miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响

目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠癌组织中低表达(P<0.05);TargetScan预测软件和双荧光素酶报告基因实验表明miR-27a靶向调控SFRP1;与NC组相比,miR-27a mimic组miR-27a表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,SFRP1蛋白表达降低,Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05);与miR-27a mimic组相比,miR-27a inhibitor组细胞内miR-27a表达下降,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,SFRP1蛋白表达增加,Wnt4和β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-27a能够靶向调控SFRP1,通过上调SFRP1,阻断下游的Wnt/β-catenin信号通路,抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学过程,从而发挥抑癌作用。为临床治疗提供了新方向。

miR-586通过SFRP1调控骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的探究miR-586调控人骨肉瘤细胞U2OS的生物学行为的可能机制。方法通过比较骨肉瘤细胞系和人成骨细胞中miR-586的差异表达筛选目标细胞株,干扰miR-586表达后检测其对目标细胞株增殖、迁移、侵袭能力的影响;用双荧光素酶实验、实时荧光定量聚合酶链式反应、Western blot验证miR-586与SFRP1相关性,检测干预miR-586、SFRP1后对目标细胞株迁移、侵袭能力的影响。结果相较于人成骨细胞hFOB1.19,骨肉瘤细胞系中U2OS细胞的miR-586表达量显著增加;调低miR-586后U2OS细胞增殖、侵袭、迁移能力下降,SFRP1的mRNA及蛋白表达增加;过表达miR-586后U2OS细胞增殖、侵袭、迁移能力上升,SFRP1的mRNA及蛋白表达下降;同时调低miR-586、SFRP1后,U2OS细胞侵袭及迁移能力较敲低miR-586组上升。结论在本研究中,miR-586/SFRP1轴调控骨肉瘤细胞U2OS的增殖与生物学行为,具有作为骨肉瘤的潜在诊断、治疗标志物的可能性。

SFRP1减轻血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞损伤的机制

目的研究分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)1减轻血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导H9C2心肌细胞损伤的机制。方法体外培养和扩增足量H9C2心肌细胞系,给予1μmol/L AngⅡ刺激H9C2心肌细胞建立一个体外心肌肥大模型。采用腺相关病毒9型(AAV9)-SFRP1对其进行过表达处理,用细胞计数试剂盒(CCK)8活力测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析相关蛋白表达率,检测心肌肥大指标细胞面积。结果AngⅡ诱导后,H9C2细胞凋亡率明显升高,增殖率明显降低,给予过表达SFRP1后细胞凋亡率显著降低,增殖率明显升高(P<0.05)。过表达SFRP1可明显逆转AngⅡ诱导对H9C2细胞的B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素(Cyt)c和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)等蛋白表达促进和Bcl-2蛋白表达抑制作用及对心房钠尿肽(ANP)、脑钠尿肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(MHC)等心肌肥大蛋白促进作用(P<0.05)。同时过表达SFRP1可促进ATG5和Beclin1等自噬相关蛋白表达(P<0.05)。结论过表达SFRP1能够促进心肌细胞增殖和抑制凋亡,同时启动心肌肥大进程中自噬程序,清除凋亡心肌细胞,是抑制心肌肥大的重要基因和潜在治疗靶点。

SFRP1基因甲基化在儿童急性淋巴细胞白血病中的临床意义

目的:探讨SFRP1基因及其甲基化在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测43例新确诊ALL患儿化疗前(初发组)和诱导缓解化疗后d 46骨髓达完全缓解(缓解组)时的骨髓单个核细胞中SFRP1基因甲基化状态,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SFRP1 mRNA表达,蛋白印迹(Western blot)法检测SFRP1蛋白表达,并收集患儿的临床资料,分析SFRP1基因甲基化在儿童ALL中的临床意义。结果:初发组SFRP1基因启动子甲基化阳性率(44.19%)明显高于缓解组(11.63%)(χ^(2)=11.328,P<0.05)。初发组患儿骨髓单个核细胞中SFRP1 mRNA及蛋白相对表达量均显著低于缓解组(P<0.05)。初发组SFRP1基因启动子甲基化与危险度(χ^(2)=15.613,P=0.000)及患儿生存(χ^(2)=6.561,P=0.010)有关,SFRP1基因高甲基化患儿危险度明显升高、无事件生存时间缩短,而其他临床资料间无明显差异。结论:SFRP1基因启动子高甲基化可能参与儿童ALL的发生发展,其高甲基化可能与预后不良有关。

SFRP1通过MAPK信号通路对牙髓干细胞活性及血管生成的机制研究

目的:探究牙髓干细胞的分子调控机制。方法:购买人源牙髓干细胞(DPSC),转染si-NC/SFRP1至DPSC,qRT-PCR和Westernblot检测SFRP1的表达。CCK-8、流式细胞术检测各组细胞的增殖活力及凋亡情况。细胞划痕实验、管状形成实验检测各组细胞的迁移、血管形成能力变化。Westernblot检测MAPK信号通路关键蛋白p-p38、p38的蛋白变化。结果:敲低DPSC中SFRP1的表达后,DPSC的增殖活力下降,凋亡率显著增多;细胞的迁移能力及血管形成能力显著下降;MAPK信号通路中p-p38的蛋白含量显著降低。结论:敲低SFRP1通过失活MAPK信号通路抑制牙髓干细胞的增殖活力、血管生成能力,促进其凋亡。

丙泊酚通过SFRP1-Wnt信号通路抑制肠癌细胞增殖侵袭的机制研究

目的研究丙泊酚调控SFRP1-Wnt信号通路抑制肠癌细胞增殖侵袭的作用机制。方法肠癌细胞SW620及HT29分为对照组及丙泊酚组,CCK-8检测细胞增殖活性,细胞划痕实验和Transwell小室分析细胞转移和侵袭能力,逆转录实时荧光定量PCR检测Wnt信号通路相关基因,染色质免疫沉淀技术分析EZH2及H3K27Me3在SFRP1启动子区的富集程度。结果CCK-8细胞增殖试验表明肠癌细胞SW620及HT29丙泊酚处理24 h后,丙泊酚组增殖活性显著低于对照组细胞(P<0.01)。细胞划痕实验表明丙泊酚组细胞迁移愈合面积显著低于对照组(P<0.01)。Tranwell小室实验发现,丙泊酚组穿膜细胞数量显著低于对照组(P<0.01)。qPCR检测发现丙泊酚组肠癌细胞较对照细胞,E-cadherin显著上调(P<0.01),而N-cadherin表达减低(P<0.01);Wnt信号通路靶基因β-catenin、c-Myc及Cyclin D1与对照组比较明显下调(P<0.01);Wnt上游调节因子SFRP1也出现了显著表达下调(P<0.01)。染色质免疫沉淀揭示丙泊酚组细胞的EZH2、H3K27Me3在SFRP1启动子富集程度显著低于对照组细胞(P<0.01)。结论丙泊酚具有抑制肠癌细胞增殖和侵袭活性。丙泊酚通过减弱EZH2对SFRP1表观沉默作用,诱导其表达上调,从而减低Wnt信号通路活性。

基于lncRNA DGCR5介导miR-1180/SFRP1/Wnt通路对结直肠癌细胞生长转移的影响

目的分析长链编码RNA(lncRNA)DiGeorge综合征临界区基因5(DGCR5)对结直肠癌细胞生长转移的影响,并基于miR-1180/分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)/Wnt通路分析其中的机制。方法选取人结直肠癌细胞系SW480进行培养。将SW480细胞分为对照组(C组,正常培养SW480细胞)、DGCR5 NC组(SW480细胞+转染DGCR5 NC载体)、DGCR5 mimic组(SW480细胞+转染DGCR5 mimic载体)以及DGCR5 inhibitor组(SW480细胞+转染DGCR5 inhibitor载体)。转染完成后采用qPCR检测各组细胞中DGCR5的表达,验证细胞是否转染成功;分别采用CCK8法、克隆形成实验、平板划痕实验以及Transwell实验检测细胞活力、增值、迁移以及侵袭情况。荧光素酶报告测定lncRNA DGCR5与miR-1180的靶向关系;qPCR检测转染后各组细胞miR-1180/SFRP1的表达;WB检测各组细胞SFRP1、Wnt和β-catenin蛋白表达水平。结果与DGCR5 NC组比较,DGCR5 inhibitor组细胞的lncRNA DGCR5表达水平下降;DGCR5 mimic组细胞的lncRNA DGCR5表达水平上升(P<0.05)。与DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组细胞相对增值率显著下降,DGCR5 inhibitor组显著上升(P<0.05)。与C组、DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组细胞的克隆数目、细胞愈合率、细胞侵袭数量均明显降低,而DGCR5 inhibitor组均明显升高(P<0.05)。荧光酶素报告结果证实miR-1180是lncRNA DGCR5的靶基因。与DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组miR-1180、Wnt mRNA及蛋白、β-catenin蛋白表达水平均明显降低,SFRP1 mRNA及蛋白表达水平明显升高;而DGCR5 inhibitor组miR-1180、Wnt mRNA及蛋白、β-catenin蛋白表达水平均明显升高,SFRP1 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论lncRNA DGCR5可通过抑制miR-1180/SFRP1/Wnt通路的表达来抑制SW480细胞的增殖、转移与侵袭。

SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法用免疫组化SP法和甲基化特异性PCR法检测60例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病肺组织中SFRP1基因甲基化及SFRP1蛋白的表达情况。结果肺癌组织SFRP1基因甲基化阳性高于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.001);SFRP1基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);非小细胞肺癌中SFRP1蛋白阳性率低于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.004);SFRP1蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);SFRP1甲基化和SFRP1蛋白表达缺失存在相关性(P=0.002)。结论 SFRP1基因甲基化可能是导致SFRP1蛋白表达降低的重要机制,进而导致非小细胞肺癌的发生发展。

SFRP1基因表达与大肠肿瘤发生的关系研究

目的:探讨SFRP1与大肠癌发生的关系。方法:运用半定量RT-PCR方法及免疫组化方法检测SFRP1、β-catenin、E-cad在正常大肠粘膜、大肠腺瘤以及大肠腺癌中的表达。结果:大肠腺癌、腺瘤组织的β-catenin、E-cad胞膜表达不同程度缺失,β-catenin呈胞质和胞核异位表达,腺瘤β-catenin的异位表达率为87.5%,低于大肠腺癌(100%,P<0.05)。大肠腺瘤β-catenin、E-cad胞膜表达缺失率分别为37.5%、37.5%,低于大肠腺癌(58.8%、76.4%,P均<0.05)。半定量RT-PCR显示,SFRP1基因在大肠腺瘤、大肠腺癌组织中的表达水平均明显低于大肠正常组织的对照组,且大肠腺癌组织中SFRP1基因的表达水平低于大肠腺瘤(P<0.05)。结论:SFRP1基因下调使其拮抗Wnt途径的功能削弱,导致Wnt的持续存在,其下游基因β-catenin、E-cad异常表达,从而导致大肠粘膜细胞获得恶变潜能。故SFRP1可能为预防大肠肿瘤的发生、大肠肿瘤的早期诊断提供新思路,并为防治大肠肿瘤提供新靶标和实验依据。

贲门腺癌中SFRP1、DKK3基因启动子区甲基化状态的联合分析

目的研究贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中Wnt通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和DKK3(Dickkopf3)基因的甲基化状态,探讨其与贲门腺癌发生的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测89例贲门腺癌及相应正常黏膜组织中SFRP1和DKK3基因的甲基化状态,并分析与临床病理参数间的关系。结果89例贲门腺癌组织中SFRP1和DKK3基因发生甲基化的分别有77例(86.5%)和16例(20.0%),而正常黏膜组织中仅有15例(13.9%)发生了SFRP1基因的甲基化,未发现有DKK3基因的甲基化现象,癌组织中两基因的甲基化率均明显高于正常黏膜组织(P<0.05);SFRP1基因的高甲基化与肿瘤组织的淋巴结转移相关,而与肿瘤的浸润深度、临床分期及病理分级无关,DKK3基因的甲基化与各临床病理指标均无关(P>0.05);联合分析SFRP1和DKK3基因,在贲门腺癌组织中两基因共同发生甲基化的有12例,其共同甲基化率与肿瘤的淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。结论贲门腺癌中SFRP1和DKK3基因的高甲基化状态可能是引起贲门腺癌发生的分子机制之一;SFRP1、DKK3基因甲基化的联合检测对于贲门腺癌的预后评估有一定的参考价值。

肝细胞癌中SFRP1和APC基因启动子甲基化与其mRNA的表达

目的探讨肝细胞癌(HCC)中SFRP1和APC基因启动子甲基化状态及其mRNA表达的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测30例肝细胞癌(HCC组)及相应的癌旁组织(癌旁组)和10例正常肝组织(正常对照组)中SFRP1及APC基因启动子甲基化状态和mRNA的表达水平,分析甲基化与某些临床参数与mRNA表达的关系。结果HCC组、癌旁组及正常对照组中的SFRP1和APC基因启动子甲基化率分别是11/30,4/30,0/10和14/30,5/30,0/10;HCC组明显高于其余两组(P<0.05)。SFRP1基因启动子甲基化与临床资料无关(P>0.05);APC基因启动子甲基化与年龄(<60)岁和癌肿无假包膜有关(P<0.05)。HCC组SFRP1基因mRNA表达明显低于其余两组(P<0.05),各组APC基因mRNA表达差异无显著性。两基因甲基化之间无相关性。结论SFRP1和APC基因启动子甲基化与HCC的形成和进展有关,但HCC组织中基因甲基化与mRNA表达的关系尚不明确。

食管鳞状细胞癌中SFRP1、Wnt-1的表达及临床意义

目的:研究分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和Wnt-1在食管鳞癌中的表达情况,探讨其在食管鳞状细胞癌发生发展及与临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学法(SP法),检测60例食管鳞状细胞癌组织和40例正常食管黏膜中SFRP1和Wnt-1蛋白的表达。结果:食管鳞状细胞癌中SFRP1的阳性表达率为25.0%,显著低于癌旁正常组织黏膜中的92.5%(χ2=43.81),Wnt-1在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率为73.3%,显著高于癌旁正常组织中的17.5%(χ2=29.94)。在食管鳞癌组织中,SFRP1的表达与临床病理因素无相关性,Wnt-1的表达与组织分化程度有关。结论:SFRP1和Wnt-1在食管鳞癌的发生、发展中起一定的作用,它们有望成为辅助参考指标应用于临床,并可能为食管鳞癌的生物治疗和预后判断提供部分理论依据。

血浆SFRP1和Septin9基因甲基化检测对结直肠癌诊断的临床价值

探讨SFRP1和Septin9基因甲基化对结直肠癌的诊断价值,收集结肠镜检查和组织病理学确诊为结直肠癌的患者47例,非结直肠癌的对照组33例;测定两组外周血浆中SFRP1和Septin9基因的甲基化状态,并且进行粪隐血检测。结果显示,SFRP1和Septin9基因甲基化诊断结直肠癌的敏感度为80.0%,特异度为95.3%,粪便免疫学检测的敏感度为86.3%,特异度为54.3%,两者结合后敏感度为97.6%,特异度为96.8%,且明显高于单独检测。故SFRP1和Septin9基因甲基化联合粪免疫学检查可提高结直肠癌诊断的敏感度和特异度,而且具有无创、采样简单、依从性强、实验方法稳定等特点,适宜于临床推广使用。

Wnt通路拮抗基因SFRP1 SFRP2 SFRP4 SFRP5甲基化状态与肾透明细胞癌关系的研究

目的:研究SFRPs家族中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化状况,探讨基因的甲基化与肾透明细胞癌发生发展的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)方法检测66例肾透明细胞癌及30例癌旁组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化状态及其与临床病理学资料之间的关系。结果:肾透明细胞癌组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因甲基化率分别为77.3%(51/66)、72.7%(48/66)、59.1%(39/66)、69.7%(46/66),均显著高于相应的癌旁组织,结果有统计学意义(P<0.05)。与临床病理学资料相联系,肾透明细胞癌组织中SFRP1、SFRP5基因甲基化与肿瘤TNM分期相关;SFRP4基因甲基化与肿瘤的病理学分级相关(P<0.05)。结论:SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因的甲基化均可能参与肾透明细胞癌的发生。SFRP1、SFRP5基因甲基化可能与肾透明细胞癌的发展,浸润和转移有关。SFRP4基因甲基化可能与肾透明细胞癌的恶性行为有关。

牙周炎基础治疗前、后龈沟液中SFRP1总量的变化

目的 :检测慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者牙周基础治疗前、后龈沟液中分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein-1,SFRP1)的总量,探讨SFRP1与CP的关系及其在CP活动中的意义。方法 :选择中、重度CP患者22例为试验组,牙周健康者5例为对照组,分别在刮治前及刮治后1个月检查试验组的探诊出血指数(BI)、牙周探诊深度(PD)及临床附着丧失(CAL),并于洁治后1周、刮治后l周及刮治后1个月收集试验组的龈沟液,采用酶联免疫吸附实验测定SFRP1总量,应用SPSS19.0软件包对数据进行统计学处理。结果:刮治前(洁治后1周)龈沟液中SFRP1总量在中、重度CP组、正常对照组分别为(40.80±4.85)pg、(33.42±2.24)pg,前者显著高于后者(P<0.05)。中、重度CP组刮治后l周、1个月龈沟液中SFRP1总量分别为(45.99+5.23)pg、(36.92±4.00)pg,刮治后1个月SFRP1总量均显著低于洁治和刮治后1周,而刮治后1周龈沟液中SFRP1总量显著高于洁治后1周及刮治后1个月(P<0.05)。结论 :牙周炎患者牙周基础治疗1个月后BI、PD显著改善,且SFRP1在龈沟液中的总量随牙周炎症状况的改变而变化。

SFRP1、β-catenin和E-cadherin蛋白在浸润性乳腺癌中的表达及意义

目的探讨分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related proteins1,SFRP1)、β-catenin、E-cad-herin蛋白在浸润性乳腺癌中的表达情况并分析SFRP1与后二者表达的相关性及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化PV-9000二步法检测50例浸润性乳腺癌和12例癌旁正常乳腺组织中的SFRP1、β-catenin、E-cadherin蛋白的表达。结果浸润性乳腺癌组SFRP1的阳性表达率显著低于癌旁正常乳腺组(P<0.05);浸润性乳腺癌组β-catenin、E-cadherin蛋白异常表达率显著高于癌旁正常乳腺组(P<0.05);随着浸润性乳腺癌TNM分期的增加,SFRP1蛋白表达减少,β-catenin和E-cadherin蛋白异常表达率增加,差异均有显著性(P<0.05);另外,ER受体阳性者β-catenin蛋白的异常表达率高于ER受体阴性者(P<0.05),腋窝淋巴结有转移者E-cadherin蛋白异常表达率高于无转移者(P<0.05);SFRP1蛋白表达与β-catenin、E-cadherin蛋白的异常表达均呈负相关,差异均有显著性(P<0.05),即随着SFRP1蛋白表达的减少,β-catenin、E-cadherin蛋白异常表达率增加。结论 SFRP1表达的降低及其对wnt信号通路抑制作用的减弱致使wnt信号通路中β-catenin、E-cadherin蛋白异常表达增加,这些均与浸润性乳腺癌的发生、发展密切相关。

Wnt信号通路的β-catenin和拮抗因子SFRP1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨Wnt信号通路的β-catenin和拮抗因子SFRP1在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组化PV-8000法检测78例PTC组织和24例正常甲状腺组织中β-catenin和Wnt拮抗因子SFRP1蛋白的表达情况。结果PTC组织中β-catenin阳性表达率明显高于正常甲状腺组织(P<0.01),而Wnt拮抗因子SFRP1蛋白在PTC组织中阳性表达率明显低于正常甲状腺组织(P<0.01)。β-catenin和Wnt拮抗因子SFRP1蛋白表达均与PTC临床分期、淋巴结转移及患者年龄有关(P<0.05或0.01),而均与患者性别、肿瘤大小无关(均P>0.05)。Spearman相关分析显示在PTC组织中两者之间表达呈负相关(P<0.01)。结论β-catenin和SFRP1蛋白表达异常可能与PTC的发生、发展有关。两种蛋白联合检测对判断PTC的恶性程度和病情进展有重要价值。

HCV核心蛋白抑制SFRP1基因启动子活性

目的探讨HCV核心蛋白对Wnt信号通路抑制分子SFRP1启动子活性的影响。方法以人肝癌细胞系Huh7基因组为模板,扩增SFRP1启动子区不同片段(-407～-27bp,-837～-27 bp,-1 202～-27 bp,-1 619～-27 bp,-2 029～-27 bp),以pGL3-Basic为载体分别构建SFRP1启动子区截短报告质粒。将构建好的质粒与pRL-TK共转染HEK293细胞,确定启动子区活性最强区域;分别用编码HCV核心蛋白的腺病毒或GFP对照腺病毒感染已转染重组报告质粒的SK-Hep1细胞,观察AdCore对SFRP1启动子活性的调控作用。结果 SFRP1启动子区域-407～-27 bp片段活性最强;与pGL3-Basic对照组相比较,相对荧光素酶活性增加了37.31±4.45倍(P<0.01),pGL3-S2～S5的活性分别增加了28.74±2.47、13.56±2.52、12.97±0.87和8.29±0.09倍(P<0.01);HCV Core蛋白能够抑制SFRP1基因启动子区活性,其对pGL3-S1的抑制作用最强,与GFP对照组相比较,抑制率为63.8%±1.0%(P<0.01)。结论 HCV核心蛋白通过抑制SFRP1启动子区活性下调SFRP1基因的表达,可能参与Wnt/β-catenin信号通路的活化,并与原发性肝癌的发生密切相关。

浸润性乳腺癌SFRP1基因的表达及其启动子甲基化的意义

目的探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-relat-ed protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关。SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达。结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助。

SFRP1蛋白在前列腺腺癌中的表达及意义

目的:探讨分泌型卷曲相关蛋白1(Secreted Frizzled-related Proteins 1,SFRP1)在前列腺腺癌中的表达情况,并分析其与临床病理参数的关系。方法:采用免疫组化PV-9000二步法检测52例前列腺腺癌和68例良性前列腺增生组织中的SFRP1蛋白的表达。结果:在前列腺腺癌组织中SFRP1蛋白的阳性表达率为23.08%,显著低于良性前列腺增生组织的80.88%(X^2=39.928,P<0.001)。SFRP1蛋白的失表达与前列腺腺癌Gleason评分呈负相关(P<0.05),而与患者年龄、术前血PSA值、TNM分期、是否有骨转移均无关(X^2=0.177、1.915、0.751、1.631,P=0.739、0.200、0.513、0.300)。结论:SFRP1蛋白表达的降低及其对Wnt信号通路抑制作用的减弱,与前列腺腺癌的发生密切相关。