立体定向大鼠脑内SHG-44人脑胶质瘤模型的建立

目的 :探讨建立大鼠 SHG- 4 4脑胶质瘤模型的方法。方法 :选用雄性 Wistar大鼠 ,接种前连续 3d用地塞米松 1 mg/ 1 0 0 g体重灌胃 ;在立体定向条件下选取大鼠脑右侧尾状核区为靶点 ,接种 2× 1 0 5个处于对数生长期的 SHG- 4 4细胞 ,接种后观察大鼠生长状态 ,分别于第 1、 2周进行核磁共振 (MRI)检查。在实验第 2周时解剖标本 ,行组织病理和 GFAP免疫组化检查。结果 :接种 1周后核磁共振检查 ,脑内形成实体瘤 ;HE染色组织病理证实是胶质瘤 ,GFAP免疫组化阳性 ;成瘤率约 6 0 %。结论 :用预先免疫抑制的方法 。

人脑胶质瘤细胞SHG-44照射后COX-2表达与放射敏感性的关系

目的:探讨人脑胶质瘤细胞SHG-44照射存活后代细胞对放射敏感性的变化,以及环氧合酶-2(COX-2)的表达情况,为临床使用COX-2抑制剂提供理论依据。方法:采用克隆形成率研究SHG-44及SHG-44照射存活后代细胞的放射敏感性;并分别用RT-PCR方法及免疫组化的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达情况。结果:与SHG-44细胞相比,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性下降,COX-2 mRNA及蛋白表达均升高。COX-2表达水平与SHG-44照射后代细胞放射敏感性呈负相关。结论:辐射诱导了SHG-44细胞COX-2表达的升高,使SHG-44照射后代细胞对放射敏感性下降,COX-2表达的升高可能是导致其辐射耐受的原因之一。

吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进作用及其机制

目的研究吴茱萸碱对人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进用及其机制。方法将体外培养的胶质瘤SHG-44细胞分为对照组、吴茱萸碱组(根据吴茱萸碱浓度不同分为3个亚组),CCK-8法观察细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤SHG-44细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达。结果吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞增殖有抑制作用。流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测结果表明,随着吴茱萸碱作用浓度的递增,胶质瘤SHG-44细胞凋亡率呈剂量依赖性递增;吴茱萸碱作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达升高。结论吴茱萸碱通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达,抑制胶质瘤SHG-44细胞增殖并促进其凋亡。

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨 PTEN基因对人脑胶质瘤 SHG- 4 4细胞凋亡及凋亡相关基因 bcl- 2表达的影响 ,阐明 PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制 .方法 PTEN基因体外转染 SHG- 4 4细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况 ;采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况 ;以免疫荧光法检测 bcl- 2基因的表达 .结果 PTEN基因转染的 SHG- 4 4细胞有 PTEN蛋白的表达 .透射电镜下可见转染 PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪显示细胞周期从 G1 期到 S期发生抑制 ,并且在 G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (15 .9% ) ;细胞核 DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl-2的表达也显著下调 .结论 PTEN基因可诱导 SHG- 4 4细胞凋亡 ,并下调 bcl- 2蛋白的表达 ,这可能是

不同浓度五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的影响

脑肿瘤发病率目前在全球范围内呈上升趋势,脑肿瘤中以胶质瘤最为常见,恶性胶质瘤是肿瘤患者的第4位死亡原因,具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低＂三高一低＂的特点。研究表明,五味子具有保肝、抗肿瘤、抗氧化与抗衰老等作用,但目前对于五味子的研究都主要集中在保肝作用方面,

人脑胶质瘤细胞株SHG-44放射敏感性的测定方法探讨

目的探讨MTT法、细胞计数Kit8(CCK8)法在进行人脑胶质瘤细胞株SHG44细胞放射敏感性测定时能否替代集落形成试验法。方法运用3种方法分别在0、1、2、3、4、6、8、10Gy8个不同剂量点照射后检测其存活分数,采用统计学检查分析3种方法所得存活分数的相关性。结果在一定照射剂量内(照射剂量≤3Gy时),MTT法、CCK8法与克隆形成法相关性较好,而超出该剂量范围时的相关性差。经直线回归分析,3种方法均不存在高度线性相关。CCK8和MTT法相比无更好的相关性。结论集落形成法仍然是测定放射敏感性的“金标准”,MTT法等其他方法可以提供参考,但无法替代集落形成法。

人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

目的 比较人恶性胶质瘤细胞系CHG 5和SHG 44的细胞骨架系统成分 ,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法 利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布 ,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果 除微管和微丝均被染色外 ,所有细胞均表达Vimentin(波形蛋白 ) ,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似 ,但两种细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG 44细胞中表达较强 ,而GFAP在CHG 5细胞中表达较强。丙酮、75 %酒精和4%多聚甲醛对微管的固定效果较好 ;用醛类固定后中间丝 (尤其是Vimentin)染色极弱。结论 CHG 5分化程度较SHG 44高 。

九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡及其机制研究

目的研究九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制。方法用四甲基偶氨唑蓝(MTT)法检测不同剂量九节龙皂苷于不同时间(6、12、24、72h)对人胶质瘤SHG-44细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Western-blot检测caspase-3和Bcl-2在SHG-44细胞中的表达情况。结果流式细胞仪检测显示,随着九节龙皂苷浓度的增大和时间延长,SHG-44细胞的凋亡率明显上升,Western-blot结果提示九节龙皂苷下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白caspase-3,九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长与增殖。结论九节龙皂苷引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用,通过调控caspase-3和Bcl-2诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡。

芳香化酶在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的表达及调控

目的 研究芳香化酶细胞色素P45 0 (AROM)及雌激素受体 (ER α)在胶质母细胞瘤细胞系SHG 4 4细胞中的基因表达。 方法 细胞培养、免疫细胞化学染色、原位杂交染色及RT PCR技术。 结果 在SHG 4 4细胞中分别检测到AROM及ER α的表达 ,进一步发现SHG 4 4细胞中AROM的表达是由多个组织特异性启动子驱动基因的转录。 结论 可能为中枢神经系统肿瘤发生的激素调节提供新的资料。

全反式维甲酸对胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的影响(英文)

背景与目的:胶质瘤有恶性进展的趋势,而诱导分化治疗可诱导高级别肿瘤的分化,使肿瘤恶性程度降低甚或转为正常。本研究旨在检测全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)处理后胶质瘤SHG-44细胞的基因表达谱改变,为进一步研究胶质瘤的基因治疗奠定基础。方法:以10μmol/LATRA处理SHG-44细胞后,提取总RNA进行反转录聚合酶链反应,并以荧光染料Cy3和Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测ATRA诱导前后SHG-44细胞的基因表达谱,获得差异表达基因;随机选择数个差异基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列的结果。结果:应用cDNA微阵列检测发现ATRA处理前后的SHG-44细胞之间存在42个差异表达基因,其中表达上调28个、表达下调14个。这42个差异表达基因按功能分为:凋亡类3个、细胞迁移和转移类3个、细胞周期与生长调节类2个、细胞骨架类2个、分化类1个、细胞代谢类5个、癌基因1个、氧化磷酸化类1个、受体与信号传导类2个、核蛋白体类3个、泛素-蛋白酶系统类2个、生长因子与细胞因子类1个及其他类相关基因16个。结论:ATRA可引起胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的改变,上述差异表达基因可能不仅介导药物诱导胶质瘤分化的机制,而且调节胶质瘤的演进。

黄芩素对星形细胞瘤SHG-44细胞增殖、侵袭迁移的影响

目的:观察黄芩素干预人星形细胞瘤SHG-44细胞株后,肿瘤细胞形态、增殖、凋亡、细胞周期以及运动侵袭能力的变化。方法:以体外培养的人星形细胞瘤SHG-44细胞为研究对象,用黄芩素干预后,显微镜观察细胞形态变化,MTT法观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,侵袭小室实验观察细胞侵袭力改变。结果:黄芩素对SHG-44细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强,有明显的时间和剂量依赖性;随黄芩素浓度增加,凋亡率增高,差异有统计学意义(P<0.05);黄芩素将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,与对照组比较S期细胞减少近18%,差异有统计学意义(P<0.05);侵袭小室实验表明随着黄芩素干预浓度增加,SHG-44细胞48h后穿过人工基底膜的细胞数量明显更少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芩素能显著抑制SHG-44细胞的增殖、侵袭及迁移,提示黄芩素对星形细胞瘤治疗具有潜在应用价值。

miRNA-34a对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在人脑胶质瘤组织中的表达以及其对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响。方法:20例胶质瘤组织标本均取自于青岛医学院附属医院神经外科(2007年01月至2010年12月),作为对照的正常脑组织取自5位重症脑外伤需行减压手术的患者。Real-time PCR检测胶质瘤组织中miR-34a的表达。体外转染miR-34a mimics至SHG-44细胞中,MTT实验、流式细胞术检测SHG-44细胞的增殖、细胞周期及凋亡。结果:miR-34a在人脑胶质瘤组织中的表达量明显低于正常脑组织,其在Ⅲ、Ⅳ期胶质瘤组织中表达量明显低于Ⅰ、Ⅱ期胶质瘤组织。miR-34amimics体外转染组与空白组相比,其细胞增殖抑制率明显提高[(37.24±5.72)%vs(4.19±0.63)%,P<0.01];miR-34amimics转染组SHG-44细胞G1期比例明显高于空白对照组[(61.78±2.01)%vs(50.91±1.19)%,P<0.05];且miR-34a转染组细胞凋亡率与空白组细胞相比显著升高[(15.28±3.65)%,vs(2.07±0.84)%,P<0.01]。结论:miR-34a在人脑胶质瘤组织中低表达,miR-34a可抑制SHG-44细胞的增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。

脑胶质瘤细胞SHG-44的热、放射敏感性及Fas/FasL表达

观测加热联合放射对SHG-44细胞的影响及相关基因Fas/FasL的表达。采用细胞集落法及流或细胞术观察加热对脑胶质瘤细胞SHG-44放射后集落形成的影响和凋亡的变化,并用RT-PCR法检测Fas/FasL表达。结果表明,放射+42℃加热(加热时间40min)较单纯放射(2Gy)的细胞集落明显减少,热增强比(TER)为1.95;空白对照组、单纯放射组、放射+加热组凋亡比率分别为:20.2、29.3、59.1;Fas在3个实验组中均表达,但FasL仅在单纯放射组、放射+加热组中表达。热能明显增加脑胶质瘤细胞SHG-44的放射敏感性,也表明凋亡与Fas/FasL有关。

他莫昔芬对SHG-44人胶质瘤细胞增殖的抑制作用研究

目的:探讨他莫昔芬对人胶质瘤细胞SHG-44生长的作用及其机制。方法:SHG-44细胞PKC和雌激素受体(ER)的表达用免疫组化,细胞活性分析用四唑盐比色试验,细胞增殖和凋亡通过流氏细胞仪检测,氯通通电流的记录应用全细胞膜片钳技术。结果:细胞PKC表达阳性,ER表达阴性,加入他莫昔芬后,SHG-44细胞变老、脱落,细胞总数减少,G2/M期细胞增多,凋亡细胞比例增加,氯离子通道电流受到抑制。结论:他莫昔芬对人胶质瘤细胞SHG-44有明显的抑制作用,其机制可能是通过对PKC及氯通道的抑制。

pEgr-hPTEN体外稳定转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期及增殖的影响

目的 探讨外源野生型PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 4 4细胞周期及增殖的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法 脂质体包裹重组质粒pEgr hPTEN体外转染内源性PTEN基因突变的SHG 4 4胶质瘤细胞 ;G4 18筛选稳定表达细胞株并扩增培养 ;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度 ;流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果 经 10到 2 0dG4 18筛选得到稳定表达细胞株 ;重组质粒pEgr hPTEN稳定转染可明显抑制SHG 4 4细胞的体外增殖 ,细胞周期明显改变 ,细胞从G1期到S期发生阻滞。结论 提示转染外源野生型PTEN基因可使SHG 4 4细胞周期阻滞于G1期 ,并可抑制肿瘤细胞增殖。

榄香烯诱导SHG-44细胞凋亡和对细胞周期各时相的影响

目的:观察人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞在榄香烯诱导下形态的变化。方法:采用用流式细胞仪检测人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞在榄香烯诱导下细胞凋亡和细胞周期的改变。结果:榄香烯可以抑制体外培养的SHG-44细胞的生长,并且不同浓度的榄香烯对SHG-44细胞的抑制作用程度是不相同的,随着榄香烯浓度的增加,SHG-44细胞的凋亡率升高,呈现剂量依赖性。结论:榄香烯对SHG-44细胞有非常明显的增殖抑制作用,可以加速SHG-44细胞的凋亡,具有抗肿瘤活性。

热、放射诱导的SHG-44细胞凋亡与Fas/FasL、Caspase-3表达关系

目的 了解热疗联合放射对SHG 4 4细胞凋亡的影响及凋亡相关基因Fas/FasL和Caspase 3的变化。 方法 采用流式细胞仪 (FCM )检测对照组、单纯放射 (2Gy)组、放射 (2Gy) +42℃加热 (加热时间 4 0分钟 )组细胞凋亡的改变 ,并用RT PCR法检测Fas/FasL和Caspase 3的表达。结果 空白对照组、单纯放射组、放射 +热疗组凋亡比率分别为 2 0 2 %、2 9 3%和 5 9 1 %;Fas在三个实验组中均表达 ,但FasL和Caspase 3仅在单纯放射组、放射 +热疗组中表达。 结论 凋亡是热杀灭脑胶质瘤细胞SHG 4 4的主要方式 ,凋亡与Fas/FasL、Caspase 3有关。

Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤动物模型建立

目的：建立Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤模型,为胶质瘤药物的药效学研究提供实验基础。方法：采用立体定向技术,将体外培养的SHG-44胶质瘤细胞浓缩悬液,5×10^6/10μL接种于Wistar大鼠的右侧尾状核区,种植后连续观察大鼠的生存状态,并于7d行MRI扫描,将未成瘤的大鼠去除,分别于7d、14d、21d、自然死亡几个区间观察大鼠的生存状态,21d处死和自然死亡的大鼠,取脑制作病理切片,HE染色,光镜下观察。结果：1周内均较活泼,全部正常,术后1~2周表现为表现为精神萎靡,反应迟钝,食欲不振,活动减少,体重下降,步态不稳,2周后上述症状加重,逐渐有死亡的大鼠。HE染色可明显观察到大鼠脑胶质瘤的形成。结论：建立的Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤动物模型可靠稳定,其肿瘤生长特性及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤研究的理想模型。

稳定、高效表达人MCHR2的SHG-44细胞系的建立

目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)真核表达载体pcDNA3.1(+)MCHR2,转染SHG-44细胞,建立稳定、高效表达人MCHR2的SHG-44细胞系。方法:PCR法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段。用基因重组方法将其克隆到pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)MCHR2,并用LipofectamineTM转染到SHG-44细胞,通过G418筛选,建立稳定表达MCHR2的SHG-44细胞系,用RT-PCR、Western印迹及免疫荧光法检测MCHR2的表达。结果:扩增出MCHR2的全长cDNA;成功构建pcDNA3.1(+)MCHR2;RT-PCR、Western印迹及免疫荧光法检测到MCHR2的表达,提示成功建立了稳定、高表达MCHR2的SHG-44细胞株。结论:MCHR2-SHG-44细胞株的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定了良好的实验基础。

β-1,4-半乳糖基转移酶V对胶质细胞瘤细胞SHG-44粘附的影响

目的 :研究 β 1,4 半乳糖基转移酶V(β 1,4 GalTV)对星形胶质瘤细胞株粘附能力的影响及其与细胞恶性行为的关系。方法 :将转染正义、反义 β 1,4 GalTV和空载体的SHG 4 4细胞株接种于包被有纤连蛋白 (FN)或层连蛋白 (LN)的板上 ,观察细胞粘附力的变化。采用WesternBlot的方法检测整合蛋白 β1表达变化及局部粘着斑激酶 (FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平。结果 :在FN和LN包被的板上 ,与转空载体的SHG 4 4细胞株相比 ,转正义 β 1,4 GalTV比转反义 β 1,4 GalTV的细胞在纤连蛋白和层连蛋白上的粘附能力增高 ,β1蛋白表达水平升高 ,FAK及其酪氨酸磷酸化水平增强。结论 :β 1,4 GalTV对SHG 4 4细胞的粘附能力确有影响 ,提示 β 1,4