靶向SET的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:针对PP2A内源性抑制剂SET基因的不同部位,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒,鉴定并筛选出最佳抑制效率的表达质粒.方法:针对SET基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到真核表达载体pGPU6中,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4.利用脂质体转染人胃癌细胞株BGC-823,Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒.结果:4个靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4经限制性酶切和测序证实基因已正确插入,荧光显示转染效率可达到80%以上.Western blot法证实pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3明显降低BGC-823细胞内SET蛋白的表达.pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3对SET蛋白表达的抑制效应在72h达到最强.结论:成功构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4,并筛选出最佳抑制效率的表达质粒,为今后研究SET在胃癌中的作用机理奠定了基础.

治疗伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病的新型多肽SP2及其作用机制

载脂蛋白E模拟多肽COG133具有拮抗SET蛋白和提高细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性,可以治疗包括T315I突变导致的耐药慢性粒细胞白血病。本研究在载脂蛋白E模拟多肽COG133的基础上设计了9条新的多肽并进行了活性筛选,得到1条活性明显优于COG133的多肽SP2。SP2对BaF3-p210(T315I)细胞作用72 h的IC50为(2.9±0.1)μmol/L,是COG133[IC50:(26.5±1.2)μmol/L]的十分之一。其作用机制是通过拮抗SET蛋白,提高细胞PP2A活性,使pBCR-ABL1去磷酸化进而最终导致细胞凋亡。

靶向调控SET基因的microRNAs研究进展

SET(也称作I2PP2A或TAF-1β)是一种多功能的原癌蛋白质,广泛参与细胞周期、细胞迁移、细胞凋亡、转录调节、DNA修复和上皮间质转化等细胞生物学过程,SET介导的蛋白磷酸酶2A(PP2A)的活性抑制是促进癌症发生和发展的重要调节机制。SET蛋白在多种组织细胞中广泛表达,其高表达与多种肿瘤的发生发展以及临床预后不良密切相关,是很有前景的抗肿瘤治疗靶点。microRNAs(miRNAs)是一种高度保守的、具有组织特异性的非编码小RNA,通常可与靶基因mRNA的非翻译区或编码区结合,调控靶基因的表达,在肿瘤中发挥抑癌或致癌的作用。目前已发现多个miRNAs可以作为SET的上游调控因子,通过靶向SET进而调节下游相关信号通路参与恶性肿瘤的重要生物进程。本综述简要总结了在肿瘤细胞生长、迁移或治疗过程中对SET具有调节作用的miRNAs,以期为SET介导肿瘤的有效治疗和预后改善提供帮助。

癌蛋白SET在胃癌中的表达及作用机制研究

目的:探讨癌蛋白SET(SE translocation)在胃癌中的作用机制及生物学功能。方法:用Western blot、免疫组化实时荧光定量PCR法检测SET及其下游相关蛋白在胃癌组织及细胞中的表达及活化;siRNA及shRNA在胃癌细胞中敲低SET表达,MTT法检测细胞增殖能力,裸鼠皮下荷瘤模型检测SET对肿瘤发生的影响;Transwell侵袭实验及划痕实验检测细胞转移能力;Western blot及蛋白酶活性实验检测SET下游因子表达及活化。结果:与癌旁组相比,SET表达量在胃癌组织中异常上调。敲低SET后发现细胞增殖、肿瘤生长、集落形成、转移能力降低。SET在胃癌发生和转移中的作用主要通过调节其下游蛋白磷酸酶2A(PP2A)发挥作用。结论:SET抑制PP2A在胃癌增殖和转移中具有重要作用。SET可以作为胃癌的诊断标志物及潜在药物治疗靶点。