Wnt抑制因子FrzA/sFRP-1在冠心病中研究进展

FrzA基因,即可溶性卷曲相关蛋白1,通过与Wnt信号通路具有同源结构的特异性受体卷曲蛋白受体竞争结合而抑制Wnt信号通路。近期研究表明,抑制Wnt信号通路有益于减少心肌梗死面积,减轻心室重塑,改善心功能。而作为Wnt信号通路的抑制因子,FrzA在这个过程中起了重要的作用,这提示FrzA有可能成为未来冠心病基因靶向干预治疗手段之一。现对目前关于FrzA在冠心病中的研究进展进行归纳总结,并探讨FrzA在冠心病中的作用及未来发展趋势。

尖锐湿疣组织中sFRP-1和wnt-1蛋白的检测

目的检测尖锐湿疣(CA)组织中sFRP-1,wnt-1蛋白表达,了解它们在CA发病中的可能作用。方法采用免疫组化法检测20例CA组织和15例正常包皮组织中sFRP-1,wnt-1蛋白表达。结果CA组织中sFRP-1的表达显著弱于正常包皮组织(P<0.001);wnt-1的表达强于正常包皮组织(P<0.05)。结论CA组织中sFRP-1和wnt-1的表达异常,提示sFRP-1/wnt-1信号通路可能参与CA的发病。

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质sFRP-1表达的影响

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质Wnt通路抑制因子-分泌型卷曲相关蛋白-1(sFRP-1)表达的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法诱导建立糖尿病肾病(DN)模型,实验分组为:正常对照组(对照组)、DN模型对照组(模型组)、益肾胶囊组、氯沙坦组,每组8只。益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625 mg.kg-1.d-1,氯沙坦组每只灌胃氯沙坦20 mg.kg-1.d-1,正常组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃,于2、4、8、12周末测定24 h尿蛋白定量,于治疗12周后测定各组血糖、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),同时观察肾小管病理损伤,并采用免疫组化和实时荧光定量PCR方法观察大鼠肾小管间质中sFRP-1、Wnt通路关键调节因子β-catenin表达情况及肾组织中sFRP-1、β-catenin mRNA的表达。结果:12周末,与对照组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白定量、肾小管损伤指数均显著上升,免疫组化示:肾小管间质中sFRP-1表达增加,β-catenin出现胞浆或(和)核表达,实时荧光定量PCR结果显示二者mRNA表达上调(P<0.05);益肾胶囊治疗后,与模型组相比,肾小管间质中sFRP-1表达进一步增加,肾组织中sFRP-1 mRNA进一步上调,β-catenin胞浆或(和)核表达减少,β-catenin mRNA表达下调(P<0.05)。结论:益肾胶囊可能通过上调sFRP-1在DN大鼠肾小管间质的表达,发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。

香连片对小鼠溃疡性结肠炎癌变过程中WIF-1和SFRP-1mRNA表达的影响

目的探讨香连片对小鼠溃疡性结肠炎癌变过程中Wnt抑制因子1（WIF-1）和分泌型卷曲相关蛋白（SFRP-1）的影响。方法将60只BALB／C小鼠随机分为空白组（10只）、模型组（14只）、香连片低剂量组（12只）、香连片高剂量组（12只）和柳氮磺胺嘧啶组（12只）。除空白组外，其余各组采用DMH／DSS复合法诱导小鼠溃疡性结肠炎癌变模型，造模时间为18周。各组于造模前1周给予相应的干预措施，至造模的第10周结束；其中空白组和模型组予等量蒸馏水，各给药组给予相应的药物。用药时间为11周。观察小鼠体质量、粪便、耗食和精神状态等一般情况，结肠肿瘤的形成情况，HE染色镜下病变肠组织形态学改变，并以Real-timePCR检测WIF-1和SFRP-1mRNA的表达。结果在造模后期（第13-18周），模型组小鼠耗食减少，精神委靡，体质量明显减轻，与空白组比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）；而香连片低剂量和高剂量组小鼠体质量下降与模型组比较无明显差异（P〉0．05）。模型组结肠黏膜可见团块状肿块形成，HE染色可见模型组小鼠结肠黏膜腺体增生明显、细胞排列紊乱、核染色加深；香连片低剂量、高剂量组虽可见腺体增生，但细胞分化未见异型性。香连片各剂量组WIF-1mRNA表达上调，与模型组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；香连片各剂量组与模型组比较，SFRP-1mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论香连片IJ以通过减轻小鼠溃疡性结肠炎延缓肠黏膜细胞的不典型增生，其机制与上调WIF-1基因的表达，从而抑制Wnt／13-eatenin信号通路的异常激活有一定的关系。

水牛SFRP 1基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

【目的】获取水牛分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因CDS区序列,并预测其编码蛋白的结构功能,构建SFRP 1基因真核表达载体,检测SFRP 1基因在水牛不同组织中的表达情况,为探索SFRP 1基因在水牛生长发育中的作用奠定基础。【方法】以水牛卵巢组织cDNA为模板,通过RT-PCR对SFRP 1基因CDS区序列进行扩增并测序,利用生物信息学在线分析软件对水牛SFRP 1基因与不同物种进行比对和系统进化树构建,并预测SFRP1蛋白理化性质、信号肽、跨膜结构等。将获得的目的基因连接至pCMV-HAhyPBase-mcheery载体并转染至水牛颗粒细胞,检测转染后荧光和基因表达情况。通过实时荧光定量PCR检测水牛不同组织中SFRP 1基因表达情况。【结果】水牛SFRP 1基因CDS区长927 bp,共编码308个氨基酸。多重序列比对结果显示,水牛SFRP 1基因氨基酸序列与黄牛、牦牛、山羊、虎鲸、黑猩猩、北极狐、猫、人、小鼠的相似性分别为100%、100%、99.65%、98.58%、98.23%、98.23%、98.58%、98.23%、96.45%,存在CRD_FZ、NTR_like和DUF3367结构域。水牛SFRP 1基因核苷酸序列与黄牛、绵羊、山羊、牦牛、野牛、马鹿、野骆驼、猪、人的相似性分别为97.3%、95.9%、95.8%、94.5%、94.2%、93.7%、80.4%、78.5%和77.3%。系统进化树结果显示,水牛与黄牛、牦牛、野牛聚为一支。生物信息学分析结果显示,SFRP1蛋白呈碱性,为不稳定蛋白;第1—15位氨基酸处存在信号肽,为分泌型蛋白,存在跨膜结构,主要定位于细胞外;存在21个磷酸化位点和8个O-糖基化修饰位点。二级结构主要由α-螺旋、延伸链和无规则卷曲构成;水牛、黄牛、人的SFRP1蛋白三级结构高度相似。成功构建pCMV-mcheery-SFRP1真核表达载体并转染水牛颗粒细胞,转染72 h后pCMV-mcheery-SFRP1重组质粒组细胞内SFRP 1基因表达量极显著高于对照组(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,SFRP 1基因在水牛不同组织中均有表达,且在脾脏中表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。【结论】SFRP 1基因在不同物种以及遗传进化过程中具有高保守性,在水牛不同组织中广泛表达。研究结果为今后探究SFRP 1基因在水牛生长发育中的功能及分子机制奠定基础。

GLI-2和SFRP-1在髓母细胞瘤中的表达及其意义

目的探讨GLI-2(GLI family zinc finger 2)和SFRP-1(Secreled frizzled-related protein 1)在髓母细胞瘤(Medulloblastoma,MB)组织中的表达及其意义。方法采用SP免疫组化法检测32份MB组织中GLI-2和SFRP-1的表达,分析两种蛋白之间及其与MB临床病理特征之间的相关性。结果 32例MB中,GLI-2和SFRP-1的阳性表达率分别为50%(16/32)和68.75%(22/32);MB中GLI-2和SFRP-1的表达在不同年龄、性别、肿瘤大小及部位中,差异均无统计学意义(P>0.05);SFRP-1在SHH-MB与NON-SHH-MB中的表达差异有统计学意义(P<0.001);GLI-2与SFRP-1在MB中的表达呈显著正相关(P<0.001)。结论 GLI-2和SFRP-1的异常表达可能对MB的发生、发展起一定的作用。GLI-2和SFRP-1可作为MB重要的生物学指标,有助于对MB患者危险度评估及患者术后放化疗方案的选择。

WIF-1、SFRP-1在环磷酰胺致大鼠神经管畸形中神经上皮细胞表达的变化

目的:通过检测WIF-1和SFRP-1在环磷酰胺(CP)致大鼠神经管畸形(NTDs)中神经上皮细胞的表达及表达的变化,研究CP对胎鼠神经上皮细胞Wnt信号通路的影响,探讨NTDs发生的分子机制,为NTDs的预防、基因治疗提供理论依据。方法:将SD孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于妊娠13天8～9时一次性腹腔注射CP(15 mg/kg)和等量的生理盐水。分别于给药后8、12、24 h处死孕鼠,剖腹取出胎鼠,用10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋、连续切片。应用免疫组织化学方法检测WIF-1与SFRP-1在神经管神经上皮细胞的表达及其变化。结果:①WIF-1免疫组化显示,给药后8 h,实验组WIF-1阳性细胞分布与对照组相似(P>0.05);给药后12 h,实验组WIF-1阳性表达增强(P<0.05);给药后24 h,实验组与对照组相比,神经管背侧、顶板区WIF-1阳性表达明显增强(P<0.01)。②SFRP-1免疫组化显示,SFRP-1在实验组和对照组各个时间段均有阳性表达,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:①WIF-1在神经上皮细胞表达增强与CP致NTDs密切相关。②SFRP-1在神经上皮细胞表达的改变未发现与CP致NTDs有相关性。③Wnt信号通路异常与CP致NTDs密切相关。

盐酸氨溴索联合N-乙酰半胱氨酸治疗老年COPD的效果及对患者血清VAP-1、SFRP-1、ECP水平的影响

目的探讨盐酸氨溴索联合N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗老年慢性阻塞性肺病(COPD)的效果及对患者血清血管粘附蛋白-1(VAP-1)、分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP-1)、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平的影响。方法选取2019年1月~2020年1月我院收治的125例老年COPD患者,按随机数字表法分为对照组62例与观察组63例。对照组给予盐酸氨溴索治疗,观察组在对照组基础上给予NAC治疗,比较两组治疗疗效、血清VAP-1、SFRP-1、ECP、气流受限指标第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%pred)、肺活量占预计值百分比(FVC%pred)、FEV_(1)/FVC及不良反应。结果观察组总有效率为96.83%,高于对照组的83.87%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组血清VAP-1、SFRP-1、ECP水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组FEV_(1)%pred、FVC%pred、FEV_(1)/FVC高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸氨溴索联合NAC治疗老年COPD疗效确切,能够降低VAP-1、SFRP-1、ECP含量,改善气流受限症状。

糖尿病肾病患者血浆中VCAM-1、MIF、SFRP-5含量与肾功能损害的相关性研究

目的:分析糖尿病肾病患者血浆中血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、巨噬细胞游走抑制因子(MIF)、分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)含量与肾功能损害的相关性。方法:选取119例2型糖尿病肾病患者作为观察组,选取100例健康体检人群作为对照组。对比两组研究对象的血浆VCAM-1、MIF、SFRP-5含量,肾功能指标、肾纤维化指标、氧化应激指标含量等差异。结果:观察组血浆VCAM-1、MIF含量显著高于对照组,SFRP-5含量显著低于对照组;观察组血浆β2-MG、Scr、UA、BUN含量高于对照组,Alb含量及Ccr水平低于对照组;观察组血浆TIMP-1、TGF-β1、CⅣ、CTGF、Prolidase含量高于对照组;观察组血浆ROS、SOD、MDA、LHP含量高于对照组,GSH-PX、T-AOC含量低于对照组。2型糖尿病肾病患者血浆中VCAM-1、MIF、SFRP-5含量与肾功能损害指标呈直接相关关系。结论:血浆中VCAM-1、MIF、SFRP-5含量是判断DN患者病情严重程度的可靠指标,有望为疾病早期筛查及合理治疗提供依据。

尖锐湿疣组织中分泌性卷曲相关蛋白-1和wnt-1蛋白的表达与细胞凋亡指数检测

目的:检测尖锐湿疣(CA)组织中分泌性卷曲相关蛋白(sFRP)-1和wnt-1蛋白的表达水平和细胞凋亡指数,了解它们在CA发病中可能的作用。方法:采用免疫组化法检测sFRP-1、wnt-1蛋白的表达水平,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记(TUNEL)法检测,计算细胞凋亡指数。结果:CA组织中sFRP-1的表达显著弱于正常包皮组织,wnt-1的表达强于正常包皮组织;CA组织中细胞凋亡指数明显高于正常包皮组织。结论:在CA组织中sFRP-1和wnt-1蛋白表达异常以及细胞凋亡指数增高,提示sFRP-1/wnt-1通路可能参与CA的发病。

肾透明细胞癌中分泌型卷曲相关蛋白1基因甲基化及其表达与亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性的关系

目的探讨人肾透明细胞癌组织中分泌型卷曲相关蛋白1基因(SFRP 1)的甲基化状态及其mRNA表达与亚甲基四氢叶酸还原酶C677T(MTHFR C677T)基因多态性的关系。方法采用PCR-RFLP技术分别检测38例手术切除的肾透明细胞癌区和外周正常肾脏组织标本MTHFR基因677(C→T)多态,并分别以Real-time PCR和和甲基化特异性PCR(MSP)技术检测SFRP 1基因的表达和甲基化状态。结果 SFRP 1基因失表达和/或低表达的肾透明细胞癌组织其启动子区处于高甲基化状态,MTHFR 677CC基因型的肾透明细胞癌组织SFRP 1甲基化升高且其表达降低,SFRP 1的甲基化及其表达与MTHFRC677T基因多态性有明显相关性。结论 MTHFR基因多态性通过影响SFRP 1基因的甲基化状态而调控其表达,可能在肾癌的发生、发展中具有重要作用。

SFRP1基因甲基化及其蛋白在肺腺癌中的表达及临床意义

目的探讨SFRP1基因甲基化及其蛋白在肺腺癌组织中的表达。方法收集手术切除的肺腺癌标本60例和癌旁组织30例,采用甲基化特异性PCR法、实时荧光定量PCR法和免疫组织化学染色法分别检测SFPR1基因甲基化、m RNA及蛋白的表达情况。结果 SFRP1基因甲基化率在肺腺癌中(58.3%)表达明显高于癌旁组织(20.0%)(P=0.001)。SFRP1 m RNA在肺腺癌(0.847±0.297)中的表达明显低于癌旁组织(2.019±0.445)(P<0.01)。SFRP1蛋白在肺腺癌中的阳性表达率为38.3%(23/60),明显低于癌旁组织中的表达率83.3%(25/30)(P<0.001);SFRP1蛋白表达与肺腺癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移情况有关(均P<0.05)。SFRP1基因甲基化与其蛋白表达缺失存在相关性(r=-0.585,P<0.001)。结论 SFRP1蛋白的表达降低可能是由于SFRP1基因甲基化所致,SFRP1基因甲基化及其蛋白表达与肺腺癌组织分化程度及淋巴结转移情况密切相关。

分泌型卷曲相关蛋白1在心血管疾病中的研究进展

分泌型卷曲相关蛋白1(sFRP-1)基因实质为一种分泌型糖蛋白,主要与Wnt信号通路具有同源结构的卷曲蛋白受体竞争性结合,通过对Wnt信号通路的负调控,广泛介入到调控细胞增殖、分化、凋亡、癌变以及调节机体的生长发育、疾病等病理生理的复杂过程.抑制Wnt信号通路可以阻止心肌细胞缺血坏死面积的进一步扩大,延缓心肌重塑的过程,进而改善预后.作为Wnt信号通路的抑制因子,sFRP-1的作用不可忽视.相关实验研究结果表明,sFRP-1基因很有可能成为未来心血管疾病治疗的靶向基因.

sFRP、WIF-1、CD133、CD44在食管癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨s FRP、WIF-1、CD133、CD44在食管癌中的表达与临床病理特征之间的关系,为食管癌的研究提供新思路。方法选取2013年1月-2013年8月经手术切除的食管癌标本40例,术后病理均证实为食管癌患者,采用RT-PCR方法分析s FRP(分泌型卷曲相关蛋白)、WIF-1(Wnt抑制因子-1)、CD133(白细胞分化抗原分化群第133号)、CD44(白细胞分化抗原分化群第44号)的表达情况,应用SPSS 14.0统计软件进行数据分析,采用χ2检验统计方法。结果 s FRP、WIF-1、CD44、CD133基因在食管癌组织阳性表达率为32.50%,42.50%,60.00%,72.50%,在癌旁组织阳性表达率为65.00%,70.00%,37.50%,47.50%。CD44、CD133基因在食管癌组织中表达水平高于癌旁组织(P<0.05),s FRP、WIF-1基因则在食管癌组织中表达水平低于癌旁组织(P<0.05),差异有统计学意义。结论 s FRP、WIF-1在食管癌组织中表达低于癌旁组织,CD44、CD133在食管癌组织中表达高于癌旁组织。s FRP、WIF-1基因低表达及CD44、CD133基因高表达可能与食管癌的发生、发展有关。

外源性分泌性卷曲相关蛋白干预对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖的影响

目的检测。肾母细胞瘤SK—NEP-1细胞中wnt通路分泌性卷曲相关蛋白（sFRP-1）基因及相关基因的表达；探讨不同浓度sFRP-1蛋白对细胞增殖的影响及可能的机制。方法RT—PCR方法检测肾母细胞瘤细胞株SK—NEP-1细胞及肾胚胎细胞293细胞中wnt通路相关分子sFRP-1、WNT4及β-catenin基因的表达；SK-NEP-1细胞中加入不同浓度的sFRP-I蛋白干预，观察细胞增殖变化，实验分为4组，无干预（对照组）；低剂量组：sFRP-1（500ng／ml）；高剂量组：sFRP-1（10μg／m1）；高剂量抗体组：sFtP-1抗体（10〉g／ml），分别在干预后0、24、48、72h用CCK-8试剂检测比较各组细胞的光吸收度值（AV）以评估细胞活力。结果SK—NEP-1细胞与胚胎293细胞均有sFRPI基因表达，而WNT4基因表达不明显。sFRP-1蛋白干预实验显示，低剂量组及高剂量抗体组干预前后与对照组比较，AV值无明显变化，而高剂量组的AV值在干预24、48h均较其他组明显降低，分别为对照组的0．82倍和0．79倍，表明细胞增殖受抑制。结论肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞中有sFRPl基因表达，外源性加入低浓度的sFRP-1蛋白并不能对Wnt／β-catenin通路产生影响，只有在加入高浓度的sFRP-1蛋白时才能对SKNEP-I细胞增殖产生抑制作用。