体外扩增CIK细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901

目的：观察CIK细胞增殖情况，了解扩增后的最佳应用时机，并观察体外对SGC-7901的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外条件下经过多种细胞因子的共同刺激诱导成CIK细胞，计数培养不同时间的CIK细胞，用流式细胞术检测CIK细胞的表型特征。用MTT法检测杀伤活性，对比CIK细胞与5-FU对SGC-7901的杀伤作用，并观察了两者联合应用的效果。结果：CIK细胞随体外培养时间的延长，数量及杀伤活性均增加。体外培养20d增殖124倍，CD3^＋、CD56^＋双阳性细胞的比例达66．1％，其后两者数量增长缓慢；体外实验显示CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用，最高杀伤效率为73．13％，其杀伤作用优于5-FU，P〈0．05。二者联合应用杀伤作用降低。结论：CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性；体外培养15～20d时应用较为合适；联合应用时5-FU可降低CIK细胞的杀伤效率。

β-榄香烯对人胃癌细胞SGC7901的抑制作用及部分机制

目的研究β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901的增殖、凋亡、迁移及赖氨酰氧化酶（LOX）的影响。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTS法及流式细胞术检测不同浓度β-榄香烯对SGC7901细胞增殖与凋亡的影响,划痕实验、Transwell小室迁移实验检测β-榄香烯对细胞迁移的影响,酶标仪法检测β-榄香烯对LOX酶活性的影响,Western blot法检测LOX蛋白表达的变化。结果β-榄香烯（50~800μmol/L）对SGC7901细胞的抑制作用呈时间依赖和浓度依赖性。β-榄香烯（100、200、400、800μmol/L）处理SGC7901细胞24 h后,凋亡率分别为8.1%、8.2%、18.7%、41.9%,与对照组（4.9%）比较,凋亡率明显升高（P〈0.05）。划痕实验、Transwell实验结果显示β-榄香烯对SGC7901细胞的迁移有明显抑制作用（P〈0.05）。β-榄香烯浓度依赖性地降低SGC7901细胞LOX酶活性（P〈0.05）。Western blot结果显示β-榄香烯可下调SGC7901细胞LOX的蛋白表达。结论β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901有明显抑制增殖、迁移及促进凋亡作用,抑制LOX酶活性和蛋白表达可能是其发挥作用的机制之一。

ER-α36对胃癌SGC7901细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:观察ER-α36分子对人胃癌细胞SGC7901在裸鼠体内生长的影响.方法:利用慢病毒转染技术构建稳定高表达和低表达ERα-36分子的重组人胃癌SGC7901细胞株.实验分为空白对照组(SGC7901-Control)、ER-α36低表达组(SGC7901-Low36)和ER-α36高表达组(SGC7901-High36),每组各3只雄性裸鼠.将上述细胞(5×106个/mL)接种裸鼠皮下,建立裸鼠荷瘤模型,连续观测30d.采用瘤结节体积测量和称质量、瘤组织HE染色及免疫组织化学法检测Ki67指数和E-cadherin蛋白表达等方法,鉴定各组细胞生长的情况.结果:全组实验动物均出现移植瘤.第16天开始,SGC7901-High36组裸鼠肿瘤的体积>SGC7901-Control组裸鼠肿瘤的体积>SGC7901-Low36组裸鼠肿瘤的体积,两两之间有显著性差异(P<0.05).第30天,SGC7901-High36组肿瘤的质量(2.58g±0.014g),明显大于SGC7901-Control组(1.32g±0.0245g)和SGC7901-Low36组(0.471g±0.021g),两两之间有显著性差异(P<0.05).SGC7901-High36组肿瘤细胞的核分裂数(42.33±6.33),明显高于SGC7901-Control组(28.5±0.35)和SGC7901-Low36组(12.5±2.5),两两之间有显著性差异(P<0.05).ki67阳性细胞计数,SGC7901-High36组(86.35±5.23),明显高于SGC7901-Control组(65.44±4.56)和SGC7901-Low36组(18.25±2.56),两两之间有显著性差异(P<0.05).SGC7901-High36组肿瘤细胞几乎不表达E-cadherin蛋白,明显低于SGC7901-Control组和SGC7901-Low36组.结论:ER-α36分子在胃癌细胞的生长与增殖中具有重要作用,并可能通过靶向肿瘤细胞的粘附分子而促进肿瘤的侵袭与转移.

幽门螺杆菌依赖丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导SGC7901细胞表达分泌白细胞介素-8

背景:已知前炎症细胞因子白细胞介素(IL)鄄8在慢性活动性胃炎、消化性溃疡等幽门螺杆菌(H.pylori)感染相关疾病的发生、发展中起重要作用,但H.pylori诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8的分子机制尚不明确。目的:通过体外实验了解H.pylori对人胃癌细胞株SGC7901表达、分泌IL鄄8的影响,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在H.pylori诱导SGC7901细胞IL鄄8mRNA表达和IL鄄8蛋白分泌中的作用。方法:SGC7901细胞经p38MAPK特异性抑制剂SB203580预作用2h,再加入H.pylori标准菌株CCUG17874共培养。采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测IL鄄8mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL鄄8蛋白的分泌,观察SB203580对H.pylori诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8的影响。结果:H.pylori能诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8。SB203580能以剂量依赖的方式抑制H.pylori诱导的SGC7901细胞IL鄄8蛋白分泌,经终浓度为0.3、1、3和10μmol/L的SB203580预作用2h,SGC7901细胞的IL鄄8蛋白分泌与未经SB203580预作用组相比分别减少了26%、51%、64%和73%(P<0.05);SB203580也能使H.pylori诱导的IL鄄8mRNA表达显著减弱。结论:H.pylori能诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8,该作用在一定程度上依赖于MAPK信号通路。

IL-8与胃癌细胞SGC7901 MMP-2和MMP-9表达的关系

目的探讨趋化因子白介素-8(IL-8)与胃癌细胞SGC7901细胞胶原酶MMP-2和MMP-9表达的关系。方法体外细胞培养,MTT法及免疫组化方法检测细胞增殖率及MMP-2,MMP-9蛋白表达。结果IL-8处理组SGC7901细胞MMP-2表达较对照组(无IL-8)比较,具有显著增强(P<0.05),而MMP-9无明显差异。结论IL-8能促进细胞SGC7901 MMP-2表达,而对MMP-9无明显影响。

蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞SGC-7901增殖作用的实验研究

目的测定蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法通过MTr法和台盼兰法，观察蝙蝠葛酚性碱在不同浓度，不同时间条件下，对胃癌细胞SGC-7901增殖作用的影响。结果蝙蝠葛酚性碱能明显抑制SGC-7901细胞的增殖，并呈剂量和时间依赖关系，随浓度增大和作用时间延长其抑制率呈上升趋势。结论蝙蝠葛酚性碱对胃癌可能具有一定治疗作用。

巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC-7901表型逆转作用研究

目的:研究巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC-7901表型逆转作用。方法:测定人胃癌细胞SGC-7901药物处理前后胃蛋白酶原(PG)和β-葡萄糖醛酸酶(β-G)活力,数据采用Scheffe's测试法分析。结果:巴豆生物碱处理能有效逆转人胃癌细胞SGC-7901中胃蛋白酶原活性,且能部分抑制人胃癌细胞SGC-7901中肿瘤标志酶β-葡萄糖醛酸酶的表达。结论:巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC-7901表型有逆转作用。在对胃蛋白酶原活性的逆转作用和对β-葡萄糖醛酸酶的表达的抑制作用较维甲酸好。

miR-153-3p通过靶向FZD3调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭与迁移

目的:探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法:收集2018年5月至2020年6月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上皮细胞GES-1,qPCR法检测miR-153-3p在胃癌组织与细胞中的表达水平。将miR-153-3p mimic及mimic对照序列转染至SGC7901细胞,用CCK-8、克隆形成、流式细胞术、TUNEL、Transwell和划痕愈合实验分别检测上调miR-153-3p对SGC7901细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。构建裸鼠SGC7901细胞移植瘤模型,观察miR-153-3p对肿瘤生长的影响。通过生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-153-3p与FZD3靶向关系,WB法检测miR-153-3p对FZD3蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达的影响。结果:miR-153-3p在胃癌组织和细胞中表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞(均P<0.01),以SGC7901细胞中表达水平最低。上调miR-153-3p显著抑制SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并提高细胞凋亡率(均P<0.01),同时上调细胞中E-cadherin表达而下调N-cadherin、MMP2和MMP9表达(均P<0.01)。在体内实验表明,静脉注射miR-153-3p mimic显著降低移植瘤体积和瘤组织中Ki-67表达而上调P57表达(均P<0.01)。机制分析表明,miR-153-3p靶向结合FZD3基因的3′UTR区域,上调miR-153-3p会抑制FZD3表达并上调β-catenin、TCF-4和cyclin D1水平(均P<0.01)。结论:miR-153-3p靶向FZD3并通过Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移。

三氧化二砷诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡及对NF-κB表达的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡及对NF-κB表达的影响。方法:流式细胞仪(FCM)检测不同浓度As2O3作用后48 hSGC-7901的凋亡率,凝胶电泳迁移改变分析法(EMSA)及免疫组织化学法检测As2O3处理48 h后NF-κB活性及表达。结果:As2O3可诱导SGC-7901凋亡(P<0.05)并降低NF-kB的活性及表达(P<0.05),有浓度依赖性。结论:As2O3能诱导SGC-7901凋亡,并降低NF-κB活性及表达,这可能是As2O3抗肿瘤的机制之一。

血红素氧合酶-1对人胃癌SGC7901细胞5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的:体外观察血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对人胃癌细胞SGC79015-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法:应用不同浓度锌原卟啉(ZnPP)、氯化血红素(Hemin)单独或联合5-FU作用于人胃癌SGC7901细胞不同时间,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察药物对细胞生长抑制作用;Western blot分析细胞HO-1蛋白表达变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;活性氧(ROS)检测试剂盒分析其凋亡机制。结果:ZnPP和5-FU均可明显抑制人胃癌SGC7901细胞生长,呈剂量依赖性;5-FU联用ZnPP(10μmol/L)与单用药相比,明显提高了细胞生长抑制率和凋亡率(P<0.05),联用Hemin(10μmol/L)则明显降低细胞生长抑制率和凋亡率(P<0.05);人胃癌SGC7901细胞中可见HO-1表达,单用5-FU或Hemin后均能使其表达增强,联用ZnPP可逆转此现象;单用5-FU与对照组比较,细胞内ROS活性明显增高,联用后ZnPP可进一步提高细胞内ROS活性(P<0.05),而联用Hemin明显降低细胞内ROS活性水平(P<0.05)。结论:ZnPP抑制HO-1表达,能够增强人胃癌SGC7901细胞对5-FU化疗敏感性,这一作用可能与增加细胞内ROS活性有关。

联合使用曲格列酮、9-顺维甲酸对胃癌SGC7901细胞细胞周期影响的实验研究

目的探讨曲格列酮(TGZ)、9-顺维甲酸(9-cis-RA)联合用药对胃癌SGC7901细胞细胞周期的影响。方法体外培养SGC7901细胞给予TGZ、9-cis-RA干预,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术和免疫细胞化学方法检测TGZ、9-GS-RA作用后SGC7901细胞生长情况、细胞周期的改变和p21、p27表达情况。结果MTT结果显示,应用TGZ与9-cis-RA作用于SGC7901细胞72 h,50μmol/L TGZ组、20μmol/L 9-cis-RA组及10μmol/L9-cis-RA+25μmol/L TGZ组细胞的生长受到抑制(P<0.05)。金正均法检测显示两药对SGC7901细胞的抑制有协同作用。免疫细胞化学方法显示50μmol/L TGZ组、20μmol/L 9-cis-RA组及10μmol/L9-cis-RA+25μmol/L TGZ组与阴性对照及低浓度组相比,p21、p27阳性表达率增加(P<0.05)。流式细胞术显示50μmol/L TGZ组、20μmol/L 9-cis-RA组及10μmol/L 9-cis-RA+25μmol/L TGZ组处于G0/G1期细胞增多(P<0.05)。结论TGZ与9-cis-RA可通过诱导肿瘤细胞周期阻滞而发挥抑制胃癌SGC7901细胞增殖的作用,诱导周期阻滞的作用与药物作用后p21、p27表达上调有关。

基质细胞衍生因子-1基因转染对人胃癌细胞株SGC7901增殖、耐药的影响及其机制

目的观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)基因转染对人胃癌细胞株SGC7901增殖、耐药的影响,并探讨其可能作用机制。方法 取对数生长期 SGC7901 细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组、阴性对照组分别转染pcDNA3.1-SDF-1质粒、pcDNA3.1质粒(空白质粒),空白对照组不做任何处理。质粒转染48 h时分别采用RT-PCR法、Western bloting法检测细胞SDF-1 mRNA及蛋白,质粒转染24、48、72、96 h时MTT法测算三组细胞增殖能力(以光密度OD值表示),质粒转染48 h时观察三组细胞对奥沙利铂的耐药性(以奥沙利铂对细胞的半数抑制浓度IC 50 表示),质粒转染48 h时流式细胞仪测算三组细胞凋亡率,质粒转染48 h时Western blotting法检测三组细胞上皮型钙黏蛋白( E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)自噬相关因子(Beclin 1)。结果 与空白对照组、阴性对照组比较,培养48 h时实验组细胞SDF-1 mRNA及蛋白相对表达量均升高( P 均<0.05)。与空白对照组、阴性对照组比较,培养24、48、72、96 h实验组细胞OD值均升高( P 均<0.05)。质粒转染48 h时奥沙利铂对实验组、空白对照组、阴性对照组细胞的IC 50 值分别为 28.039 ±3.011、10.403±1.253、10.612±1.044(μg/mL),与空白对照组、阴性对照组比较,奥沙利铂对实验组细胞的IC 50 值升高( P 均<0.05)。质粒转染48 h时实验组、空白对照组、阴性对照组细胞凋亡率分别为39.10%± 2.26%、53.90%±3.19%、51.30%±3.37%,与空白对照组、阴性对照组比较,实验组细胞凋亡率降低( P 均< 0.05 )。质粒转染48 h时倒置显微镜下可见实验组细胞存在上皮-间质转化(EMT)现象,加入奥沙利铂后实验组细胞自噬活动增加;与空白对照组、阴性对照组比较,实验组细胞E-cadhein蛋白相对表达量降低,N-cadhein、Vimentin、LC3-Ⅱ、Beclin 1蛋白相对表达量均升高( P 均<0.05)。结论 SDF-1基因过表达可促进SGC7901细胞增殖,显著提高SGC7901细胞对奥沙利铂的耐药性,可能与SDF-1促进EMT、诱导细胞自噬增加进而抑制细胞凋亡有关。

RNAi沉默SDF-1基因对新诱导建立的人胃癌耐药细胞系SGC7901/L-OHP的影响

目的诱导构建人胃癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞系SGC7901/L-OHP,探讨RNAi沉默基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)表达对SGC7901/L-OHP增殖、凋亡、耐药的影响。方法L-OHP高浓度间歇冲击法诱导构建耐药细胞系SGC7901/L-OHP,观察其生物学行为变化,RT-PCR及Western blot法检测SDF-1 mRNA和蛋白表达情况;RNAi沉默SGC7901/L-OHP细胞SDF-1基因,从mRNA和蛋白水平验证沉默效果,MTT法及流式细胞术检测SGC7901/L-OHP细胞增殖、凋亡及细胞周期变化。结果成功建立耐药细胞系SGC7901/L-OHP,L-OHP对其增殖抑制率明显低于SGC7901细胞,其G 0/G 1期细胞增多、S期细胞减少,且SDF-1 mRNA和蛋白表达量明显高于SGC7901细胞(P均<0.05)。成功沉默SDF-1基因表达后,与空白及阴性对照组比较,SDF-1-RNAi组细胞增殖抑制率明显升高,对L-OHP药物敏感度明显升高,且其细胞凋亡也明显升高,G 0/G 1期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P均<0.05)。结论本实验成功建立人胃癌L-OHP耐药细胞系SGC7901/L-OHP,并发现SDF-1参与胃癌细胞SGC7901对L-OHP获得性耐药过程;RNAi沉默SDF-1基因表达后抑制SGC7901/L-OHP细胞增殖、促进凋亡并部分逆转其对L-OHP的耐药性。

DAB2IP过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对E-cad-herin、Snail、Twist表达的影响

目的:研究失活蛋白-2相互作用蛋白基因(DAB2IP)过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对上皮间质转化(EMT)相关上皮细胞-钙黏蛋白基因(E-cadherin)、Snail、Twist蛋白表达的影响。方法:采用慢病毒介导DAB2IP过表达转染并筛选稳定人胃癌细胞SGC7901细胞株(过表达组),另设慢病组对照液转染的人胃癌细胞SGC7901作为慢病毒对照组,无转染人胃癌细胞SGC7901为空白对照组,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组人胃癌细胞SGC7901 DAB2IP基因表达水平,采用噻唑蓝法(MTT)及平板克隆形成试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901增殖的影响采用细胞划痕试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901迁移的影响,采用免疫印迹(Western Blot,WB)法检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901中EMT相关蛋白表达水平。结果:同一时间及不同时间,空白对照组和慢病毒对照组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,24,48,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05)。与24 h比较,48和72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增值抑制率显著升高(P<0.05),与48 h比较,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。提示48 h过表达效果最佳,可用于下游试验。空白对照组和慢病毒对照组平板克隆形成率、细胞迁移距离、E-cadherin、Snail、Twist蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,过表达组人胃癌细胞SGC7901平板克隆形成率、细胞迁移距离、Snail、Twist蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著增加(P<0.05)。结论:DAB2IP过表达可抑制人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移,可能与上调E-cadherin蛋白表达,下调Snail、Twist蛋白表达有关。

大黄素对低氧环境下SGC7901细胞HIF-1α和E-cadherin的影响

目的:探讨大黄素对低氧环境下胃癌SGC7901细胞增殖及缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法:低氧环境培养胃癌SGC7901细胞,应用不同浓度的大黄素干预12,24,36,48 h,设实验组(10,20,40,80,160μmol/L)和对照组(含DMSO的培养基)。MTT实验检测细胞增殖情况;倒置显微镜下动态观察细胞数量及形态变化;免疫组织化学方法检测癌细胞中HIF-1α和E-cadherin的表达。结果:低氧环境下,大黄素可明显抑制胃癌细胞SGC7901的增殖,且呈现浓度和时间依赖性(P﹤0. 05);细胞数目不断减少;细胞形态由原多边形逐渐变成小圆形;细胞与细胞之间的距离增大,连接消失,但细胞表面的突起逐渐变得粗大、延长;免疫组化结果显示HIF-1α的表达随大黄素浓度增加而降低,而E-cadherin的表达则呈上升趋势,两者呈负相关(r=-0. 646,P=0. 023 <0. 05)。结论:低氧环境下,大黄素可通过抑制HIF-1α的表达、促进E-cadherin的表达来阻止肿瘤细胞增殖。

熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901增殖和诱导细胞凋亡的机制

背景与目的:研究表明熊果酸(ursolicacid,UA)可抑制多种肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡,但目前有关UA作用于胃癌细胞的报道较为少见。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在多种癌前病变及癌组织中高表达。本研究旨在探讨熊果酸抑制人胃癌细胞SGC7901增殖和诱导凋亡的机制。方法:MTT法检测0、10、20、30、40!mol/LUA作用不同时间对SGC7901细胞增殖的影响;荧光染料Hoechst33258染色观察不同浓度UA作用24h细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡率;Westernblot法检测COX-2蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达。放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)。结果:20～40!mol/LUA可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,作用12、24、36、48h的半数抑制浓度(IC50)分别为(57.50±1.18)!mol/L、(34.28±2.05)!mol/L、(27.54±1.11)!mol/L、(24.83±1.02)!mol/L;20～40!mol/LUA作用24h后,SGC7901细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(9.10±2.39)%、(26.30±1.25)%、(35.20±2.26)%;同时COX-2蛋白表达及其催化生成产物PGE2浓度下降,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化。结论:熊果酸对SGC7901细胞具有增殖抑制及诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞周期、抑制COX-2表达进而减少PGE2生成以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达有关。

黄芩素对人胃癌SGC7901细胞迁移及侵袭的影响及其作用机制

目的观察黄芩素对人胃癌SGC7901细胞迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法以人胃癌SGC7901细胞为研究对象,分别加入20mL的培养液(对照组)或20mL(50、100、150mol/L)黄芩素溶液处理细胞48h,细胞划痕试验检测不同剂量黄芩素对人胃癌SGC7901细胞迁移的影响,Transwell侵袭实验检测黄芩素对细胞侵袭能力的改变;比色法检测细胞胰蛋白酶活性,用Western blot方法检测活化的蛋白酶激活受体-2(protease-activated receptor-2,PAR-2)蛋白表达水平,RT-PCR法检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)mRNA及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)mRNA水平。结果与对照组比较,各治疗组人胃癌SGC7901细胞迁移及侵袭的能力、胰蛋白酶活性、活化的PAR-2、MMP-2 mRNA及MMP-9 mRNA表达水平均显著下降(P<0.05),呈剂量依赖性。活化的PAR-2与MMP-2mRNA及MMP-9 mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.564,P<0.05;r=0.581,P<0.05)。结论 PAR-2活性、MMP-2及MMP-9mRNA表达与胃癌的发生、发展密切相关,活化的PAR-2可通过上调MMP-2及MMP-9 mRNA的表达而参与癌细胞迁移及侵袭,黄芩素能显著抑制人胃癌SGC7901细胞的PAR-2活性和MMP-2及MMP-9mRNA表达,从而降低癌细胞迁移及侵袭能力,这与其抑制胰蛋白酶活性有密切关系。

AZT对SGC7901胃癌细胞凋亡及Bax蛋白和PCNA表达的影响

目的:研究端粒酶抑制剂3′-叠氮3′-脱氧胸腺核苷(AZT)对SGC 7901胃癌细胞凋亡及Bax蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法:将处于对数生长期的SGC 7901胃癌细胞分为对照组及1.0 mmol.L-1AZT处理组,应用AZT 6 d后,采用MG-P-MY组合染色法检测SGC 7901胃癌细胞凋亡率,采用免疫组织化学EnVision法检测SGC 7901胃癌细胞Bax蛋白及PCNA的表达。结果:AZT组及对照组SGC 7901胃癌细胞凋亡率分别为(16.421±0.713)%和(3.366±0.271)%,AZT处理组SGC 7901胃癌细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);对照组Bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率分别为(16.851±10.064)%和(63.332±22.767)%,AZT处理组Bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率为(47.389±18.042)%和(23.446±13.055)%,与对照组比较,AZT处理组Bax蛋白表达率明显增加(P<0.05),PCNA表达率明显降低(P<0.05)。结论:AZT能促进SGC 7901胃癌细胞Bax蛋白的表达,抑制PCNA表达,增加SGC 7901胃癌细胞凋亡。

ppGalNAcT2反义RNA对胃癌细胞SGC7901生物学特性的影响

目的:研究人胃癌细胞SGC7901中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)基因表达与肿瘤转移相关基因MMP2,TGF-β1表达的相关性,以及对细胞增殖和形态生物学特性的影响。方法:用两个已构建好的反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆。通过共聚焦显微镜,RT-PCR检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后,胃癌细胞SGC7901中TGF-β1,MMP2表达水平,细胞增殖以及形态的变化。结果:反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞的形态发生改变,分裂增殖减慢。结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1,MMP2基因在mRNA表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响。结论:pp-GalNAc-T2可能在肿瘤的增殖、浸润和转移中发挥作用。

去甲基化干预胃癌SGC7901细胞前后食管癌相关基因4基因的表达变化

目的:研究SGC7901细胞与GES-1细胞中食管癌相关基因4(ECRG4)蛋白表达差异及5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预前后SGC7901细胞中ECRG4基因表达变化情况。方法:Westernblot检测SGC7901细胞、GES-1细胞中ECRG4编码蛋白的表达,以不同浓度(0、5、10μmol/L)5-Aza-CdR干预SGC7901,48h后再以Westernblot检测ECRG4编码蛋白的表达情况。结果:SGC7901细胞中ECRG4蛋白表达较低而GES-1细胞中表达较高,差异有统计学意义(P<0.001)。以5-Aza-CdR干预SGC7901细胞48h,随着药物浓度增加,ECRG4蛋白表达逐渐上调,10μmol/L处理组比5μmol/L组更明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SGC7901细胞中ECRG4蛋白的表达量明显低于GES-1细胞;以5-Aza-CdR处理SGC7901细胞48h后ECRG4蛋白表达有上调,且10μmol/L组比5μmol/L组其恢复表达作用更明显。