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东方蜜蜂微孢子虫nce-miR-11248及其靶基因SGT1的生物信息学和表达谱研究 被引量:1
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作者 张凯遥 赵浩东 +7 位作者 张艺琼 赵萧 高旭泽 邹培缘 张奎昊 陈大福 郭睿 牛庆生 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第2期32-39,共8页
【目的】对前期鉴定所获得的东方蜜蜂微孢子虫的nce-miR-11248进行表达和序列验证,预测、分析其靶基因,并检测nce-miR-11248及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达谱,为进一步开展nce-miR-11248调控东方蜜蜂微孢... 【目的】对前期鉴定所获得的东方蜜蜂微孢子虫的nce-miR-11248进行表达和序列验证,预测、分析其靶基因,并检测nce-miR-11248及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达谱,为进一步开展nce-miR-11248调控东方蜜蜂微孢子虫侵染的功能及作用机制研究提供参考。【方法】利用Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证nce-miR-11248的真实性;利用相关生物信息学软件预测nce-miR-11248的靶基因,并分析其编码蛋白的分子特性;使用MEME和TBtools软件预测SGT1蛋白的保守基序和结构域,通过Mega 11.0软件进行氨基酸序列多重比对,采用邻接法构建系统进化树。采集东方蜜蜂微孢子虫孢子侵染1,2,4,6和8 d的意蜂工蜂中肠组织,采用RT-qPCR检测nce-miR-11248及其靶基因SGT1的表达谱。【结果】nce-miR-11248在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在,其序列长度为25 bp。nce-miR-11248的靶基因为SGT1。SGT1蛋白分子式为C_(765)H_(1213)N_(195)O_(241)S_(4),分子质量约为17.10 ku,脂溶系数为82.67,等电点为5.50,亲水系数为-0.709,不含典型的信号肽和跨膜结构域,可同时定位于细胞核、线粒体和过氧化物酶体。东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、泛胞虫、肠脑炎微孢子虫和蚱蜢脑炎微孢子虫的SGT1中均含有4个保守基序(Motif 1、Motif 2、Motif 3和Motif 4)和1个结构域(SGT1超家族结构域)。东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、肠脑炎微孢子虫和蚱蜢脑炎微孢子虫的SGT1聚为一支,且东方蜜蜂微孢子虫与家蚕微孢子虫的SGT1进化距离最近。相较于侵染东方蜜蜂微孢子虫后1 d,侵染后2,4,6和8 d nce-miR-11248的表达量均显著下调(P<0.05);侵染后2,4,6和8 d SGT1的表达量均下调,其中侵染后4,6和8 d的表达量与2 d的差异达显著水平(P<0.05)。【结论】nce-miR-11248在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在;东方蜜蜂微孢子虫与家蚕微孢子虫的SGT1亲缘关系最近;随着侵染时间的延长,nce-miR-11248及其靶基因SGT1在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达量均呈持续下降;nce-miR-11248和SGT1是潜在的参与调控微孢子虫侵染过程的因子。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 意大利蜜蜂 nce-miR-11248 sgt1基因 表达谱
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中间偃麦草SGT1基因的克隆及其抗病功能的分析 被引量:17
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作者 王凯 杜丽璞 +6 位作者 张增艳 廖勇 徐惠君 姚乌兰 杨昆 邵艳军 辛志勇 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期520-525,共6页
为了探索中间偃麦草SGT1基因在小麦抗病反应中的应用潜力,采用RT-PCR和RACE方法克隆出中间偃麦草SGT1基因,命名为TiSGT1。该基因编码蛋白具有SGT1蛋白典型的功能域结构,与大麦SGT1序列高度同源。通过基因重组技术构建了TiSGT1的高效组... 为了探索中间偃麦草SGT1基因在小麦抗病反应中的应用潜力,采用RT-PCR和RACE方法克隆出中间偃麦草SGT1基因,命名为TiSGT1。该基因编码蛋白具有SGT1蛋白典型的功能域结构,与大麦SGT1序列高度同源。通过基因重组技术构建了TiSGT1的高效组成型表达载体,通过基因枪法将该载体转化到小麦品种扬麦12基因组中。对转基因植株PCR、Southern杂交与RT-PCR分析表明,TiSGT1基因可在T0、T1和T2代转基因小麦中遗传和表达。黄矮病、白粉病抗性鉴定结果表明,SGT1的超量表达可以提高小麦对黄矮病、白粉病的抗性,TiSGT1可以作为小麦广谱抗病性改良的潜在基因资源。 展开更多
关键词 中间偃麦草 白粉病 sgt1 基因克隆 小麦 抗病性鉴定
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小麦SGT1基因的克隆与表达特性分析 被引量:6
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作者 王凯 张增艳 +1 位作者 黄璜 辛志勇 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期952-956,共5页
为了研究SGT1基因在不同小麦抗病反应中的表达特性,采用RT-PCR和RACE方法,从小麦cDNA中分离出包含SGT1基因全长cDNA序列。该基因编码具有377个氨基酸的蛋白,具有已知SGT1蛋白典型的5个功能域,即TPR区、VR1区、CS区、VR2区和SGS区。小麦S... 为了研究SGT1基因在不同小麦抗病反应中的表达特性,采用RT-PCR和RACE方法,从小麦cDNA中分离出包含SGT1基因全长cDNA序列。该基因编码具有377个氨基酸的蛋白,具有已知SGT1蛋白典型的5个功能域,即TPR区、VR1区、CS区、VR2区和SGS区。小麦SGT1蛋白与大麦SGT1蛋白的氨基酸序列具有97%的相似性。Southern杂交结果显示,SGT1基因在小麦基因组中有3个拷贝。分析结果表明,大麦黄矮病毒、白粉病菌、纹枯病菌和赤霉病菌侵染小麦均可诱导小麦SGT1基因转录水平上调,说明SGT1可能参与了小麦不同抗病反应。 展开更多
关键词 小麦 sgt1基因 克隆 抗病反应 信号途径
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水稻抗病调控因子OsSGT1原核表达载体构建和表达蛋白纯化 被引量:5
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作者 王亚玲 胡国富 +2 位作者 李群 胡宝忠 何祖华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期285-289,共5页
SGT1是植物防卫反应信号转导的关键调控因子,水稻中也存在SGT1的同源基因OsSGT1,但其确切功能仍然未知。我们根据已有的信息设计引物,由cDNA文库PCR扩增获得了包含OsSGT1整个编码区的基因片段。将此片段经由过渡载体pBluescriptⅡSK(+)... SGT1是植物防卫反应信号转导的关键调控因子,水稻中也存在SGT1的同源基因OsSGT1,但其确切功能仍然未知。我们根据已有的信息设计引物,由cDNA文库PCR扩增获得了包含OsSGT1整个编码区的基因片段。将此片段经由过渡载体pBluescriptⅡSK(+),构建到融合表达载体pET32a(+)上,然后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,6h后获得最高表达量。扩大培养后,通过SDS-PAGE电泳分离,割胶回收目的蛋白,采用电洗脱后再透析的方式纯化,获得了纯净的、足以用于制备专化抗血清的OsSGT1蛋白,为进一步研究OsSGT1的表达和功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 水稻 sgt1 原核表达
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SGT1正调控橡胶树白粉菌在拟南芥上激活的抗病性 被引量:3
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作者 戎伟 梅双双 《广东农业科学》 CAS 2016年第10期112-116,F0003,共6页
通过在拟南芥野生型Col-0和突变体sgt1b、eds1上接种橡胶树白粉菌Oidium heveae HN1106,分析了白粉菌细胞进入率、叶片发病症状、菌丝生长状态、细胞死亡和活性氧产生等表型。结果表明,与野生型Col-0相比,橡胶树白粉菌在拟南芥sgt1b上... 通过在拟南芥野生型Col-0和突变体sgt1b、eds1上接种橡胶树白粉菌Oidium heveae HN1106,分析了白粉菌细胞进入率、叶片发病症状、菌丝生长状态、细胞死亡和活性氧产生等表型。结果表明,与野生型Col-0相比,橡胶树白粉菌在拟南芥sgt1b上激发的早期抗病性、后期抗病性以及抗病反应部分降低,暗示着SGT1在稳定识别橡胶树白粉菌的抗性蛋白方面发挥着非常重要的作用。 展开更多
关键词 橡胶树白粉菌 拟南芥 sgt1 抗病性
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新模式植物短柄二叶草SGT1和RAR1基因沉默和蛋白纯化载体构建 被引量:1
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作者 张岳平 瞿华香 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期138-144,共7页
短柄二叶草作为一种新型的模式植物,已成为当前研究热点。其具有基因组小、生长周期短、生存环境简单和容易人工转化等重要生理和遗传特性,被认为是一种潜力巨大的人类研究能源和粮食作物的重要模式植物。SGT1和RAR1基因是高度保守的并... 短柄二叶草作为一种新型的模式植物,已成为当前研究热点。其具有基因组小、生长周期短、生存环境简单和容易人工转化等重要生理和遗传特性,被认为是一种潜力巨大的人类研究能源和粮食作物的重要模式植物。SGT1和RAR1基因是高度保守的并与植物抗病功能紧密相关的重要基因。本文采用Gateway克隆技术构建了SGT1和RAR1的基因沉默表达载体。阳性克隆载体经PCR、酶切和测序鉴定。为进一步研究SGT1和RAR1互作蛋白及其功能,采用该克隆技术将基因cDNA全长克隆至串联亲和纯化蛋白表达载体pEarleyGate205中,为纯化SGT1和RAR1及其互作蛋白提供了基础。正确的阳性克隆载体经农杆菌介导转化至短柄二叶草Bd21获得转化株,以期进一步研究SGT1和RAR1基因及蛋白互作对于短柄二叶草抗病功能的影响。 展开更多
关键词 短柄二叶草 sgt1和RAR1 基因沉默 Gateway克隆 串联亲和纯化
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三浅裂野牵牛ItSGT1基因克隆及分析(英文)
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作者 陈观水 柏洁 +2 位作者 夏咛 周以飞 潘大仁 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期223-228,共6页
SGT1(suppressor of the G2allele of skp1)是多种植物抗病基因介导的抗病信号途径中的重要元件。该研究利用RT-PCR和RACE方法克隆出甘薯近缘野生种三浅裂野牵牛的SGT1基因,命名为ItSGT1。该基因含有一个长度为1 087bp的开放阅读框,编码... SGT1(suppressor of the G2allele of skp1)是多种植物抗病基因介导的抗病信号途径中的重要元件。该研究利用RT-PCR和RACE方法克隆出甘薯近缘野生种三浅裂野牵牛的SGT1基因,命名为ItSGT1。该基因含有一个长度为1 087bp的开放阅读框,编码361个氨基酸,分子量约为40.1kD,等电点为5.05。Blast及多序列比对分析表明,该基因与其他植物中的SGT1具有较高的相似性,且具有SGTl蛋白典型的功能域结构,即TPR区、VR1区、CS区、VR2区和SGS区。Southern杂交结果显示,SGT1基因在三浅裂野牵牛基因组中是多拷贝基因。组织特异性表达分析表明,ItSGT1基因在三浅裂野牵牛的根、茎和叶中均有表达。 展开更多
关键词 三浅裂野牵牛 sgt1 抗病基因 RT-PCR
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高粱抗病基因SbSGT1的克隆及原核表达 被引量:1
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作者 陈美晴 陈俊 +5 位作者 蒋君梅 王营锴 屈志广 方远鹏 任明见 谢鑫 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1933-1942,共10页
为探究高粱抗病基因SbSGT1的功能,以高粱BTx623为材料,利用RNA反转录得cDNA,以cDNA为模板扩增出全长SbSGT1基因,并对其进行生物信息学分析。进一步构建pET-28a-SbSGT1重组质粒进行原核表达,并分别对表达菌株、诱导温度以及异丙基-β-D-... 为探究高粱抗病基因SbSGT1的功能,以高粱BTx623为材料,利用RNA反转录得cDNA,以cDNA为模板扩增出全长SbSGT1基因,并对其进行生物信息学分析。进一步构建pET-28a-SbSGT1重组质粒进行原核表达,并分别对表达菌株、诱导温度以及异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导浓度进行了优化。结果表明,SbSGT1全长1095 bp,编码364个氨基酸,蛋白理论分子大小约为40.45 kDa,蛋白质等电点为5.0。进化树分析表明,SbSGT1与玉米和水稻的亲缘性较高;蛋白质序列分析表明,SbSGT1蛋白为亲水性蛋白,定位在细胞质中;二级结构预测发现其α螺旋和无规则卷曲占比最高,分别达到43.41%和45.88%。原核表达结果表明,SbSGT1最佳表达菌株为大肠杆菌BL21(DE3),最佳诱导温度和IPTG浓度分别为25℃和0.8 mmol·L-1。本研究为进一步探究SbSGT1基因在高粱抗病机理中所发挥的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 高粱 sgt1 基因克隆 原核表达
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SGT1在植物抗病反应中的功能研究进展 被引量:6
9
作者 王凯 张增艳 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2008年第1期115-118,共4页
SGT1是多种植物抗病基因介导的抗病信号途径的必要组件。SGT1基因的突变或沉默会导致多种植物R基因介导抗病性的丧失。另外,SGT1还参与调控植物的非宿主抗性(non-host resistance)。SGT1主要作为分子伴侣或调控泛素化对植物抗病反应进... SGT1是多种植物抗病基因介导的抗病信号途径的必要组件。SGT1基因的突变或沉默会导致多种植物R基因介导抗病性的丧失。另外,SGT1还参与调控植物的非宿主抗性(non-host resistance)。SGT1主要作为分子伴侣或调控泛素化对植物抗病反应进行调控。本文综述了SGT1蛋白结构、SGT1在不同植物抗病反应中的重要性与作用机制,并对SGT1在植物抗病基因工程中的应用潜力进行讨论。 展开更多
关键词 植物抗病 信号途径 SGTl RARl HSP90
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甘薯抗病虫相关基因SGT1的TRAP分析
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作者 王崇 杨新笋 +4 位作者 雷剑 苏文瑾 柴沙沙 张文英 王连军 《湖北农业科学》 2019年第17期119-122,共4页
以抗病虫相关基因SGT1作为靶标基因,设计出1条固定引物,与11条随机引物组合.利用这11对引物对试验材料鄂薯11和鄂紫薯13进行TRAP-PCR扩增,发现11对引物组合扩增出清晰条带,且表现出良好的多态性.研究获得与SGT1基因相关联的TRAP标记,该... 以抗病虫相关基因SGT1作为靶标基因,设计出1条固定引物,与11条随机引物组合.利用这11对引物对试验材料鄂薯11和鄂紫薯13进行TRAP-PCR扩增,发现11对引物组合扩增出清晰条带,且表现出良好的多态性.研究获得与SGT1基因相关联的TRAP标记,该标记可进行甘薯[Ipomoea batatas(L.)Lam.]群体的遗传多样性分析,为甘薯的抗病虫育种提供理论依据. 展开更多
关键词 甘薯[Ipomoea batatas(L.)Lam.] 抗病虫 sgt1基因 TRAP标记
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烟草病毒抗性相关基因SGT1的电子克隆及序列分析 被引量:1
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作者 贾蒙骜 陆宁 +1 位作者 陈兴江 曹毅 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第12期32-35,共4页
为研究烟草病毒抗性信号通路基因(SGT),以番茄(Solanum lycopersicum)信号通路基因slSGT1-2为探针,利用电子克隆的方法从栽培烟草品种珊西烟中克隆信号通路基因,并对其进行了序列分析。结果表明:成功克隆到的信号通路基因cDNA序列1 041... 为研究烟草病毒抗性信号通路基因(SGT),以番茄(Solanum lycopersicum)信号通路基因slSGT1-2为探针,利用电子克隆的方法从栽培烟草品种珊西烟中克隆信号通路基因,并对其进行了序列分析。结果表明:成功克隆到的信号通路基因cDNA序列1 041bp,包含完整的开放阅读框,编码346个氨基酸,具有23kD类SGT1蛋白结构域(p23-SGT1like domain)。分子式为C1719H2707N441O509S16,分子量为38 209Da,理论等电点为5.35,属于稳定蛋白;在275~308氨基酸处形成1个跨膜区,N端以螺旋为主,C端在螺旋中出现折叠。NtSGT1氨基酸序列与番茄SGT1-2基因编码蛋白一致性达到90%,而与已报道的野生烟基因相比C端区域缺少部分保守结构域。说明,NtSGT1是烟草中未报道的病毒抗性信号通路基因。 展开更多
关键词 栽培烟草 病毒抗性 sgt1 电子克隆
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基因枪介导的小麦叶片瞬间表达体系的优化及应用 被引量:1
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作者 邢莉萍 钱晨 +4 位作者 李颖波 俞奇 曹爱忠 王秀娥 陈佩度 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期143-150,共8页
麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的... 麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的多个转化参数进行优化,筛选出表达频率最高的参数组,即小麦叶片采用固体保鲜培养基固定,钨粉用量为每枪300μg,质粒DNA用量为每枪750ng,可裂膜氦压为1 350psi,可裂膜与受体膜距离6mm,受体与阻挡网距离6cm,与先前报道的方法相比表达频率有显著提高。应用上述参数在感病小麦品种离体叶片中过量表达一个已知具有抗白粉病功能的簇毛麦SGT1基因,结果表明该基因瞬间表达使互作细胞吸器指数降低,表现为对白粉病菌侵入和吸器形成具有抑制作用,在一定程度上增强了表达细胞对白粉病菌的抗性,使目标基因的抗性功能再次得到印证。本研究还进一步运用该优化体系开展瞬间表达介导的基因沉默(TIGS)实验,将携带抗白粉病基因Pm21的抗病小麦品种南农9918和感病小麦品种扬麦158中的内源SGT1和RAR1分别或同时沉默,结果显示南农9918的叶片表皮与白粉菌互作细胞的吸器指数增高,在一定程度上降低了表达细胞对白粉菌的抗性。而扬麦158中互作细胞的吸器指数较对照变化不显著。说明这两个基因均分别参与了Pm21介导的抗白粉病信号途径,且二者共同作用与白粉病抗性关系更加密切。 展开更多
关键词 小麦 叶片表皮细胞 瞬间表达 白粉菌互作 sgt1 RAR1
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Proxitome profiling reveals a conserved SGT1-NSL1 signaling module that activates NLR-mediated immunity
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作者 Dingliang Zhang Xinxin Yang +13 位作者 Zhiyan Wen Zhen Li Xinyu Zhang Chenchen Zhong Jiajie She Qianshen Zhang He Zhang Wenli Li Xiaoyun Zhao Mingliang Xu Zhen Su Dawei Li Savithramma P.Dinesh-Kumar Yongliang Zhang 《Molecular Plant》 SCIE 2024年第9期1369-1391,共23页
Suppressor of G2 allele of skp1(SGT1)is a highly conserved eukaryotic protein that plays a vital role in growth,development,and immunity in both animals and plants.Although some SGT1 interactors have been identified,t... Suppressor of G2 allele of skp1(SGT1)is a highly conserved eukaryotic protein that plays a vital role in growth,development,and immunity in both animals and plants.Although some SGT1 interactors have been identified,the molecular regulatory network of SGT1 remains unclear.SGT1 serves as a co-chaperone to stabilize protein complexes such as the nucleotide-binding leucine-rich repeat(NLR)class of immune receptors,thereby positively regulating plant immunity.SGT1 has also been found to be asso-ciated with the SKP1-Cullin-F-box(SCF)E3 ubiquitin ligase complex.However,whether SGT1 targets im-mune repressors to coordinate plant immune activation remains elusive.In this study,we constructed a toolbox for TurbolD-and split-TurbolD-based proximity labeling(PL)assays in Nicotiana benthamiana and used the PL toolbox to explore the SGT1 interactome during pre-and post-immune activation.The comprehensive SGT1 interactome network we identified highlights a dynamic shift from proteins associ-ated with plant development to those linked with plant immune responses.We found that SGT1 interacts with Necrotic Spotted Lesion1(NSL1),which negatively regulates salicylic acid-mediated defenseby inter-fering with the nucleocytoplasmic trafficking of non-expressor of pathogenesis-related genes 1(NPR1)during N NLR-mediated response to tobacco mosaic virus.SGT1 promotes the SCF-dependent degrada-tion of NSL1 to facilitate immune activation,while salicylate-induced protein kinase-mediated phosphory-lation of SGT1further potentiates this process.Besides NNLR,NSL1also functions in several other NLR-mediated immunity.Collectively,our study unveils the regulatory landscape of SGT1 and reveals a novel SGT1-NSL1 signaling module that orchestrates plant innate immunity. 展开更多
关键词 suppressor of G2 allele of skp1 sgt1 proximity labeling N NLR immune receptor Necrotic Spotted Lesion 1 NSL1 salicylic acid ubiquitination
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Intra-strain Elicitation and Suppression of Plant Immunity by Ralstonia solanacearum Type-III Effectors in Nicotiana benthamiana 被引量:6
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作者 Yuying Sang Wenjia Yu +5 位作者 Haiyan Zhuang Yali Wei Lida Derevnina Gang Yu Jiamin Luo Alberto P.Macho 《Plant Communications》 2020年第4期87-100,共14页
Effector proteins delivered inside plant cells are powerful weapons for bacterial pathogens,but this exposes the pathogen to potential recognition by the plant immune system.Therefore,the effector repertoire of a give... Effector proteins delivered inside plant cells are powerful weapons for bacterial pathogens,but this exposes the pathogen to potential recognition by the plant immune system.Therefore,the effector repertoire of a given pathogen must be balanced for a successful infection.Ralstonia solanacearum is an aggressive pathogen with a large repertoire of secreted effectors.One of these effectors,RipE1,is conserved in most R.solanacearum strains sequenced to date.In this work,we found that RipE1 triggers immunity in N.benthamiana,which requires the immune regulator SGT1,but not EDS1 or NRCs.Interestingly,RipE1-triggered immunity induces the accumulation of salicylic acid(SA)and the overexpression of several genes encoding phenylalanine-ammonia lyases(PALs),suggesting that the unconventional PALmediated pathway is responsible for the observed SA biosynthesis.Surprisingly,RipE1 recognition also induces the expression of jasmonic acid(JA)-responsive genes and JA biosynthesis,suggesting that both SA and JA may act cooperatively in response to RipE1.We further found that RipE1 expression leads to the accumulation of glutathione in plant cells,which precedes the activation of immune responses.R.solanacearum secretes another effector,RipAY,which is known to inhibit immune responses by degrading cellular glutathione.Accordingly,RipAY inhibits RipE1-triggered immune responses.This work shows a strategy employed by R.solanacearum to counteract the perception of its effector proteins by plant immune system. 展开更多
关键词 ETI sgt1 EFFECTOR immunity Ralstonia PAL
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