联合检测血浆SFRP2、RNF180基因甲基化在胃癌临床诊断中的价值

背景：胃癌是一种常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率均较高.启动子区异常甲基化导致基因沉默在肿瘤发生、发展中起重要作用.目的：探讨联合检测血浆SFRP2和RNF180基因启动子区甲基化在胃癌早期筛查和临床诊断中的应用价值.方法：收集2011年6月-2013年6月宁波市医疗中心李惠利医院67例胃癌患者和51名健康志愿者的血浆标本,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测血浆中SFRP2、RNF180甲基化水平,并分析其与临床病理特征的相关性.结果：胃癌患者血浆中SFRP2、RNF180基因启动子区甲基化发生率分别为67.2％和53.7％,明显高于健康志愿者的37.3％和23.5％,差异均有统计学意义（P＜0.01）.胃癌患者SFRP2甲基化率与所有临床病理特征均无关（P＞0.05）,RNF180甲基化率与肿瘤大小、临床分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移相关（P＜0.01）.联合检测SFRP2、RNF180基因甲基化能提高胃癌临床诊断率,优于单一基因检测（OR =5.6,95％ CI：2.1 ～14.8,P＜0.01）.结论：联合检测胃癌血浆中SFRP2、RNF180基因启动子区甲基化水平可提高胃癌检出率,是一种简单、非侵入的方法,可用于胃癌患者的临床早期筛查和诊断.

粪便SFRP2基因甲基化与大肠癌的相关性研究

目的探讨粪便中的分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因甲基化对大肠癌患者临床诊断的价值。方法选取2016年1月至2016年12月于我院就诊的大肠癌患者40例,同时选取健康志愿者40例。大肠癌患者作为观察组,健康志愿者作为对照组。采集两组患者粪便,采用PCR与凝胶电泳的方法进行SFRP2基因甲基化测定,比较两组患者SFRP2基因甲基化的情况,判定其是否可以作为大肠癌筛查的重要指标。结果大肠癌患者中出现甲基化的比率为80.00%(32/40),健康志愿者出现甲基化的比率为7.5%(3/40)。与健康志愿者相比,大肠癌患者中出现SFRP2基因甲基化的比率大大升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SFRP2基因的甲基化改变是筛选大肠癌的敏感标志,粪便SFRP2基因甲基化检测有望成为无创诊断大肠癌的新途径。

血清甲基化SFRP2在上消化道肿瘤诊断中的可行性

目的:探究结直肠癌(colorectal cancer,CRC)癌甲基化分泌卷曲相关蛋白2(secreted frizzledrelated protein 2,SFRP2)在上消化道肿瘤诊断中的可行性。方法:收集41例上消化道肿瘤患者和36例无相关胃肠疾病患者的血清,采用基于甲基化特异性PCR的方法检测甲基化的SFRP2(mSFRP2)。结果:SFRP2的灵敏度在上消化道癌中为68.3%,在食管癌中为60.0%,在胃癌中为71.0%。特异性为77.8%,提示SFRP2的甲基化状态与患者年龄、性别及肿瘤属性(原发性或继发性)之间不存在相关性(P>0.05)。此外,随着肿瘤大小和病理分化程度的增加,SFRP2甲基化阳性率也逐渐增加。结论:CRC甲基化标志物SFRP2用于上消化道肿瘤的筛查是可行的,尤其在胃癌检测方面。SFRP2的甲基化检测将是一个新的很有前景的非侵入性的上消化道肿瘤筛查工具。

SDC2基因联合SFRP2基因检测在结直肠癌患者预后评估中的价值

目的探究SDC2基因联合SFRP2基因检测在深圳市龙岗区结直肠癌患者预后评估中的价值。方法选取2016年10月至2018年1月深圳市龙岗区第三人民医院收治的结直肠癌患者210例为研究对象。采集所有结直肠癌患者粪便行SDC2基因和SFRP2基因检测,分析SDC2基因和SFRP2基因表达与患者临床病理学特征以及生存预后的关系,ROC曲线比较SDC2基因、SFRP2基因、SDC2联合SFRP2基因检测在直肠癌患者预后评估中的价值。结果SDC2基因联合SFRP2基因检测(+)和(-)患者在肿瘤大小、肿瘤数目、分化程度、淋巴结是否转移、远处转移、脉管浸润上差异具有统计学意义(P<0.05)。SDC2基因、SFRP2基因、SDC2联合SFRP2基因与结直肠癌患者生存结局均呈正相关关系(P<0.05),SDC2联合SFRP2基因与结直肠癌患者生存结局相关系数较单一基因大(P<0.05)。210例患者随访时间为0~36个月,中位生存时间为22.65个月,1、2、3年生存率分别为71.0%、67.0%、25.0%。SDC2基因、SFRP2基因、SDC2联合SFRP2基因、肿瘤大小、是否淋巴结转移是影响结直肠癌患者死亡的独立影响因素(P<0.05)。SDC2基因、SFRP2基因、SDC2联合SFRP2基因预测结直肠癌患者预后的灵敏度分别为85.0%、78.6%、89.3%,特异度分别为50.0%、50.0%、60.0%,AUC分别为0.675、0.643、0.746,SDC2联合SFRP2预测结直肠癌患者预后灵敏度、特异度和AUC均较单一基因高(P<0.05)。结论在结直肠癌患者预后评估中SDC2联合SFRP2基因检测相对单一基因检测更具有优势。临床上可早期对结直肠癌患者行SDC2联合SFRP2基因检测,早期精准预测疾病预后,减少死亡发生风险。

粪便样本中高纯度人源DNA富集提取方法

粪便肠脱落细胞DNA的提取是影响基因检测技术在结直肠癌筛查领域应用的关键。目的:通过对提取过程、试剂进行研究,开发高纯度人源DNA富集提取方法。方法:对粪便样本提取前均质化方式进行优化,并使用PVP高分子交联剂预处理均质化粪便上清。结果:颠倒混匀均质化方式可以显著降低微生物DNA的比例,实现人源DNA的相对富集;PVP高分子交联剂可以有效去除多糖、蛋白、胆盐等杂质,减少粪便DNA的PCR抑制;结直肠癌患者粪便DNA与癌组织样本DNA的重亚硫酸盐转化测序(BSP)结果中的甲基化特征一致。结论:优化后的粪便DNA富集提取产物PCR检测结果准确性良好,该提取方法可行性高。

急性髓系白血病患者SFRP2基因甲基化的检测及临床意义

目的检测分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因在急性髓系白血病(AML)患者中的甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子区甲基化状态与AML发生的关系。方法收集了99例AML患者的骨髓或外周血样本,匹配以70例门诊普通患者的外周血作为对照。采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对所有研究样本进行SFRP2基因启动子区甲基化状况检测。结果 99例AML患者中有27例检测到SFRP2基因的甲基化,甲基化率为27.3%;而正常对照组中未检出SFRP2基因的甲基化;两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。SFRP2基因的甲基化状态与AML的年龄、性别、临床分型及样本来源(骨髓/外周血)间均未见显著关系(P>0.05)。结论 SFRP2基因启动子区的甲基化与AML的发生有相关性,可能是引起AML的分子机制之一。外周血中的SFRP2基因的甲基化可望作为一项新的分子标记物应用于AML的临床早期检测。

Wnt拮抗基因SFRP1、SFRP2启动子区甲基化与贲门腺癌关系的研究

目的研究贲门腺癌（GCA）中分泌型卷曲相关蛋白1（SFRP1）、分泌型卷曲相关蛋白2（SFRP2）基因启动子区甲基化状态与贲门腺癌的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测GCA癌组织及相应癌旁正常组织中SFRP1和SFRP2基因的甲基化状态，分析其与临床病理特征之间的关系。结果94例GCA组织中SFRP1、SFRP2基因甲基化率分别为87．2％（82／94）和83．0％（78／94），显著高于癌旁正常组织14．9％（7／47）和553％（26／47）（P〈0．001）。GCA患者中无淋巴结转移组SFRP1基因甲基化发生率73．7％（28／38）显著低于有淋巴结转移组的甲基化率96．4％（54／56）（P〈0．05）；SFRP2基因的甲基化与有无淋巴结转移无关。SFRP1和SFRP2基因的甲基化与GCA的组织分化无关。63例贲门腺癌组织中SFRP1和SFRP2基因同时发生甲基化，其中有淋巴结转移的36例高于无淋巴结转移的27例，高中分化腺癌组26例，低于低分化腺癌组37例，侵及肌层及浆膜层的16例低于侵及周围软组织的47例，但以上差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论SFRP1、SFRP2基因可能参与了贲门腺癌的发生发展，并且SFRP1高甲基化状态与贲门腺癌的恶性行为有关。

联合检测SDC2和SFRP2甲基化在结直肠癌筛查中的价值

目的评价在粪便样本中联合检测SDC2和SFRP2基因启动子甲基化在结直肠癌筛查中的应用价值。方法选取海军军医大学长海医院、同济大学附属第十人民医院以及解放军总医院第七医学中心2018年3月至2018年12月收治的500例患者粪便标本,其中结直肠癌132例为肠癌组,进展期腺瘤38例为腺瘤组,健康标本152例为健康组,存在其他肠道病变或非肠癌肿瘤的178例为干扰组,健康组与干扰组共同构成330例肠癌与进展期腺瘤阴性的阴性组。应用甲基化特异度PCR(methylation-specific PCR,MSP)法对上述患者粪便中SDC2和SFRP2基因启动子甲基化进行检测,并与单个基因甲基化检测和粪便免疫潜血试验(FIT)的检测性能相比较,评价其筛查结直肠癌的灵敏度和特异度。结果SDC2和SFRP2两基因联合检测在肠癌组中的灵敏度为97.73%(129/132),显著高于单基因SDC2检测[ 70.45%(93/132),P=0.000]、SFRP2检测[ 81.82%(108/132),P=0.000]以及FIT检测[ 69.70%(92/132),P=0.000]。腺瘤组中SDC2和SFRP2联合检测的灵敏度为57.89%(22/38),显著高于单基因SDC2检测[ 15.79%(6/38),P=0.000]、FIT检测[21.05%(8/38),P=0.021],与单基因SFRP2检测差异无统计学意义[ 47.37%(18/38),P=0.358]。在健康组中,SDC2和SFRP2联合检测的特异度为98.68%(150/152),与单基因SDC2 [100.00%(152/152),P=0.156]、SFRP2 [98.68%(150/152),P=1.000]以及FIT [95.39%(145/152),P=0.091]相比,差异无统计学意义。在干扰组以及阴性组中,两基因联合检测的特异度分别为90.45%(161/178)和94.24%(311/330),均显著高于FIT [73.03%(130/178),P=0.000;83.33%(275/330),P=0.000]。结论粪便中SDC2和SFRP2两基因联合检测优于单基因检测,在肠癌、进展期腺瘤的灵敏度以及在区分良性息肉、其他癌种或非癌肠道病变的特异度上均显著高于FIT,具有潜在的应用价值。

耳垂瘢痕疙瘩分泌型卷曲相关蛋白2的表达及意义

目的探讨分泌的卷曲相关蛋白2（SFRP2）在耳垂瘢痕疙瘩发生发展过程中的表达及作用，为瘢痕疙瘩的基因治疗提供新的线索。方法利用原位杂交和WesternBlot检测伤后3、6、12、24个月耳垂瘢痕疙瘩组织边缘区和中央区SFRP2的表达变化。结果在耳垂瘢痕疙瘩组织中，边缘区伤后12个月组SFRP2的表达显著高于3、6个月组（P〈0．01），而24与12个月组比较，差异无统计学意义。中央区伤后12个月SFRP2的表达出现下降（P〈0．01）；边缘区SFRP2的表达均高于同一时期中央区的表达（P〈0．05，P〈0．01）。瘢痕疙瘩表皮和血管内皮及周围组织SFRP2的表达也增强。SFRP2mRNA和蛋白质的变化相似，只是中央区SFRP2蛋白质的衰减较SFRP2mRNA延后。结论SFRP2的高表达可能参予了瘢痕疙瘩的生长发展，而且瘢痕疙瘩表皮及边缘区SFRP2的高表达对其浸润性、持续性生长作用强于中央区。血管内皮细胞及周围组织SFRP2的高表达也发挥了作用。降低SFRP2的表达可能是基因治疗瘢痕疙瘩的新途径。