SH3BGRL对胃癌细胞增殖、迁移的影响

目的探讨SH3结构域结合富含谷氨酸的蛋白质(SH3 binding glutamic acid-rich protein like,SH3BGRL)对胃癌细胞增殖、迁移能力的影响及其作用机制。方法基于TCGA、GTEx及GEO数据库,通过生物信息学分析SH3BGRL在胃癌组织及正常胃黏膜上皮组织中的表达情况;通过HPA数据库获取SH3BGRL蛋白在胃癌组织及正常胃黏膜上皮组织中的表达图谱;并基于TCGA数据库的SH3BGRL表达水平进行高、低表达分组,分析其对胃癌患者预后、免疫细胞浸润和免疫治疗的影响。通过临床标本IHC染色观察SH3BGRL蛋白在胃癌中的表达情况;采用RT-qPCR检测SH3BGRL在胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达水平。将胃癌HGC-27及NCI-N87细胞进行siRNA转染分为si-NC组(转染阴性对照组)、si-SH3BGRL组(沉默SH3BGRL组),并通过RT-qPCR及Western blot验证是否转染成功。采用CCK-8及Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力,随后诱导THP-1单核细胞分化为M0巨噬细胞,并将分化后的M0巨噬细胞和转染后的胃癌细胞进行共培养,采用RT-qPCR及细胞免疫荧光检测共培养之后M2巨噬细胞标志物的改变,并采用RT-qPCR检测SH3BGRL沉默胃癌细胞中CSF1的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,与正常胃黏膜上皮组织相比,SH3BGRL在胃癌组织中表达上调(均P<0.01),且SH3BGRL高表达者总生存期和无进展生存期比SH3BGRL低表达的患者短(均P<0.01)。SH3BGRL高表达者M2巨噬细胞浸润比例更高,与免疫治疗低应答率相关(均P<0.01)。IHC染色结果表明,SH3BGRL蛋白在胃癌组织中表达上调(P<0.001)。与GES-1细胞相比,SH3BGRL在胃癌HGC-27及NCI-N87细胞中的mRNA表达水平均显著上调(均P<0.01)。与si-NC组相比,沉默SH3BGRL后HGC-27和NCI-N87细胞的增殖能力明显下降(均P<0.01),HGC-27细胞迁移能力显著下降(P<0.01)。M0巨噬细胞与沉默SH3BGRL的HGC-27及NCI-N87共培养后,M2巨噬细胞标志物CD163、CD206及Arg1均下调(均P<0.01)。在HGC-27及NCIN87细胞中沉默SH3BGRL后,NF-κB信号通路的靶基因CSF1显著下调(均P<0.01)。结论SH3BGRL在胃癌中表达上调,沉默SH3BGRL能抑制胃癌细胞增殖和迁移,其机制可能与抑制M2巨噬细胞极化进而形成免疫抑制肿瘤微环境有关。

lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达在非小细胞肺癌患者中的临床意义

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)-miR210HG、SH3BGRL3表达在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的临床意义。方法选取76例NSCLC患者,比较癌组织和癌旁组织中lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3 mRNA阳性表达率,并将患者分为阳性组和阴性组。比较lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3阳性和阴性表达与临床病理特征的关系。比较各组生存情况。结果癌组织中lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。lncRNA-miR210HG阳性表达者Ⅲ期占比、淋巴结转移占比高于阴性表达者;SH3BGRL3阳性表达者Ⅲ期占比、淋巴结转移占比、低中分化占比高于阴性表达者(P<0.05)。lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3阳性组总生存率均低于阴性组(P<0.05)。结论lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3在NSCLC癌组织中高表达,不同表达水平者TNM分期、淋巴结转移、分化程度不同。

SH3GL2基因对喉癌细胞增殖、凋亡的影响及在化疗增敏中的作用

目的探讨SH3GL2基因对喉癌细胞凋亡、侵袭能力的影响,及其对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响。方法构建重组载体pcDNA3.1-SH3GL2,转染Hep2细胞;RT-PCR、Westernblot检测转染后SH3GL2基因的表达改变;MTT法测定细胞毒性指数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用DDP后检测细胞的凋亡和增殖情况。结果成功构建重组载体;转染Hep2细胞后SH3GL2基因的表达与对照组比较有明显增强,凋亡明显升高(P<0.05),增殖能力明显下降(P<0.05);与DDP处理组比较,联合处理组细胞的凋亡增加更为明显(P<0.05),对细胞增殖能力的抑制也更为显著(P<0.05)。结论 SH3GL2基因表达增高能够抑制Hep2细胞的增殖,促进细胞凋亡,并能够在一定程度上增强Hep2细胞对化疗药物DDP的敏感性。

SH3GL2基因在人脑胶质瘤中表达的研究

目的研究SH3GL2基因的表达改变与人脑胶质瘤之间的相关性。方法选择42例人脑胶质瘤和26例正常人脑组织标本,应用荧光定量PCR和Western blot方法检测标本中SH3GL2基因mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常脑组织标本相比,SH3GL2基因在人脑胶质瘤组织标本中的mRNA和蛋白的表达存在明显下调,结果具有统计学差异(<0.05)。结论SH3GL2基因的表达改变与人脑胶质瘤相关,是一个新的候选的肿瘤抑制基因。

定位于鸡选择性清扫区域的SH3RF2基因生物信息学分析

为了解鸡SH3RF2基因的结构与功能,由NCBI数据库获得鸡SH3RF2基因的mRNA和氨基酸序列数据信息,利用NCBI/Blast软件进行序列分析、同源性比对确定鸡SH3RF2基因的3'UTR区序列。在此基础上,利用公共数据库和相关软件对SH3RF2基因的CDS(coding sequence)区和其3'UTR(untranslated region)区进行了MicroRNA靶标的预测分析,进一步利用生物信息学相关数据库对其蛋白理化性质和一级结构进行分析,模拟了其二级结构和空间结构并构建了SH3RF2蛋白的系统进化树。

青少年特发性脊柱侧凸疾病候选基因SH3GL1外显子序列比对分析

目的通过对候选基因SH3GL1的核酸序列进行比对分析,确定其是否为青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的致病基因。方法采取以家系为基础的"病例同胞对"研究方案,提取基因组DNA,根据候选基因SH3GL1核酸序列,以10个外显子为重点设计引物对,进行PCR扩增、克隆和测序,用GeneTool软件对外显子测序结果进行序列比对分析,判断是否存在碱基变异,并进行蛋白质结构预测分析。结果候选基因SH3GL1中的10个外显子成功地在AIS"同胞对"基因组DNA中得到扩增和克隆,且序列测定均取得阳性结果。通过比对分析,在SH3GL1的10个外显子中共发现12处碱基变异,分别位于第2(3处)、4、5(4处)、6、8和10(2处,非编码区)六个外显子上。其中先证者mRNA第515位碱基如果为T,则形成终止密码子,导致蛋白阅读框发生改变,蛋白质序列预测分析显示编码截短蛋白,从而影响蛋白质的一级结构。结论SH3GL1是AIS的致病基因之一。

SH3BP4基因对肝癌细胞迁移和增殖作用的实验研究

目的:构建SH3结构域结合蛋白4(SH3-domain binding protein 4,SH3BP4)重组腺病毒载体及shSH3BP4慢病毒载体,初步探索SH3BP4对肝癌细胞迁移增殖能力的影响。方法:PCR扩增SH3BP4 cDNA序列并构建腺病毒重组质粒pAdEasySH3BP4,HEK293细胞包装重组腺病毒AdSH3BP4;构建SH3BP4基因短发夹型RNA干扰慢病毒载体,转染至HEK293T细胞,包装重组慢病毒shSH3BP4。采用Western blot检测SH3BP4在人正常肝脏细胞及肝癌细胞的内源性表达,将SH3BP4过表达实验部分设为3个组:Mock组、AdGFP组和AdSH3BP4组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdSH3BP4组为感染腺病毒AdSH3BP4的实验组;将SH3BP4敲低实验部分设为2个组:sh Control组和shSH3BP4组,sh Control组为感染慢病毒sh PLL3.7的对照组,shSH3BP4组为感染慢病毒shSH3BP4的实验组。通过Transwell和划痕实验检测SH3BP4过表达和敲低对肝癌细胞迁移能力的影响;MTS和直接克隆形成实验检测SH3BP4过表达和敲低对肝癌细胞的增殖能力的影响。结果:经限制性内切酶酶切及DNA测序验证,成功构建AdSH3BP4重组腺病毒载体和shSH3BP4慢病毒载体。Transwell结果表明,AdSH3BP4组(74.800±0.544)相较于空白对照组(219.467±2.640)与AdGFP组(210.533±8.498),迁移的细胞数明显减少(P=0.000);而shSH3BP4组(191.467±3.906))比sh Control组(91.733±2.763)细胞的迁移数目明显增加(P=0.000)。划痕实验结果表明,AdSH3BP4组的细胞修复率[(10.400±0.036)%]明显低于空白对照组[(37.500±0.063)%]与AdGFP组[(50.000±0.063)%](P=0.000);而shSH3BP4组[(55.00±0.05)%]明显高于sh Control组[(23.3±0.029)%](P=0.000)。MTS结果表明:AdSH3BP4组在96 h的吸光度值(0.921±0.053)与空白对照组(1.091±0.043)及AdGFP组(1.062±0.024)相比明显降低(P=0.005)。shSH3BP4组在96 h的吸光度值(1.497±0.020)与sh Control对照组(1.142±0.103)相比明显升高(P=0.004)。直接克隆形成实验结果表明,AdSH3BP4组的细胞克隆形成数(34.333±2.082)相较于空白对照组(86.333±4.726)与AdGFP组(87.333±1.528)明显减少(P=0.000),而shSH3BP4组(65.000±6.557)却明显高于sh Control组(31.000±2.000)(P=0.001)。上述实验结果说明SH3BP4过表达能显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力,而SH3BP4敲低能明显促进肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力。结论:SH3BP4可抑制肝癌细胞迁移、侵袭和增殖,可能为肝癌的诊治提供一个新的靶标。

lncRNA SH3BP5-AS1单核苷酸多态性与中国汉族人缺血性中风血瘀证显著相关

目的研究旨在探讨中国汉族人群中lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836与缺血性中风(ischemic stroke,IS)遗传易感性及中医证候的关系。方法研究包括774例IS患者和793例对照组。采用Massarray SNP基因分型方法进行基因分型。采用《中风病中医辨证诊断标准》量表对IS患者进行中医证候鉴定。所有统计分析采用SPSS 17.0统计软件进行。结果在隐性模型下,lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836与缺血性中风血瘀证显著相关[OR(95%CI)=0.52(0.29-0.93),P=0.028],在校正了包括性别和年龄在内的协变量后,结果依然有统计学意义;而rs11713836与缺血性中风易感性及风、痰、火热、气虚证等中医证候易感性无相关性。此外,rs11713836与血清APO-B[隐性模型:OR(95%CI)=0.09(0.02-0.17),P=0.032]、VLDL[加性模型:OR(95%CI)=0.09(0.04-0.14),P<0.001;显性模型:OR(95%CI)=0.09(0.02-0.16),P=0.011;隐性模型:OR(95%CI)=0.19(0.09-0.30),P<0.001]、TG[加性模型:OR(95%CI)=0.15(0.05-0.24),P=0.003;显性模型:OR(95%CI)=0.14(0.01-0.27),P=0.041;隐性模型:OR(95%CI)=0.31(0.11-0.50),P=0.003]、FIB[显性模型:OR(95%CI)=0.20(0.04-0.35),P=0.012]显著相关,调整性别年龄后以上关联依然有统计学意义。结论lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836可能影响缺血性中风血瘀证的发生,有望作为缺血性中风血瘀证的生物标志物与潜在治疗靶点,并且可能影响缺血性中风患者的血脂代谢和凝血功能。

SH3PXD2B蛋白对中耳炎发病机制的影响

目的探讨SH3PXD2B蛋白介导的巨噬细胞的趋化性在中耳炎发病机制中的可能作用。方法引入SH3PXD2B突变型小鼠-/-及野生型+/+小鼠,采用听觉脑干诱发电位,耳内镜筛选、剔除。免疫组织荧光法进行F-肌动蛋白及SH3PXD2B抗体双重染色,采用硫代乙醇酸盐培养基(thioglycollate,TG)诱出法获得腹腔巨噬细胞,进行在体及离体巨噬细胞的趋化游走能力检测,并进行中耳腔巨噬细胞诱出率的比较。结果双重染色结果F-动蛋白及SH3PXD2B蛋白均表达于树突状结构,且位置一致;离体及在体巨噬细胞的趋化游走能力检测,突变型-/-巨噬细胞游走能力下降,突变型-/-小鼠中耳腔巨噬细胞的诱出率下降。结论 SH3PXD2B突变导致树突状结构形成障碍,进而影响巨噬细胞的趋化游走功能可能是中耳炎发病机制之一。

巨颌症致病基因SH3BP2及其对病变中破骨细胞的作用

巨颌症是一种少见的常染色体显性遗传病,现已明确其致病基因为SH3BP2。此基因突变导致SH3BP2蛋白功能的改变,从而引起病变中破骨细胞的病理性高活性表达,最终导致巨颌症骨质破坏的病理性改变。下面就SH3BP2基因的功能和SH3BP2基因对巨颌症疾病发生的调控作用以及与破骨细胞的联系作一综述。

非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。

SH3PXD2b基因突变与颅颌面畸形和中耳炎

先天性颅颌面畸形作为口腔颌面外科的常见病,多由基因突变引起。先天性颅颌面畸形在影响患者颅颌面形态和功能的同时,多伴随有咽鼓管功能障碍和中耳炎的发生,引起听觉障碍。SH3PXD2b作为新发现的伪足受体蛋白基因,对细胞表面伪足形成、细胞外基质改建与重塑、颅颌面器官的发生有重要的意义。本文就SH3PXD2b基因、SH3PXD2b基因突变、颅颌面畸形与咽鼓管功能障碍和中耳炎等研究进展作一综述。

相互作用结构域SH3和WW的蛋白质组学研究

在过去十年的研究中,发现许多蛋白质相互作用是通过相互作用结构域(如SH2,WW,SH3等)与其识别的另一个蛋白质中一段短肽序列的结合完成的,蛋白质相互作用结构域在蛋白质亚细胞定位、信号传导和蛋白复合体的组装等方面发挥重要功能。随着蛋白质组学技术的发展,高通量技术用于结构域结合特性及相互作用网络的研究。本文通过概述SH3和WW结构域的蛋白质组学研究策略的最新进展,总结结构域的几种现有研究策略。

SH3GL1在紫杉醇耐药乳腺癌中的表达及临床意义

膜结合蛋白SH3GL1参与调控某些肿瘤细胞生物学行为,而其对紫杉醇耐药乳腺癌细胞的恶性生物学行为影响尚未见报道.为阐明SH3GL1对紫杉醇耐药敏感性的影响以及潜在的分子机制,本研究首先采用免疫组化法证实SH3GL1在紫杉醇耐药乳腺癌组织高表达(P<0.001).Western印迹法证实,SH3GL1在紫杉醇耐药细胞株MCF-7/PTX高表达(P<0.01);随后,采用MTT分别检测(0,50,100 nmol/L)紫杉醇处理后MCF-7细胞株增殖情况,同时Western印迹法检测SH3GL1表达,发现100 nmol/L紫杉醇能够抑制MCF-7细胞增殖(P<0.05);同时抑制SH3GL1表达(P<0.01);敲减SH3GL1表达后,紫杉醇耐药细胞株MCF-7/PTX和MCF-7增殖速率降低(P<0.05),耐药基因MDR1表达降低(P<0.05),p-AKT和p-gp水平下降(P<0.05).上述结果表明,降低SH3GL1表达可以减弱紫杉醇耐药性,增加乳腺癌对紫杉醇的敏感性,这为临床上紫杉醇耐药乳腺癌患者的治疗提供了新的靶点.

日立SH3单片机最小系统的建立

为了在ARM处理器几乎垄断国内32位处理器市场的形势下给国内工程师多一个选择方向并能在资料匮乏的情况下很快掌握日立SH3系列32位处理器开发出实用的产品,在此用日立SH3系列的HD6417708S型号单片机建立了SH3系列单片机的最小系统,并利用单片机的串口模块做了串口通信实验.实验结果实现了串口通信的预期结果,说明建立的SH3系列单片机的最小系统运行正常可以采信。

微RNA-603靶向山梨糖和SH3结构域包含蛋白3诱导髓核细胞炎症反应影响椎间盘退行性变

目的筛选椎间盘退行性变(IDD)组织中表达升高的miRNA,探究其在IDD中的作用及可能机制。方法比较已发表的2个IDD miRNA表达谱测序数据集,筛选出表达升高最显著的miRNA——miRNA-603。收集10例IDD患者和10例腰椎骨折患者的椎间盘组织,取正常椎间盘组织分离培养髓核细胞。用qRT-PCR检测IDD组织和正常椎间盘组织中miRNA-603的表达。通过miRNA-603过表达和抑制实验探究miRNA-603在TNF-α诱导的髓核细胞炎症反应中的作用。利用生物信息学网站及已发表的IDD mRNA测序数据集,获得miRNA-603的靶基因山梨糖和SH3结构域包含蛋白3(SORBS3),并利用双荧光素酶报告基因实验验证。通过miRNA-603和SORBS3过表达实验探究miRNA-603和SORBS3在髓核细胞炎症反应中的功能。结果miRNA-603在IDD组织中表达升高(P<0.01)。在髓核细胞中过表达miRNA-603可以促进IL-6和IL-1β的表达(P均<0.01);抑制miRNA-603表达后,TNF-α刺激诱导的IL-6和IL-1β表达降低(P<0.01,P<0.05)。同时,cleaved caspase-1的蛋白表达量也降低(P<0.01)。生物信息学预测显示miRNA-603可以靶向调控SORBS3基因,IDD组织样本检测显示SORBS3低表达(P<0.01)。与单独过表达miRNA-603相比,同时过表达miRNA-603和SORBS3可抑制TNF-α诱导的髓核细胞中IL-6和IL-1β的表达(P均<0.01)。结论人IDD组织中miRNA-603表达升高。miRNA-603可能通过靶向抑制SORBS3继而诱导髓核细胞炎症反应,推动IDD进程。

PTD-BCR/ABL SH3融合蛋白对肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤作用

目的:探讨PTD鄄BCR/ABLSH3融合蛋白对肝癌细胞株SMMC鄄7721的体外杀伤活性。方法:通过将PTD鄄BCR/ABLSH3融合蛋白与SMMC鄄7721细胞共培养,用免疫细胞化学染色的方法观察和检测PTD鄄BCR/ABLSH3融合蛋白进入细胞后的定位,MTT法检测蛋白对肝癌细胞的杀伤活性,电镜观察SMMC鄄7721肝癌细胞与PTD鄄BCR/ABLSH3融合蛋白共培养后超微结构变化。结果:PTD鄄BCR/ABLSH3融合蛋白进入SMMC鄄7721细胞株后主要分布在细胞核,少量分布于胞浆。融合蛋白对SMMC鄄7721细胞株的杀伤作用呈浓度依赖性,在所选蛋白浓度和观察时限内,当蛋白浓度≥0.14mg/ml、共培养4h后,SMMC鄄7721细胞形态就出现改变,8h后出现死亡细胞。电镜显示,PTD鄄BCR/ABLSH3融合蛋白促使SMMC鄄7721细胞株凋亡。结论:PTD鄄BCR/ABLSH3融合蛋白能抑制SMMC鄄7721细胞株增殖,促进其凋亡,并改变其骨架结构。

足体调节蛋白SH3PXD2B基因生物信息学分析

目的利用多种生物信息学方法,研究SH3PXD2B基因序列信息和蛋白结构,为今后进一步验证该基因在口腔颌面头颈部的功能提供依据。方法从Genbank得到SH3PXD2B序列,采用基因结构分析,预测该蛋白的亚细胞定位、二级结构、三级结构、功能结构域和抗原表位等信息。结果 SH3PXD2B基因编码长度为911aa的蛋白,具有1个PX和4个SH3结构域,蛋白理论分子量为101579.0,理论等电点为8.82。蛋白结构中α螺旋占21.62%,β转角占6.70%,无规则卷曲占58.95%。蛋白结构中无信号肽,但有4个跨膜结构,和8处抗原表面位点。蛋白互作网络显示,与其互作蛋白多与细胞伪足形成和细胞粘附有关。进化分析显示家猪、家兔等与人SH3PXD2B基因相似性更高。结论利用生物信息学方法预测SH3PXD2B蛋白的结构和功能,能为其在口腔颌面头颈部功能的研究提供信息基础。

SH3GL1与p-ERK在原发性肝癌中的表达与其对索拉非尼治疗效果的影响

目的研究SH3GL1和p-ERK在原发性肝癌组织中的表达以及二者对服用索拉非尼患者预后的影响。方法收集我院自2008年1月至2016年12月期间因原发性肝癌进行手术治疗,并且术后坚持口服索拉非尼的患者组织标本共73例,免疫组化分析患者组织中SH3GL1和p-ERK的表达情况,统计所有患者性别、年龄、术前HBs Ag表达情况、术前AFP值、术前肝功能分级、体力状况评分、肿瘤分化程度、是否有脉管侵犯、是否有肝外转移病灶、肿瘤数量、肿瘤分期在内的多项临床指标,分析SH3GL1和p-ERK在HCC中的表达情况与这些指标的联系及其对患者预后的影响。结果 SH3GL1和p-ERK在原发性肝癌患者组织中阳性表达率高,并且二者的表达水平呈正相关关系(P<0.001);SH3GL1的高表达与肿瘤有肝外转移、肿瘤多发和肿瘤分期相关,p-ERK的高表达则与患者肿瘤分期相关;影响肝癌术后服用索拉非尼患者总生存期的危险因素包括年龄低于50岁、SH3GL1高表达,p-ERK高表达、有肝外转移灶、肿瘤多发,其中SH3GL1高表达、有肝外转移和肿瘤多发为影响总预后的独立危险因素。结论 SH3GL1和p-ERK在原发性肝癌中的表达对于肝癌多项临床指标相关,并且二者的高表达是影响服用索拉非尼患者总生存期的危险因素。