酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用及潜在机制。方法 通过盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导脓毒症动物模型。通过酸枣仁皂苷A治疗实验动物,苏木精和伊红染色分析组织病理学变化。相应试剂盒分析肾损伤指标(血清BUN、SCr和NGAL水平)和血清炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的水平。生信分析miR-223-3p在脓毒症患者中的表达及其与炎症反应因子的相关性,预测miR-223-3p与SGK1的结合位点。双荧光素酶实验验证miR-223-3p与SGK1的结合关系。构建脂多糖(LPS)诱导的HK2细胞的体外模型。荧光实时定量PCR(qPCR)检测miR-223-3p在患者血清或LPS处理的HK-2细胞中的表达。脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹检测中BCL2相关的X(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和裂解的半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清或细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的水平。qPCR和蛋白质免疫印迹法检测不同处理组HK-2细胞中SGK1的表达,蛋白质免疫印迹检测不同处理组HK-2细胞中NLRP3的表达。结果 酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠急性肾小管坏死评分,减轻肾损伤。血清血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平降低,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平亦下降。酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠肾脏组织中miR-223-3p的表达水平。生信分析和临床样本分析显示,miR-223-3p在脓毒症患者中高表达。细胞实验结果显示,miR-223-3p在LPS处理的HK-2细胞中呈高表达。miR-223-3p促进LPS诱导的HK-2细胞凋亡和炎症反应,这种促进作用是由miR-223-3p通过负调控SGK1/NLRP3介导的。结论 酸枣仁皂苷A可能通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中发挥保护作用,可能为脓毒症治疗提供新的治疗靶点。

星状神经节离断对脊髓损伤大鼠中枢性疼痛行为及CREB SGK1 NF-κB蛋白表达的影响

目的探究星状神经节离断对脊髓损伤(SCI)大鼠中枢性疼痛行为及环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将SD大鼠按随机分配原则分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、治疗组(Treat组)各6例。Model组、Treat组构建SCI模型,Sham组未使用铁球砸脊髓,其他步骤相同。Treat组在脊髓损伤后予星状神经节离断,通过BBB运动功能评分评价运动功能学,通过机械痛阈试验和热痛阈试验测量机械缩足反射阈值(PWT)和热缩足潜伏期(PWL),ELISA法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)水平,HE染色检测脊髓组织病理变化,TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot检测CREB、SGK1、NF-κB p65蛋白表达。结果Sham组大鼠脊髓组织结构完好,细胞呈正常形态,神经纤维分布均匀且行走规则。与Sham组相比,Model组脊髓组织及细胞完整性破坏严重,形成大量空洞,神经纤维排列紊乱,可见大量炎性细胞浸润,BBB运动功能评分、PWT、PWL值显著下降(P<0.05),IL-1β、TNF-α、PGE2水平、细胞凋亡数量、CREB、SGK1、NF-κB p65蛋白水平显著升高(P<0.05)。与Model组相比,Treat组脊髓组织结构形态明显改善,脊髓组织空洞化有所好转,炎性细胞浸润减少,神经纤维排列趋于正常,BBB运动功能评分、PWT、PWL值显著增加(P<0.05),IL-1β、TNF-α、PGE2水平、细胞凋亡数量、CREB、SGK1、NF-κB p65蛋白水平显著减少(P<0.05)。结论星状神经节离断可减轻SCI大鼠中枢性疼痛行为,降低CREB、SGK1、NF-κB蛋白水平。

慢性心力衰竭患者血清SGK1水平的变化

目的:探索慢性心力衰竭患者血清中SGK1水平的变化,分析其与心衰的关系。方法:收集103例慢性心衰患者作为慢性心力衰竭组(Chronic heart failure group, HF组),103例同期健康体检者作为非慢性心力衰竭组(Non-Chronic heart failure group, non-HF组),采用ELISA方法测定两组样本血清SGK1水平,同时收集相关临床资料进行统计学分析。结果:与non-HF组相比,HF组血清SGK1浓度显著升高,差异有统计学意义(P < 0.001)。采用Spearman相关分析发现血清SGK1水平与NT-ProBNP呈正相关(P < 0.05),与LVEF呈负相关(P < 0.05)。二分类Logistic回归分析发现SGK1 (OR = 12.012, 95% CI 1.726~83.592)是慢性心力衰竭的独立危险因素。联合SGK1和NT-proBNP两指标绘制ROC曲线,可提高CHF诊断的特异性及敏感度。结论:CHF患者血清SGK1水平明显升高。血清SGK1水平是CHF的独立危险因素,联合检测SGK1及NT-proBNP水平能提高CHF诊断的准确性。

川崎病患者CD4^+T细胞中血清和糖皮质激素诱导的激酶1(SGK1)表达上调且与RORC及IL-17A正相关

目的检测血清和糖皮质激素诱导的激酶1(SGK1)在川崎病(KD)患者CD4^+T细胞中的表达,探讨SGK1与维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)及白细胞介素17A的相关性。方法收集KD患者30例,正常同年龄对照30例,同年龄感染性疾病(ID)患者25例。利用流式细胞术检测Th17细胞占CD4^+T细胞的比例;实时定量PCR检测CD4^+T细胞中SGK1和RORC mRNA的表达;ELISA检测血清IL-17A和IL-6水平。结果与健康儿童和ID患者相比,KD患者中Th17细胞比例明显升高。与ID患者和健康儿童相比,KD患者血清中IL-17A和IL-6水平明显升高,SGK1和RORC mRNA水平升高。SGK1在KD冠状动脉损害(CAL)组的表达高于冠状动脉正常(CAN)组。静脉内注射免疫球蛋白(IVIG)治疗后,SGK1的表达明显下降;其中,CAL组下降高于CAN组。KD患者中,SGK1 mRNA的表达与RORC及血清IL-17A水平呈正相关,而与血清IL-6水平不相关。结论 KD患者CD4^+T细胞中SGK1 mRNA表达升高,与RORC和IL-17A正相关。

胰岛素通过激活SGK1对LPS诱导的急性肺损伤状态下钠离子通道的调节作用

目的探讨胰岛素通过SGK1对LPS诱导的急性肺损伤状态下的钠离子通道的调节作用。方法 30只雄性Wistar大鼠随机平均分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+Insulin组)和模型组(LPS组)每组10只。记录5个时间点(0、0.5、1、3、6h)大鼠的血糖水平,并使用胰岛素使LPS+Insulin组大鼠血糖控制在1.5到4.5mmol/L。通过HE染色观察肺组织病理学改变;使用湿/干比(W/D)分析肺水肿程度;使用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学对α-ENaC的表达进行测量;SGK1和磷酸-SGK1(phospho-SGK1)蛋白表达使用Western blot进行定量分析。结果大鼠注射LPS后血糖明显上升并于3h达到最大值。LPS干预6h后大鼠肺损伤评分和W/D比值明显增加,α-ENaC表达量和磷酸化-SGK1水平明显下降,差异有显著统计学意义。同时发现,LPS+Insulin组大鼠肺损伤评分和W/D比值较LPS组大鼠稍低,而α-ENaC表达量和磷酸化-SGK1水平较之升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胰岛素可以有效减轻LPS诱导的大鼠ARDS导致的肺水肿,其机制可能与促进SGK1的活化后上调了ENaC的表达相关。该结果为应用胰岛素治疗肺水肿奠定了理论基础。

ERRα通过AKT/SGK1通路抑制盐敏感性高血压大鼠的盐敏感性

目的探讨雌激素相关受体α(ERRα)对盐敏感性高血压大鼠盐敏感性的影响及分子机制。方法 6周龄雄性ERRα过表达及其对照Dahl盐敏感性大鼠分为四组,分别为正常盐对照组、正常盐ERRα过表达组、高盐对照组和高盐ERRα过表达组。正常盐对照组和正常盐ERRα过表达组大鼠每天给予正常盐(含氯化钠0. 5%)饲料喂养,高盐对照组和高盐ERRα过表达组大鼠每天给予高盐(含氯化钠8%)饲料喂养,大鼠被喂养3周,然后检测大鼠血压以及血液SOD和MDA水平;通过实时荧光定量PCR和Western blot检测盐敏感性高血压大鼠胸主动脉ERRα的m RNA表达以及AKT和SGK1磷酸化水平。结果荧光定量PCR结果显示,与正常盐对照组相比,高盐对照组大鼠中ERRα相对表达量显著降低(P <0. 01)。与高盐对照组比较,高盐ERRα过表达组大鼠血压显著降低,血液SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(均P <0. 01)。Western blot结果显示,高盐ERRα过表达组大鼠p-AKT和p-SGK1蛋白表达显著高于高盐对照组,差异具有统计学意义(均P <0. 01)。结论 ERRα通过AKT/SGK1通路抑制盐敏感性高血压大鼠氧化应激,降低大鼠盐敏感性。

MAL2调控SGK1通路活性促进肺癌细胞的增殖和转移

目的探讨MAL2(myelin and lymphocyte protein 2)在肺癌中的功能及作用机制。方法分析TCGA数据中MAL2在肺癌组织中的表达情况,在H1299和A549细胞中用克隆形成实验检测MAL2基因敲减后对肺癌细胞增殖的影响,探讨MAL2在肺腺癌细胞增殖中的作用,并用CCK8等细胞增殖、转移、凋亡实验进一步验证其功能;将MAL2干扰后,采用Western blot实验检测下游通路基因表达情况以分析MAL2基因可能的作用机制。结果MAL2基因在肺癌组织与癌旁组织相比表达显著升高(P<0.05),且MAL2敲减后抑制细胞增殖和转移、促进细胞凋亡(P<0.05);MAL2可能通过调控SGK1通路发挥作用。结论MAL2基因在肺癌的恶性进展中起重要的作用,该作用通过调控SGK1机制进行,MAL2基因是肺癌的一个新的潜在的分子诊断指标及治疗靶点。

瑞舒伐他汀通过激活SGK1上调ALI小鼠ENaC表达的实验研究

目的探讨在急性肺损伤(ALI)状态下瑞舒伐他汀对肺组织钠离子通道(ENaC)的调节作用和相关机制。方法将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即空白对照组(Control组)、干预组(LPS+ROS组)和模型组(LPS组),每组10只。在给予大肠埃稀杆菌内毒素(LPS)干预72小时后,采用HE染色对小鼠肺组织病理改变进行观察和肺组织损伤评分;使用湿干比(W/D比值)对肺水肿严重程度进行分析;使用RT-PCR和western blot对肺组织ENaC的α亚基(α-ENaC)mRNA和蛋白的表达进行分析;同时使用western blot对SGK1的活化水平(phospho-SGK1/total SGK1)进行观察。结果在给予雄性C57BL/6小鼠LPS干预72小时后,肺组织出现显著的病理学改变,肺损伤评分明显增加,肺水肿指标W/D比值显著升高,α-ENaC mRNA和蛋白的表达水平明显降低,SGK1的活化水平亦明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。同时LPS+ROS组小鼠肺组织病理改变、肺损伤评分和W/D比值较LPS组小鼠明显减轻,而α-ENaC mRNA和蛋白的表达及SGK1的活化水平较LPS组小鼠明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论实验表明,在LPS诱导的小鼠ALI状态下,瑞舒伐他汀可以通过增加肺组织ENaC的表达有效地减轻肺水肿严重程度,并发现该机制与促进SGK1的活化密切相关。这为他汀类药物应用于急性呼吸窘迫综合症(ARDS)的临床治疗奠定了基础。

人SGK1超表达载体的构建及鉴定

目的:构建人血清及糖皮质激素诱导型蛋白激酶(SGK1)超表达载体质粒,为SGK1的体外研究提供有效的工具。方法:细胞中RNA经反转录合成cDNA,PCR扩增获取人全长SGK及构建于哺乳动物的表达载体。基因激活型(SD)及灭活型(KN)人SGK1经点突变获取。克隆基因的正确性通过酶切鉴定及DNA测序证实。用磷酸钙沉淀法转染人胚肾293(HEK293)细胞,测定其转染率。结果:构建的人SGK1质粒能在人胚肾细胞中超表达。结论:人SGK1超表达载体的成功构建为糖尿病肾病发病机制的研究提供了新的工具。

芪珀生脉颗粒通过调节PI3K/SGK1信号通路改善心房颤动大鼠心房肌纤维化

目的验证芪珀生脉颗粒通过调节PI3K/SGK1信号通路改善心房颤动(简称“房颤”)大鼠心房肌纤维化的机制。方法采用尾静脉注射乙酰胆碱-氯化钙(Ach-CaCl2)建立房颤大鼠模型,随机分为正常对照组、模型组、维拉帕米组、芪珀生脉大剂量组、芪珀生脉中剂量组、芪珀生脉小剂量组,共6组。用药干预4周后,比较各组大鼠房颤持续时间、心房肌组织病理改变,运用Western Blot法检测PI3K/SGK1信号通路蛋白的表达水平。结果与模型组相比,芪珀生脉颗粒各剂量组大鼠房颤持续时间显著缩短,大鼠心房肌PI3K、CTGF蛋白表达明显下调,SGK1蛋白的磷酸化明显减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芪珀生脉颗粒可有效改善房颤过程中的心房纤维化、缩短房颤持续时间,其机制可能与其调节PI3K/SGK1信号通路,包括下调PI3K、CTGF蛋白的表达,减少SGK1蛋白的磷酸化有关。

高盐饮食对Dahl大鼠肾脏SGK1基因表达的影响

目的通过观察高盐负荷后Dahl盐敏感大鼠肾脏血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因的表达,探索其在盐敏感性高血压形成中的作用。方法对Dahl盐敏感大鼠和对照组SS-13BN大鼠分别给予正常盐[0.3%氯化钠(NaCl)]和高盐(8%NaCl)饮食3周干预,测定血压,采用Real-time PCR检测肾脏SGK1基因信使核糖核酸(mRNA)。结果 SS高盐饮食组大鼠及SS-13BN高盐组大鼠血压均比其低盐饮食组高;与13BN组相比,SS高盐组血压较低盐组升高幅度更为显著;Dahl盐敏感大鼠高盐组肾脏SGK1的表达较低盐组显著增加,同时也显著高于高盐组SS-13BN大鼠。结论高盐引起Dahl盐敏感大鼠肾脏SGK1的表达异常增加可能是盐敏感性高血压形成的重要原因。

PI3K/SGK1信号通路上调小鼠肺上皮钠通道表达的研究

目的:探讨磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/血清-糖皮质激素调节激酶1(SGK1)信号通路对小鼠肺上皮钠通道(ENaC)表达的影响。方法:24只健康成年C3H/HeN小鼠随机分为对照组、急性肺损伤(ALI)组、胰岛素组和PI3K siRNA组,每组6只。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测量肺泡液体清除率(AFC),免疫荧光测定ENaC各亚基。培养原代小鼠肺泡上皮II型细胞,分别转染PI3K siRNA和SGK1 siRNA,RT-PCR法测定ENaC的mRNA表达,Western blot法测定ENaC蛋白表达和SGK1磷酸化水平。结果:与ALI组比较,胰岛素组AFC和ENaC各亚基表达均显著增加(P<0.05)。与胰岛素组比较,PI3K siRNA组AFC和ENaC各亚基表达均显著减少(P<0.05)。与胰岛素干预比较,肺泡上皮细胞分别转染PI3K siRNA和SGK1 siRNA后,ENaC各亚基的mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),SGK1磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论:激活PI3K/SGK1信号通路通过上调小鼠肺ENaC各亚基的表达,增强AFC,从而减轻小鼠ALI。

曲尼司特对糖尿病大鼠肾脏TGF-β_1和SGK1表达的影响

目的探讨曲尼司特对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能的机制。方法雄性SD大鼠60只,随机均分为4组:正常对照组、模型组、低剂量及高剂量曲尼司特治疗组。后3组均一次性给予链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg尾静脉注射建立糖尿病大鼠模型。正常对照组给予等量柠檬酸缓冲液尾静脉注射;模型组不再给药;低、高剂量曲尼司特组于造模后1 w分别给予曲尼司特100 mg·kg-1·d-1和400 mg·kg-1·d-1。造模后8 w处死大鼠,免疫组化检测肾间质组织中的TGF-β1及SGK1表达;Masson染色观察肾间质绿染面积。结果与正常大鼠相比,糖尿病模型大鼠的血糖、尿蛋白定量、肾重/体重、肌酐清除率明显升高(P<0.05);经过曲尼司特处理后,以上指标均有下降,尿蛋白定量、肾重/体重、肌酐清除率下降(P<0.05),且高剂量组与低搅量组相比,尿蛋白定量下降(P<0.05)。Masson染色可见模型组肾间质内大量胶原纤维增生,肾小球局灶性节段性硬化,而曲尼司特组上述改变均有减轻。免疫组化示TGF-β1及SGK1表达趋势一致,正常对照组均低于其他组(P<0.01),曲尼司特组低于模型组,高剂量曲尼斯特组低于低剂量组(P<0.05)。结论曲尼司特能改善糖尿病大鼠的生化指标,下调TGF-β1和SGK1表达,发挥抗纤维化的作用。

白藜芦醇通过激活SGK1上调急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠离子通道的表达

目的探讨白藜芦醇(resveratrol)对急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡上皮钠离子通道(ENaC)的作用及可能机制。方法将小鼠随机分为对照(control)组、LPS组、RES组和PP242组,每组6只。苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理;BCA法测肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测炎性因子水平;流式细胞计量术检测BALF中性粒细胞比例;Western blot检测肺组织α-ENaC蛋白表达和SGK1磷酸化水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测肺组织α-ENaC mRNA转录水平。结果 1)与对照组相比,LPS组肺组织损伤明显,BALF中性粒细胞比例、蛋白含量和炎性因子水平明显升高(P<0.05),肺组织α-ENaC表达和SGK1磷酸化水平显著下调(P<0.05);2)与LPS组相比,RES组肺损伤明显减轻,BALF中性粒细胞比例、蛋白含量和炎性因子水平明显降低(P<0.05),伴α-ENaC表达和SGK1磷酸化水平显著上调(P<0.05);3)与RES组相比,PP242组肺损伤明显加重,BALF中性粒细胞比例、蛋白含量和炎性因子水平明显升高(P<0.05),同时伴α-ENaC表达和SGK1磷酸化水平显著下调(P<0.05)。结论 SGK1介导的α-ENaC上调机制参与了RES对ALI的保护作用。

SGK1对脑缺血再灌注损伤的保护机制

目的寻求SGK1对脑缺血再灌注的保护及预后作用.方法采用大鼠构建动物模型,将其分为A(实验组)、B(对照组)2组,通过使SGK1进行过表达,及使用PI3K抑制剂LY294002对模式动物进行处理,模拟不同条件下脑缺血再灌注对模式动物海马神经元细胞凋亡产生的影响.结果不同时间点凋亡细胞、SKG1相对表达水平、SKG1Mrna相对表达水平、SKG1阳性细胞均有统计学差异(P<0.05),Sham和其它各组均有统计学差异(P<0.05),不同组Capase-3相对表达水平、Bcl相对表达水平、Bax相对表达水平、p-Akt相对磷酸化水平、p-GSK3β相对磷酸化水平均有统计学差异(P<0.05),Sham和其它各组均有统计学差异(P<0.05).结论SGKe1对缺血再灌注组织起保护作用,为今后的临床应用提供可靠地生物学证据.

SGK1在日光性角化病、基底细胞癌及鳞状细胞癌中的表达

目的:检测SGK1在日光性角化病(AK)、基底细胞癌(BCC)及鳞状细胞癌(SCC)中的表达。方法:采用免疫组化SABC法检测SGK1在25例正常皮肤(NS)、25例AK、28例BCC、28例皮肤鳞状细胞癌标本中的表达。结果:NS、AK、BCC和SCC标本中,SGK1阳性细胞率分别为(40.03±14.42)%,(36.63±14.28)%,(52.82±18.73)%和(52.58±20.13)%。BCC组和SCC组分别与NS组比较,差异均有统计学意义(P s<0.05)。各组SGK1染色阳性细胞率>50%的标本分别为6例(24%),3例(12%),16例(57.14%)和14例(50%),BCC组和SCC组分别与NS组比较,差异均有统计学意义(P s<0.05)。结论:SGK1的高表达可能与基底细胞癌及鳞状细胞癌的发病有关。

人参配伍贯叶金丝桃对抑郁症模型大鼠行为学及海马组织GR、SGK1表达的影响

目的筛选人参-贯叶金丝桃发挥抗抑郁功效的最佳配伍比例,并探讨其抗抑郁的可能作用机制。方法采用基线等比增减设计法将80只SD大鼠分为空白组、模型组、阳性药组、人参组、贯叶金丝桃组及人参-贯叶金丝桃不同配比组,共10组,每组8只。除空白组外,其余9组采用慢性不可预知性温和应激法制备抑郁症大鼠模型。采用旷场实验和水迷宫实验检测大鼠行为学变化,ELISA检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)含量,优选人参-贯叶金丝桃最佳配比;Western blot检测最佳配比组大鼠海马组织糖皮质激素受体(GR)、血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠旷场实验水平穿格次数和垂直活动次数明显减少(P<0.01),水迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P<0.01),目标象限停留时间明显缩短(P<0.01),血清IL-6、TNF-α、ACTH、CORT含量明显增加(P<0.01),海马组织GR蛋白表达明显降低(P<0.01),SGK1蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,人参、贯叶金丝桃不同配比能增加大鼠旷场实验水平穿格次数和垂直活动次数,缩短水迷宫实验逃避潜伏期,减少血清IL-6、TNF-α、ACTH、CORT含量,其中以人参-贯叶金丝桃1∶1配比效果最佳(P<0.05,P<0.01),且最佳配比能明显升高大鼠海马组织GR蛋白表达(P<0.01),降低SGK1蛋白表达(P<0.01)。结论人参配伍贯叶金丝桃能改善抑郁症模型大鼠抑郁样行为,且配比为1∶1时作用最显著,其抗抑郁作用可能与调控海马GR/SGK1信号通路相关。

shRNA抑制SGK1基因表达对人乳腺癌细胞系生物学特性的影响

目的建立稳定抑制血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)表达的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,观察SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生物学特性的影响。方法构建针对SGK1的shRNA干扰质粒pGen-3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control。转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经G418筛选得到稳定抑制SGK1表达的乳腺癌细胞模型;实时定量PCR、免疫荧光以及Western blotting检测shRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞体外生长能力;体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组癌细胞的侵袭和转移。结果成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立了稳定抑制SGK1表达的乳腺癌细胞模型;与阴性对照组和未转染组相比,肿瘤细胞中SGK1的表达水平显著降低(P<0.01);SGK1基因沉默后,人乳腺癌细胞的生长能力、浸润和迁移能力均明显降低(P<0.05)。实验中还发现抑制SGK1基因表达之后,β-catenin的含量也出现明显下降。结论抑制SGK1基因的表达可以显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长,并降低其侵袭转移的能力,其中β-catenin参与了SGK1基因的抑制功能。

红景天苷对高同型半胱氨酸诱导的小鼠膀胱胶原沉积及SGK1蛋白表达的影响

目的:观察红景天苷对高同型半胱氨酸诱导的小鼠膀胱沉积胶原的影响。方法:40只清洁级BABLc雄性小鼠适应饲养7 d后,随机分为空白对照组、模型组(1%高蛋氨酸饮水8周)、红景天苷25 mg·kg^(-1)组(0.01%的含红景天苷饮食喂养16周,后给予1%高蛋氨酸饮水8周)和红景天苷50 mg·kg^(-1)组(0.02%的含红景天苷饮食喂养16周,后给予1%高蛋氨酸饮水8周),每组10只。取膀胱组织,Masson染色检测胶原沉积;Western Blot法检测纤维化相关蛋白-血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(Serum and glucocorticoid-induced protein kinase,SGK1)表达和免疫组化染色检测膀胱组织白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)蛋白表达。结果:与模型组相比,红景天苷50 mg·kg^(-1)可显著抑制高蛋氨酸诱导的膀胱组织胶原沉积和纤维化相关蛋白SGK1及膀胱组织炎症因子IL-1β的表达(P<0.05)。结论:红景天苷可减轻高同型半胱氨酸诱导的小鼠膀胱胶原沉积和SGK1蛋白表达,同时抑制膀胱组织IL-1β蛋白表达。

miR-15b-5p靶向SGK1对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响

目的探讨非编码小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)是否通过靶向调控血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)1从而影响高糖诱导小鼠足细胞损伤。方法以小鼠肾脏足细胞(MPC5)为研究对象,建立足细胞损伤模型,分为正常对照(NG,含5 mmol/L的D-葡萄糖)组和高糖刺激(HG,含30 mmol/L的D-葡萄糖)组。实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测足细胞中miR-15b-5p和SGK1 mRNA表达;运用生物学信息预测miR-15b-5p靶基因,双荧光素酶报告基因进一步验证;Western印迹检测过表达miR-524-5p或抑制SGK1表达对HG诱导足细胞损伤及凋亡相关蛋白的影响,流式细胞术检测细胞凋亡。共转染pcDNA-SGK1和miR-15b-5p模拟物,观察过表达SGK1对过表达miR-15b-5p作用于高糖刺激足细胞损伤时的影响。结果与正常对照组相比,miR-15b-5p在高糖诱导的足细胞中表达下调(P<0.05),SGK1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。SGK1是miR-15b-5p的靶基因。miR-15b-5p过表达降低HG刺激的MPC5细胞凋亡率,促进B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、synaptopodin蛋白表达,抑制Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3和结蛋白(desmin)蛋白表达,差异均达到显著水平(P<0.05),与抑制SGK1表达作用结果相同。SGK1过表达可以逆转miR-15b-5p过表达对高糖刺激足细胞凋亡的抑制作用及对细胞损伤的保护作用。结论miR-15b-5p通过靶向调控SGK1保护高糖刺激的足细胞损伤,抑制细胞凋亡。