×106个重组体,蓝白斑试验显示重组率为93%。用鼻咽癌血清对表达文库进行筛选,共获得21个阳性克隆,分别代表14个不同的cDNA插入片段。12个插入片段的DNA序列分别与基因库上的基因有不同程度的同源性,其中6个基因与鼻咽癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切;另6个基因的生理功能未见文献报道。2个插入片段未发现有同源基因,推测可能为新发现的基因。结论:SEREX技术是目前筛选肿瘤抗原最简便、有效的手段之一。本文研究发现的抗原将为鼻咽癌的研究提供进一步的理论基础。

SEREX肿瘤抗原基因表达蛋白的研制和血清学初步筛选

目的 :利用基因工程方法获得SEREX肿瘤抗原基因原核表达蛋白 ,为进一步血清学分析奠定基础。方法 :采用SEREX方法 ,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库。对获得的 3个阳性克隆基因MY OVA 2、MY OVA 7和MY OVA 13,利用基因工程的方法克隆其全长基因 ,原核表达和亲和层析获得目的蛋白 ,并采用Dot blot的方法初步检测了目的蛋白抗原在正常人和肿瘤患者中的血清学反应格局。结果 :获得了纯化的目的蛋白 ,采用点杂交对 13例正常人和 74例肿瘤患者血清的测定结果显示 ,MY OVA 13的抗体只在肿瘤组中检测到 ,在正常组中为阴性 ;MY OVA 2和MY OVA 7在两组人群的血清中自身抗体检出率均呈现阳性 ,不同的肿瘤类型的阳性率各不相同。结论

应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原

背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物淘选和SEREX筛选。PCR扩增阳性克隆插入片段后测序,结果与GeneBank数据库中已知基因进行同源性比较,分析其生物学特性。结果用非小细胞肺癌血清对噬菌体展示文库进行筛选,共获得31个阳性克隆,测序后发现其代表15个基因,其中12个与已知cDNA序列同源,与肺癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切;另外3个未发现有同源基因,可能是新基因。结论应用SEREX技术发现15个肺癌相关抗原和3个肺癌相关抗原的候选基因,为进一步的深入研究打下良好的基础。

SEREX技术分析筛选乳腺癌自身抗体标志物的研究

目的:自身抗体是目前最受关注的一类肿瘤标志物候选分子,有助于提高乳腺癌检测的敏感性和特异性。鉴于单一一个乳腺癌文库的丰度有限,而且乳腺癌和肺癌发生来源相近,本研究从肺癌文库筛选乳腺癌特异性自身抗体标志物。方法:重组cDNA表达文库血清学分析(SEREX)联合生物淘洗富集技术从肺癌cDNA T7噬菌体文库中筛选乳腺癌相关蛋白,测序鉴定得到噬菌体表达蛋白信息。免疫印迹和酶联免疫吸附(ELISA)分析每一个开放阅读框架内的噬菌体表达蛋白的自身抗体水平。逻辑回归模型和留一交叉验证评估诊断价值。结果:筛选得到2个开放阅读框架内蛋白序列信息。通过免疫印迹和ELISA分析,这2个噬菌体表达蛋白能显著区分出病人和正常人。逻辑回归模型联合检测的敏感性达到82.4%,特异性达到88.2%;留一交叉验证两者联合的预测值敏感性和特异性分别达到78.5%和82.1%。结论:SEREX是有效的肿瘤自身抗体标志物筛选技术,从肺癌文库筛选乳腺癌特性抗原的方法是可行的,同时HSPA4L和RINT-1蛋白的血清自身抗体联合对乳腺癌的检测准确率要好于其中任何一种标志物。

SEREX方法鉴定胃癌肿瘤相关抗原基因

目的采用重组CDNA表达文库血清学分析法(SEREX法)寻找胃癌相关肿瘤抗原的编码基因。方法抽提胃癌细胞株SGC7901和1例胃癌组织标本PolyA+RNA,分别构建2个胃癌cDNA表达文库,用含有抗体的胃癌患者血清对2个文库进行筛选,并对筛选所得到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果经测定2个原始文库滴度分别为1.6×106pfu和2.5×106pfu,重组率为95%和98%。2个文库经3轮筛选共获得14个胃癌肿瘤相关抗原编码基因,其中一个为未知基因。13个已知基因编码产物包括代谢酶、RNA转录和翻译调控蛋白、蛋白代谢相关分子、自身免疫疾病相关抗原及未知功能蛋白分子。结论 胃癌相关肿瘤抗原编码基因的筛选和鉴定,为胃癌的临床诊断和特异性免疫治疗提供了靶点,有助于对胃癌发生机制的深入理解。

SEREX技术在筛选疾病相关抗原中的应用

重组cDNA表达文库血清学分析(SEREX)方法是一种筛选疾病相关抗原的有效分析方法,其筛选鉴定的疾病抗原不仅可对疾病进行早期检测,还能作为免疫治疗的靶标。本综述从肿瘤和其它具有免疫原性的疾病方面介绍了SEREX技术的应用价值,在总结SEREX缺点的基础上提出了SEREX技术的改进方向。

卵巢上皮性癌SEREX抗原基因FXR1、OV-189原核表达载体的构建及表达

目的:克隆并构建卵巢上皮性癌SEREX抗原基因FXR1、OV-189的原核表达载体。方法:用PCR从含SEREX抗原基因序列的重组pBK-CMV质粒中扩增FXR1、OV-189的CDS,双酶切后插入原核表达质粒pET-30b(+),经酶切及测序鉴定,阳性质粒转化表达菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表达产物。结果:成功扩增了FXR1、OV-189的CDS,并构建了原核表达质粒pET-30b(+)/FXR1、pET-30b(+)/189,经测序,与Genbank中的相应序列一致,并在大肠杆菌BL21中成功诱导表达目的蛋白。结论:成功构建了原核表达质粒pET-30b(+)/FXR1、pET-30b(+)/189,并在大肠杆菌中表达了重组融合目的蛋白,为进一步研究奠定了基础。

人源性大肠癌抗原基因的SEREX筛选

目的:寻找人源性大肠癌相关抗原基因.方法:构建3个以入Tripl Ex2噬菌体作载体的大肠癌抗原cDNA表达文库,用自体或异体大肠癌患者血清应用SEREX方法进行免疫筛选.用平板法扩增阳性克隆噬菌体,提取纯化DNA,用SfiI酶切和PCR鉴定插入片段的大小.结果:构建成3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库,滴度分别为2.39×106nfu/L,2.07×106nfu/L和1.86×106nfu/L,插入片段长度为0.5-4kb,平均分别为1.4kb,1.6kb和1.3kb.筛选发现4个阳性克隆,插入cDNA片段大小分别为2.4 kb,1.8 kb,2.3 kb和2.2 kb.结论:用SEREX方法筛选大肠癌抗原cDNA表达文库,可获得有价值的大肠癌的重组抗原基因克隆,将有利于大肠癌的早期诊断和重组疫苗的研究.

用SEREX方法筛选HCC抗原及hcct-19表达谱的检测

目的:用SEREX方法鉴定HCC表达的肿瘤抗原,检测hcct-19的表达谱．方法:将HCC表达文库铺板,IPTG诱导蛋白质表达,BSA封闭．同1:1 000稀释的预吸收 HCC患者血清反应后,与1:5 000稀释的羊抗人抗体反应,在BCIP／NBT的作用下显色,挑取阳性克隆噬菌斑块,重复筛选和铺板3次,直至得到一致的单克隆免疫阳性重组噬菌体．挑取阳性克隆噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,PCR产物纯化测序, 序列结果用BLAST软件同GenBank中的已知基因进行对比分析．检测阳性克隆抗原基因 hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中的表达,半定量RT-PCR方法检测阳性克隆抗原基因在肝癌及癌旁组织中的表达．结果:共得到31个阳性克隆,代表14个不同的 cDNA序列,其中10个为已知功能的基因,4 个为未知功能的基因．在已知功能的基因中, RFC2、NDUFA4及MCART1首次被发现与 HCC有关．hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中表达,在肝癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织(13．2±2．7vs2．9±0．3, P<0．05)．结论:本实验筛选出的HCC抗原有助于进一步阐明HCC的形成过程．hcct-19可能作为一个过量表达的基因参与了HCC的发病过程．

卵巢上皮性癌SEREX抗原基因TM4SF1、C1D、TIZ原核表达载体的构建及表达

目的:克隆并构建卵巢上皮性癌SEREX抗原基因:TM4SF1、C1D、TIZ的原核表达载体。方法:用PCR从含SEREX抗原基因序列的重组pBK-CMV质粒中扩增TM4SF1、C1D、TIZ的编码序列(coding sequence,CDS),双酶切后插入原核表达质粒pET-30b(+),经酶切及测序鉴定,阳性质粒转化表达菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达目的蛋白,用SDS-PAGE分析表达产物。结果:成功扩增了TM4SF1、C1D、TIZ的CDS,并构建了原核表达质粒pET-30b(+)/TM4SF1、pET-30b(+)/C1D、pET-30b(+)/TIZ,经测序与Genbank中的相应序列一致。并在大肠杆菌BL21中成功诱导表达目的蛋白。结论:成功构建了原核表达质粒pET-30b(+)/TM4SF1、pET-30b(+)/C1D、pET-30b(+)/TIZ,并在大肠杆菌中表达了重组融合目的蛋白,为进一步研究奠定了基础。

SEREX——一种新的肿瘤抗原检测法

寻找特异性的肿瘤抗原一直是人们所奋斗的目标。近年来 ,一些新方法陆续应用于此领域内 ,获得了一些新的发现。本文主要介绍一种新的应用自身血清抗体技术寻找肿瘤抗原的方法及其应用。

应用SEREX技术筛选和鉴定肺癌相关抗原的研究进展

目前已从分子水平筛选和鉴定出多种人类肿瘤抗原,这不仅有助于阐明肿瘤免疫的分子机制,而且促进了新的肿瘤免疫治疗方法的发展。应用SEREX技术筛选肺癌相关抗原,将为肺癌的早期诊断、免疫治疗和预后监测奠定基础,并为鉴定肺癌相关分子标志物提供候选抗原。

SEREX方法在肿瘤相关抗原筛选中的应用

SEREX方法是筛选肿瘤抗原分子的一种方便且高效的方法。本文解释了SEREX的原理及方法,介绍了利用该方法所鉴定出来的肿瘤相关抗原,讨论了该方法的优缺点,阐述了改进的方法,最后对该方法的应用进行了展望。

SEREX技术的研究进展

重组cDNA表达文库的血清学分析(SEREX)为一种新的寻找抗原的方法,即利用患者自体血清对重组表达的cDNA克隆进行筛选,以获得相关抗原基因。这类抗原在肿瘤患者体内能诱导出多重免疫反应,且其核苷酸序列和蛋白质结构较易在分子水平确定,这一方法的运用为发现新的肿瘤抗原开辟了一个崭新的领域,为肿瘤的免疫治疗的发展提供了一个现实的基础。

SEREX方法鉴定CTCL细胞肿瘤抗原

目的分离纯化皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞系SeAx细胞膜蛋白并制备多克隆抗体。利用SEREX法从SeAx cDNA噬菌体表达文库中筛选肿瘤抗原。方法培养SeAx细胞至2×1010个,用组织匀浆器匀浆后差速离心法分离细胞各组分,富集细胞膜抗原。用细胞器特异性抗体对纯化步骤中的各组分进行检测。用膜蛋白组分免疫家兔4次,每次免疫后用ELISA法测定血清抗体滴度。4次免疫后用Western blot方法测定多抗与SeAx细胞各组分蛋白反应的特异性。重组噬菌体感染大肠杆菌,将表达的重组蛋白转印到硝酸纤维素膜上,与SeAx细胞膜蛋白免疫的兔血清进行反应,阳性的克隆测定核苷酸序列,通过数据库搜索比较确定基因。结果用差速离心法得到SeAx细胞膜蛋白,免疫家兔4次后获得了效价为1×10-5的多克隆抗体。共筛选了1×106个噬菌体克隆,得到25个阳性克隆,经核苷酸序列测定和数据库分析,其中4个cDNA片段为膜蛋白成分,分别为integrin alpha 4,ligatin,matrix metalloproteinase 24和MHC-I molecule HLA-A。结论分离并纯化了CTCL细胞系SeAx细胞膜蛋白,成功制备了多克隆抗体,用SEREX方法从SeAxmRNA建立的cDNA噬菌体表达文库中筛选到4个肿瘤细胞膜蛋白基因,它们可以引起机体产生体液免疫反应,并可能成为潜在的免疫治疗靶点。

应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原

背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多，为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物，本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物淘选和SEREX筛选。PCR扩增阳性克隆插入片段后测序，结果与GeneBank数据库中已知基因进行同源性比较，分析其生物学特性。结果用非小细胞肺癌血清对噬菌体展示文库进行筛选，共获得31个阳性克隆，测序后发现其代表15个基因，其中12个与已知cDNA序列同源，与肺癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切；另外3个未发现有同源基因，可能是新基因。结论应用SEREX技术发现15个肺癌相关抗原和3个肺癌相关抗原的候选基因，为进一步的深入研究打下良好的基础。

SEREX筛选肿瘤抗原进展

肿瘤抗原的鉴定是肿瘤免疫学的重要任务之一,也是肿瘤免疫治疗发展的必然途径。重组cDNA表达文库的血清学分析法(serological analysis of re-combinant cDNA expression library,SEREX)是一种重要的筛选肿瘤抗原的方法,为临床肿瘤标志物的筛选、鉴定及肿瘤疫苗的研制提供了重要的技术手段。