丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路。方法将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达;用5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)对AdCore或AdGFP腺病毒感染的SMMC-7721细胞进行去甲基化处理,进一步采用甲基化特异性PCR(MSP)和DNA甲基化测序,检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度,Western blot检测甲基化转移酶Dnmts的表达。结果在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中,SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低(P<0.05);甲基化分析结果表明:SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰;甲基化转移酶Dnmt1、Dnmt3a表达量增加(P<0.05)。结论 HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰,参与HCV相关疾病的发生。

食管癌组织中SFRPs基因异常甲基化检测及意义

目的检测食管鳞状细胞癌和癌旁正常组织SFRPs基因启动子区甲基化变化特征及其与临床病理变化的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)。结果 110例食管鳞癌组织SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化阳性率分别为61.8%(68/110)、66.7%(73/110)、62.7%(69/110)、64.3%(71/110),明显高于癌旁正常组织的13.3%(4/30)、13.3%(4/30)、20%(6/30)、26.7%(8/30)。淋巴结转移组和中、低分化食管鳞癌组织甲基化阳性率明显高于无淋巴结转移组及高分化食管癌组织,但是与性别,年龄及肿瘤分期无明显关联。结论本研究结果显示,SFRPs基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生发展密切相关.这些基因的甲基化检测可为食管癌的防治和预后评价提供遗传学理论依据。。

miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响

目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠癌组织中低表达(P<0.05);TargetScan预测软件和双荧光素酶报告基因实验表明miR-27a靶向调控SFRP1;与NC组相比,miR-27a mimic组miR-27a表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,SFRP1蛋白表达降低,Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05);与miR-27a mimic组相比,miR-27a inhibitor组细胞内miR-27a表达下降,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,SFRP1蛋白表达增加,Wnt4和β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-27a能够靶向调控SFRP1,通过上调SFRP1,阻断下游的Wnt/β-catenin信号通路,抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学过程,从而发挥抑癌作用。为临床治疗提供了新方向。

低表达sFRP4通过PI3K/AKT信号通路作用于肝癌细胞的机制研究

文章研究低表达s FRP4通过PI3K/AKT信号通路对肝癌细胞的具体作用机制,从而指导肝癌防治。实验选取肝细胞L-02、肝癌Huh7、Hep3B、Hep G2和MHCC97-H细胞进行细胞培养,以检测肝癌细胞和肝细胞内sFRP4蛋白表达、sFRP4m RNA表达、sFRP4沉默后HepG2细胞的增殖活性、各组细胞内PI3K、AKT、p21、Bcl-2、c-Myc蛋白与m RNA的表达情况,并对各项检测数据进行统计学分析。研究发现,肝癌细胞内s FRP4的表达情况高于肝细胞;sFRP4沉默后肝癌细胞的增殖、侵袭、转移能力增强,细胞凋亡减少;sFRP4沉默后PI3K/AKT信号通路相关因子的表达明显增强;肝癌中存在PI3K、p-AKT的异常表达,PI3K、AKT信号通路激活会增强肝癌细胞的增殖性、侵袭性、转移性。结果表明,低表达sFRP4通过PI3K/AKT信号通路可以促进肝癌细胞的增殖和侵袭,降低细胞凋亡率。

过表达sFRP3对小鼠原代心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖模型;确认模型构建成功后分别向实验组和对照组细胞转染sFRP3过表达质粒和空载质粒24~48 h。通过Western blot、qRT-PCR的方法在分子层面对sFRP3、Periostin(POSTN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达进行检测;使用MTT法、CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的改变。结果在TGF-β1刺激构建的CFs活化增殖模型中,相较于对照组,模型组sFRP3蛋白及mRNA表达下降,活化增殖相关蛋白PCNA、POSTN和CollagenⅠ表达上调。另外,在质粒转染sFRP3过表达组的CFs中,PCNA、POSTN和CollagenⅠ蛋白及mRNA表达相较于空载组下降。MTT、CCK-8与EdU实验表明,质粒转染sFRP3过表达组的CFs增殖活性较空载组明显下降。结论过表达sFRP3明显抑制CFs活化增殖,提示sFRP3可能是参与调控CFs活化增殖的关键基因。

HOXC6通过激活SFRP1/Wnt/β-catenin信号通路促进前列腺癌进展的机制研究

目的:探讨同源盒家族中的人类同源盒C6(HOXC6)基因在前列腺癌中的表达情况及其对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:应用基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA)数据库中关于HOXC6研究的数据,对其在前列腺癌中的表达水平变化进行分析。采用GEPIA数据库分析HOXC6表达水平与前列腺癌患者生存预后之间的关系。通过Western印迹检测HOXC6蛋白在前列腺癌组织、正常前列腺组织及不同前列腺癌细胞株DU-145、PC-3以及正常人前列腺上皮细胞RWPE-1中的表达情况。在人前列腺癌细胞DU145、PC-3和正常人前列腺上皮细胞RWPE-1中,利用siRNA质粒稳定干扰HOXC6基因表达,采用CCK8、平板克隆、划痕、Transwell侵袭实验检测HOXC6基因对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。通过GEPIA数据库分析Wnt抑癌因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因与HOXC6的相关性,采用Western印迹检测HOXC6-siRNA转染后PC-3细胞中HOXC6、SFRP1、Wnt及β-catenin蛋白表达。结果:HOXC6在前列腺癌组织中的表达高于正常前列腺组织(P<0.01),在前列腺癌细胞中的表达高于正常前列腺上皮细胞(P<0.01)。结合生物信息学分析,HOXC6高表达的PCa患者比低表达的生存率低(P=0.011)。siRNA组HOXC6蛋白相对表达量、吸光度值、克隆形成数、侵袭细胞数低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。通过GEPIA数据库发现SFRP1高表达的前列腺癌患者预后较好,在体外实验中,前列腺癌PC-3细胞系中,Western印迹分析Wnt及β-catenin蛋白的表达均上升,SFRP1蛋白表达明显下降(P<0.05);与siRNA-NC、前列腺癌PC-3相比,siRNA-HOXC6转染组中的Wnt及β-catenin蛋白的表达均明显下降,SFRP1蛋白表达上升(P<0.05)。结论:HOXC6在前列腺癌组织中高表达,并与前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有关;HOXC6通过抑制SFRP1/Wnt/β-catenin信号通路从而促进前列腺癌DU145、PC-3细胞的生长,HOXC6有可能是临床治疗前列腺癌的潜在靶标。

miR-586通过SFRP1调控骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的探究miR-586调控人骨肉瘤细胞U2OS的生物学行为的可能机制。方法通过比较骨肉瘤细胞系和人成骨细胞中miR-586的差异表达筛选目标细胞株,干扰miR-586表达后检测其对目标细胞株增殖、迁移、侵袭能力的影响;用双荧光素酶实验、实时荧光定量聚合酶链式反应、Western blot验证miR-586与SFRP1相关性,检测干预miR-586、SFRP1后对目标细胞株迁移、侵袭能力的影响。结果相较于人成骨细胞hFOB1.19,骨肉瘤细胞系中U2OS细胞的miR-586表达量显著增加;调低miR-586后U2OS细胞增殖、侵袭、迁移能力下降,SFRP1的mRNA及蛋白表达增加;过表达miR-586后U2OS细胞增殖、侵袭、迁移能力上升,SFRP1的mRNA及蛋白表达下降;同时调低miR-586、SFRP1后,U2OS细胞侵袭及迁移能力较敲低miR-586组上升。结论在本研究中,miR-586/SFRP1轴调控骨肉瘤细胞U2OS的增殖与生物学行为,具有作为骨肉瘤的潜在诊断、治疗标志物的可能性。

SFRP5通过抑制Wnt5a/JNK通路减轻缺血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡和心肌纤维化

目的探讨分泌卷曲相关蛋白5(SFRP5)对缺血性心力衰竭(IHF)大鼠心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响及相关作用机制。方法40只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(IHF组)、SFRP5组、SFRP5+Wnt5a激动剂组(SFRP5+Foxy-5组),每组10只。采用超声心动图检测大鼠心功能指标;HE染色、Masson染色观察大鼠心肌病理学改变;TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡;免疫组织化学染色观察大鼠心肌组织纤连蛋白(Fn)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)阳性表达情况;Western blot法检测大鼠心肌组织SFRP5蛋白、无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路蛋白表达。结果与Sham组比较,IHF组大鼠心功能指标左室舒张末期内径(LVEDd)、左室收缩末期内径(LVDs)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)均增加,左室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)均下降(P<0.05);心肌组织存在明显病理改变,心肌纤维化面积增加,心肌细胞凋亡率升高,心肌组织Fn、α-SMA和Cleaved Caspase-3阳性表达均增多(P<0.05);心肌组织SFRP5蛋白表达下降,Wnt5a蛋白表达、p-JNK/JNK比值均升高(P<0.05)。与IHF组相比,SFRP5组大鼠心功能指标和心肌损伤均得到改善,心肌纤维化面积减少,心肌细胞凋亡率降低,心肌组织Fn、α-SMA和Cleaved Caspase-3阳性表达均减少(P<0.05);心肌组织SFRP5蛋白表达升高,Wnt5a蛋白表达、p-JNK/JNK比值均下降(P<0.05)。与SFRP5组比较,SFRP5+Foxy-5组大鼠心功能指标异常,心肌损伤加重,心肌纤维化面积增加,心肌细胞凋亡率升高,心肌组织Fn、α-SMA和Cleaved Caspase-3阳性表达均增多(P<0.05);心肌组织Wnt5a蛋白表达、p-JNK/JNK比值均升高(P<0.05)。结论SFRP5可能通过抑制Wnt5a/JNK信号通路减轻心肌细胞凋亡和心肌纤维化,从而改善大鼠IHF。

血清TGF-β1、Nesfatin-1、SFRP5与2型糖尿病胰岛素抵抗关系探究

目的:探讨血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、Nesfatin-1、分泌型卷曲相关蛋白-5(SFRP5)与2型糖尿病胰岛素抵抗的关系。方法:选取我院2021年4月-2023年4月收治的148例2型糖尿病患者为研究对象,根据稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)检测结果将患者分为轻度胰岛素抵抗组(91例,HOMA-IR<2.5)和中重度胰岛素抵抗组(57例,HOMA-IR≥2.5)。比较两组入院时血清TGF-β1、Nesfatin-1、SFRP5水平,分析入院时血清TGF-β1、Nesfatin-1、SFRP5水平与HOMA-IR的相关性,分析发生中重度胰岛素抵抗的影响因素、联合检测的诊断价值及危险度。结果:入院时,中重度胰岛素抵抗组血清TGF-β1、Nesfatin-1水平高于轻度胰岛素抵抗组,SFRP5水平低于轻度胰岛素抵抗组(P<0.05);入院时,HOMA-IR与血清TGF-β1、Nesfatin-1水平呈正相关,与SFRP5水平呈负相关(P<0.05);入院时,血清TGF-β1、Nesfatin-1、SFRP5水平为2型糖尿病患者发生中重度胰岛素抵抗的影响因素(P<0.05);入院时血清TGF-β1、Nesfatin-1、SFRP5水平联合诊断中重度胰岛素抵抗的AUC为0.808,最佳诊断敏感度为91.23%,特异度为70.33%;入院时血清TGF-β1、Nesfatin-1、SFRP5高水平患者发生中重度胰岛素抵抗的危险度是低水平的3.560、2.134、0.341倍(P<0.05)。结论:血清TGF-β1、Nesfatin-1、SFRP5水平与2型糖尿病胰岛素抵抗密切相关,可作为临床诊断病情的参考依据。

水牛SFRP 1基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

【目的】获取水牛分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因CDS区序列,并预测其编码蛋白的结构功能,构建SFRP 1基因真核表达载体,检测SFRP 1基因在水牛不同组织中的表达情况,为探索SFRP 1基因在水牛生长发育中的作用奠定基础。【方法】以水牛卵巢组织cDNA为模板,通过RT-PCR对SFRP 1基因CDS区序列进行扩增并测序,利用生物信息学在线分析软件对水牛SFRP 1基因与不同物种进行比对和系统进化树构建,并预测SFRP1蛋白理化性质、信号肽、跨膜结构等。将获得的目的基因连接至pCMV-HAhyPBase-mcheery载体并转染至水牛颗粒细胞,检测转染后荧光和基因表达情况。通过实时荧光定量PCR检测水牛不同组织中SFRP 1基因表达情况。【结果】水牛SFRP 1基因CDS区长927 bp,共编码308个氨基酸。多重序列比对结果显示,水牛SFRP 1基因氨基酸序列与黄牛、牦牛、山羊、虎鲸、黑猩猩、北极狐、猫、人、小鼠的相似性分别为100%、100%、99.65%、98.58%、98.23%、98.23%、98.58%、98.23%、96.45%,存在CRD_FZ、NTR_like和DUF3367结构域。水牛SFRP 1基因核苷酸序列与黄牛、绵羊、山羊、牦牛、野牛、马鹿、野骆驼、猪、人的相似性分别为97.3%、95.9%、95.8%、94.5%、94.2%、93.7%、80.4%、78.5%和77.3%。系统进化树结果显示,水牛与黄牛、牦牛、野牛聚为一支。生物信息学分析结果显示,SFRP1蛋白呈碱性,为不稳定蛋白;第1—15位氨基酸处存在信号肽,为分泌型蛋白,存在跨膜结构,主要定位于细胞外;存在21个磷酸化位点和8个O-糖基化修饰位点。二级结构主要由α-螺旋、延伸链和无规则卷曲构成;水牛、黄牛、人的SFRP1蛋白三级结构高度相似。成功构建pCMV-mcheery-SFRP1真核表达载体并转染水牛颗粒细胞,转染72 h后pCMV-mcheery-SFRP1重组质粒组细胞内SFRP 1基因表达量极显著高于对照组(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,SFRP 1基因在水牛不同组织中均有表达,且在脾脏中表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。【结论】SFRP 1基因在不同物种以及遗传进化过程中具有高保守性,在水牛不同组织中广泛表达。研究结果为今后探究SFRP 1基因在水牛生长发育中的功能及分子机制奠定基础。

血液中sFRP2表达水平对STEMI后心室重构影响的研究

目的探明急性STEMI患者血液中血清分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2,sFRP2)表达水平,及其与左心室重构及心功能的相关性,探究sFRP2对STEMI后左室重构的预测价值。方法招募急性STEMI患者137例为STEMI组,健康者103例为健康组。收集两组一般资料及生化指标,测定sFRP2浓度,心脏超声测定STEMI组入院7天及6个月时心功能。依据左室LVEDV增加率是否≥20%将STEMI组分为左室重构组和非左室重构组。对比STEMI组与健康组及两个亚组间的一般资料及血清sFPR2浓度;比较两个亚组入院7天及6个月时心功能。分析sFRP2与STEMI心功能的相关性;Logistic回归分析sFRP2与STEMI后左室重构的相关性,ROC曲线分析sFRP2对STEMI左室重构的预测价值。结果左室重构组sFRP2浓度>非左室重构组>健康组(P<0.05)。sFRP2与STEMI 6个月后LVEDV、LVPWT、IVST、ΔLVEDV以及ΔLVEF存在正相关,与LVEF存在负相关(P<0.05)。结论STEMI患者血清sFRP2浓度升高,且sFRP2水平与STEMI后左室重构呈正相关,与SETMI后心功能呈负相关,随着sFRP2浓度升高左室重构发生风险增加。sFRP2可预测STEMI后心室重构发生风险,联合梗死部位和NT-pro-BNP效果更佳。

宣肺通络平喘汤辅助丙酸氟替卡松治疗哮喘效果及对患者血清SFRP5、YKL-40水平的影响

目的 探讨宣肺通络平喘汤辅助丙酸氟替卡松治疗哮喘效果及对患者血清分泌性卷曲相关蛋白(SFRP)5、甲壳质酶蛋白(YKL)-40水平的影响。方法 将116例支气管哮喘患者随机分为观察组和对照组各58例。对照组给予丙酸氟替卡松,观察组同时给予宣肺通络平喘汤治疗。比较两组临床疗效、临床症状好转时间、中医证候评分、肺功能、炎性指标、血清SFRP5及YKL-40水平。结果 观察组治疗后总效率显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,观察组临床症状好转时间及中医证候评分明显降较低(P<0.05);治疗后观察组肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)水平和FEV1/FVC]明显高于对照组,炎症因子水平及血清YKL-40水平明显低于对照组,血清SFRP5水平明显高于对照组(均P<0.05)。结论 宣肺通络平喘汤辅助丙酸氟替卡松治疗哮喘患者可以降低YKL-40水平,提高SFRP5水平,具有较好的临床疗效。

外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制人骨肉瘤细胞143B增殖

目的 Wnt信号异常激活与肿瘤发生有关,观察Wnt信号的天然拮抗剂FrzB对Wnt信号转导的影响和对肿瘤细胞增殖抑制。方法采用AdEasy系统构建重组腺病毒AdFrzB;卡那霉素抗性筛选、酶切鉴定及荧光显微镜和Western blot检测标记基因GFP和His表达等方法鉴定AdFrzB。AdFrzB与AdWnt3A共感染人骨肉瘤细胞株143B,AdGFP与AdWnt3A共感染为对照,β-catenin/Tcf荧光素酶反应系统检测FrzB对Wnt信号转导的影响;MTT实验检测FrzB对细胞增殖的抑制。结果卡那霉素抗性筛选及酶切鉴定获得pAdFrzB-His;检测到报告基因GFP和His表达,确证AdFrzB构建成功。FrzB抑制了Wnt信号转导并抑制了143B细胞增殖。结论 AdEasy系统有效构建了AdFrzB;外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制143B细胞增殖,FrzB可能是一种天然抗肿瘤因子。

罂粟碱联合生长抑素治疗重症急性胰腺炎的临床效果观察

目的:探究罂粟碱联合生长抑素对重症急性胰腺炎(SAP)临床疗效观察。方法:以不同治疗方案将我院2020年3月—2022年12月收治的96例SAP患者分为参照组(48例)和研究组(48例)。两组均给予常规治疗,参照组采用生长抑素治疗,研究组采用罂粟碱联合生长抑素治疗。比较两组临床疗效、临床症状改善时间[血淀粉酶(AMS)恢复时间、腹痛消失时间、退热时间、肠道功能恢复时间]、血液流变学指标(血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、血细胞比容)、血清因子指标[血清白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)、血清血分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)、可溶性白细胞分化抗原14亚型(sCD14-ST)]、不良反应发生率。结果:研究组临床总有效率为95.83%,高于参照组的81.25%(P<0.05);研究组肠道功能恢复时间、腹痛消失时间、AMS恢复时间、退热时间均短于参照组(P<0.05);治疗后研究组血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、血细胞比容低于参照组(P<0.05);治疗后研究组血清IL-6、PCT、SFRP4、sCD14-ST水平低于参照组(P<0.05);两组不良反应总发生率无明显差异(P>0.05)。结论:罂粟碱联合生长抑素治疗SAP疗效确切,能减少炎症反应发生,优化血液流变学,加速临床症状改善。

分泌型卷曲相关蛋白家族成员在多囊卵巢患者不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的基因表达

目的探讨在多囊卵巢综合征(PCOS)患者与非PCOS患者中,分泌型卷曲相关蛋白(sFRPs)家族成员基因在不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达差异。方法收集27例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的不育女性患者(其中11例PCOS患者,16例非PCOS患者),通过控制性促排卵治疗后,采用标准长方案促排卵,经阴道超声引导下穿刺取卵后,获得共198枚卵丘-卵母细胞复合体(PCOS患者98枚,非PCOS患者100枚);采用机械剥离法获取卵丘颗粒细胞,根据卵母细胞成熟度不同,将对应的卵丘颗粒细胞分为4组:非PCOS患者成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCN-MII),非PCOS患者非成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCN-MI+GV),PCOS患者成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCP-MII)和PCOS患者非成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCP-MI+GV)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测部分sFRPs家族基因成员(sFRP1、sFRP2、sFRP3、sFRP4、sFRP5)在PCOS及非PCOS患者不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达情况。结果 (1)PCOS患者中,在未成熟卵母细胞周围的颗粒细胞中sFRP4的表达显著高于在成熟卵母细胞周围的颗粒细胞中的表达,即sFRP4在CCP-MⅠ+GV组表达高于CCP-MⅡ组[(7.80±1.21)vs.(1.00±0.00)](P<0.05);(2)在非PCOS患者中,sFRPs家族成员sFRP4和sFRP5在不同成熟度卵泡母细胞周围的卵丘颗粒细胞中表达变化显著,CCN-MⅠ+GV组中的表达量均显著高于CCN-MⅡ组[sFRP4(7.04±1.30)vs.(1.00±0.00)](P<0.05)和[sFRP5(2.84±0.73)vs.(1.00±0.00)](P<0.05);(3)sFRP4的表达在PCOS及非PCOS患者间成熟卵母细胞对应的颗粒细胞组间均无显著性差异。结论在PCOS患者中,仅sFRP4在卵丘颗粒细胞上的表达与卵母细胞的成熟度相关;而在非PCOS患者中,sFRP4和sFRP5的表达均与卵母细胞的成熟度相关,其表达量随卵母细胞成熟而降低。

分泌型卷曲相关蛋白在肿瘤中的研究进展

Wnt信号通路在许多生物学过程中发挥重要作用,异常的Wnt信号激活与肿瘤形成有关。分泌型卷曲相关蛋白(SFRPs)是Wnt信号的拮抗因子,在肿瘤中常由于启动子高甲基化而表达沉默,因此被认为是一种抑癌基因。但SFPRs在某些情况下也促进细胞增殖。本文综述近年来SFRPs在肿瘤中的研究进展。

胃癌及癌前病变中幽门螺杆菌感染与分泌型卷曲相关蛋白基因启动子甲基化的关系研究

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染与分泌型卷曲相关蛋白(SFRPs)基因启动子甲基化的关系。方法随机抽取河北医科大学第四医院2012年10—11月内镜咬检不同胃黏膜病变标本72例,其中胃癌40例,异型增生17例,慢性胃炎15例。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术检测72例胃黏膜组织中SFRPs基因启动子甲基化水平,并应用免疫组化法检测H.pylori感染情况。结果 72例标本中,测得SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子甲基化分别为34例(47.2%)、36例(50.0%)、27例(37.5%)和30例(41.7%)。SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子甲基化率:异型增生组〔29.4%(5/17)、35.3%(6/17)、11.8%(2/17)、23.5%(4/17)〕和胃癌组〔72.5%(29/40)、75.0%(30/40)、62.5%(25/40)、65.0%(26/40)〕均高于慢性胃炎组(均为0;P<0.05);胃癌组又高于异型增生组(P<0.05)。72例标本中H.pylori感染率为30.6%(22/72),其中异型增生组、慢性胃炎组H.pylori感染率〔76.5%(13/17)和33.3%(5/15)〕均高于胃癌组〔10.0%(4/40)〕(P<0.05),异型增生组又高于慢性胃炎组(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,H.pylori感染与SFRPs基因启动子甲基化无线性相关(r s=0.264,P>0.05)。结论 SFRPs基因启动子甲基化是胃癌发生的重要因素之一;H.pylori感染也是胃癌发生发展中的重要因素,但是H.pylori感染与SFRPs基因启动子甲基化无关。

联合检测vimentin和SFRP2甲基化在大肠癌筛查中的应用评价

目的评价在粪便样本中联合检测vimentin和SFRP2甲基化来筛查大肠癌的性能。方法搜集合格的新鲜粪便标本95例,其中40例大肠癌患者、25例进展期腺瘤患者和30例结肠镜阴性的正常人,应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测vimentin和SFRP2甲基化状态,并与单个基因甲基化检测和粪隐血试验(FOBT)的诊断性能相比较是否有统计学差异。结果大肠癌组中vimentin和SFRP2甲基化阳性检出率分别为55.0%(22/40)和70.0%(28/40);进展期腺瘤组中为48.0%(12/25)和64.0%(16/25);正常对照组中为6.7%(2/30)和0(0/30)。在病例组中两基因联合检测的敏感性为83.1%(54/65),明显高于vimentin的52.3%(34/65)和SFRP2的67.7%(44/65),更要高于FOBT的27.7%(18/65)(均P<0.05)。而在正常对照组中两基因联合检测的特异性为93.3%(28/30),与vimentin的93.3%(28/30)和SFRP2的100%(30/30)以及FOBT的96.7%(29/30)相比均无明显差异(均P>0.05)。结论在大肠癌筛查中,联合检测粪便中vimentin和SFRP2基因甲基化状态明显优于单个基因和粪便潜血试验,具有潜在的应用价值。

SFRP1基因表达与大肠肿瘤发生的关系研究

目的:探讨SFRP1与大肠癌发生的关系。方法:运用半定量RT-PCR方法及免疫组化方法检测SFRP1、β-catenin、E-cad在正常大肠粘膜、大肠腺瘤以及大肠腺癌中的表达。结果:大肠腺癌、腺瘤组织的β-catenin、E-cad胞膜表达不同程度缺失,β-catenin呈胞质和胞核异位表达,腺瘤β-catenin的异位表达率为87.5%,低于大肠腺癌(100%,P<0.05)。大肠腺瘤β-catenin、E-cad胞膜表达缺失率分别为37.5%、37.5%,低于大肠腺癌(58.8%、76.4%,P均<0.05)。半定量RT-PCR显示,SFRP1基因在大肠腺瘤、大肠腺癌组织中的表达水平均明显低于大肠正常组织的对照组,且大肠腺癌组织中SFRP1基因的表达水平低于大肠腺瘤(P<0.05)。结论:SFRP1基因下调使其拮抗Wnt途径的功能削弱,导致Wnt的持续存在,其下游基因β-catenin、E-cad异常表达,从而导致大肠粘膜细胞获得恶变潜能。故SFRP1可能为预防大肠肿瘤的发生、大肠肿瘤的早期诊断提供新思路,并为防治大肠肿瘤提供新靶标和实验依据。

SFRP2和β-catenin在大肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨分泌型Frizzled相关蛋白2(Secreted Frizzled-related proteins2,SFRP2)和β-连接素(β-catenin)在大肠癌发生、发展中的作用.方法:采用免疫组化SP法检测20例正常大肠黏膜、20例非腺瘤性息肉、36例大肠腺瘤和42例大肠癌组织中的SFRP2和β-catenin蛋白的表达情况,分析二者表达的差异及其与临床病理参数的关系.结果:大肠癌和大肠腺瘤组SFRP2的阳性表达率显著低于正常大肠黏膜和非腺瘤性息肉组(28.57%vs100.0%,95.0%;36.11%vs100.0%,95.0%,均P<0.05);大肠癌中β-catenin膜表达缺失率显著高于正常大肠黏膜、非腺瘤性息肉及大肠腺瘤组(52.4%vs0%,0%,11.1%,均P<0.05);大肠癌和大肠腺瘤组β-catenin异位表达率显著高于正常大肠黏膜和非腺瘤性息肉组(64.3%vs0%,0%;30.6%vs0%,0%,均P<0.05),大肠癌β-catenin异位表达率高于大肠腺瘤(P<0.05);SFRP2表达、β-catenin膜表达缺失及异位表达与大肠癌患者的肿瘤部位、大体形态、肿瘤直径、淋巴转移和Dukes分期无明显关系,而与大肠癌的分化程度密切相关,其中SFRP2表达还与大肠癌的浸润深度密切相关;SFRP2表达与β-catenin膜表达缺失、异位表达均呈明显负相关(r=-0.452,P=0.003;r=-0.519,P=0.000),而β-catenin膜表达缺失与异位表达呈明显正相关(r=0.782,P=0.000).结论:SFRP2和β-catenin的表达与大肠癌的发生、发展密切相关,可能是大肠癌发生的早期事件,且SFRP2表达与β-catenin膜表达缺失、异位表达均呈负相关,前者起抑癌作用,后者起促癌作用.