^(125)IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG44的杀伤作用

为评价12 5IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG4 4的杀伤作用 ,把12 5IUdR加入到SHG4 4细胞的培养基中 ,孵育后测量细胞摄取12 5IUdR的放射性活度 ;采用克隆形成法测定12 5IUdR对SHG4 4细胞生长抑制的效果。结果表明 ,培养基中12 5IUdR浓度增加时 ,SHG4 4细胞对12 5IUdR的摄取量也相应增加 (相关系数r =0 .9917)。SHG4 4细胞摄取12 5IUdR后生长受到明显抑制 ,细胞存活分数与培养基中12 5IUdR浓度呈直线负相关 (r =- 0 .9736 ) ,其半数致死剂量LD50 为 (8.7± 0 .12 )kBq/mL ,12 5IUdR组的SHG4 4细胞存活分数明显低于Na12 5I组 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,12 5IUdR能够掺入到SHG4 4细胞中 ,12 5IUdR对SHG4 4细胞有明显的杀伤作用 ,说明12 5IUdR可望成为治疗脑胶质瘤的潜在的一种放射性药物。

冬凌草甲素诱导胶质瘤SHG44细胞凋亡及其分子机制的研究

目的研究冬凌草甲素诱导胶质瘤SHG44细胞凋亡及其分子机制。方法采用CCK-8比色法绘制生长曲线,冬凌草甲素分别以0、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L观察对胶质瘤SHG44细胞生长活性的影响;Hoehst33258和TUNEL染色法观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;通过Western blotting分析凋亡相关蛋白Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax和Bcl-2在胶质瘤SHG44细胞中蛋白的表达情况。结果冬凌草甲素作用胶质瘤SHG44细胞24 h和48 h后,细胞的增殖受到明显抑制,且24 h和48 h细胞半抑制率(IC50)的浓度分别是7.865和4.74μmol/L;Hoechst33258和TUNEL染色结果发现形态发生明显改变,出现了典型的细胞凋亡变化;Western blotting检测结果显示冬凌草甲素诱导后,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,并激活了凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达。结论冬凌草甲素对胶质瘤SHG44细胞具有抑制增殖及诱导凋亡的作用,同时调控凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。

异甘草素联合替莫唑胺对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖的影响

目的 探讨异甘草素联合替莫唑胺对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖的影响。方法 采用含无血清达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基（DMEM/F12）（含表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、B27）的悬浮细胞培养板培养、纯化胶质瘤干细胞，并通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定；实验分为对照组／[含二甲基亚砜（DMSO）／]、异甘草素（5~160 μmol/L）组、替莫唑胺（12.5～200 μmol/L）组、异甘草素＋替莫唑胺组（160 μmol/L＋12.5~200 μmol/L），通过细胞增殖毒性检测（CCK-8）法、流式细胞术、免疫荧光染色法分别检测细胞抑制率、细胞周期及干细胞表面相关分化蛋白表达情况。结果异甘草素随着浓度增加细胞抑制作用越强，且160 μmol/L时抑制率达32%，替莫唑胺随着浓度增加抑制作用越强，且200 μmol/L时抑制率达40%；异甘草素联合替莫唑胺组随着浓度增加抑制作用越强，且160 μmol/L＋200 μmol/L时抑制率达72%；随着异甘草素浓度增加G0/G1期细胞比例增加，细胞周期阻滞于G0/G1期；随着异甘草素浓度增加干细胞分化越多，且分化细胞的死亡越多。结论异甘草素能诱导SHG44人脑胶质瘤干细胞向星形胶质细胞和神经元细胞分化，且能抑制增殖，同时增强替莫唑胺化疗敏感性。

异甘草素对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖和分化的影响

目的探讨不同浓度异甘草素对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖和分化的影响及机制。方法实验分为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组,异甘草素(10~160μmol/L)诱导组,氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-1-alanyl]-S-ph,DAPT)(2.0μmol/L)阻断剂组,异甘草素+阻断剂组(10~160μmol/L+2.0μmol/L DAPT),采用CCK-8法、免疫荧光染色、Western blot及Real-time PCR分别检测细胞抑制率、相关分化蛋白及Notch1通路相关基因表达情况。结果异甘草素在12~48 h,随着浓度增加,细胞抑制率减弱(P<0.05),且分化细胞越多,干细胞减少;72 h后随着浓度增加,细胞抑制率增强(P<0.05),分化细胞及干细胞同时减少;隔日加药至第7 d时,经统计分析胶质瘤干细胞球数目减少、直径减小(与对照组比),且P<0.05。异甘草素作用72 h后:与对照组比较,随着异甘草素浓度的增加Nestin蛋白表达量逐渐下调(P<0.05);与对照组比较,10、40、160μmol/L组GFAP蛋白表达水平均上调(P<0.05),且40μmol/L组GFAP蛋白表达量较其他浓度组均较高,(P<0.05);与对照组比较,10、40、160μmol/L组β-TubulinⅢ蛋白表达水平均上调(P<0.05),且10μmol/L组β-TubulinⅢ蛋白表达量较其他浓度组均较高(P<0.05)。Notch1通路阻断剂作用后,与对照组比较,各异甘草素组和阻断剂组Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达均显著下调(P<0.05);与异甘草素组比较,Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达在异甘草素加DAPT组及阻断剂组显著下调(P<0.05);与阻断剂组比较,Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达在异甘草素加DAPT组显著下调(P<0.05)。结论异甘草素能诱导SHG44人脑胶质瘤干细胞向星形胶质细胞和神经元细胞分化,且能抑制其增殖,可能与下调Notch1信号通路中的Notch1、RBP-JK及Hes1有关。

三氧化二砷对人脑胶质瘤SHG44细胞增殖的抑制作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人脑胶质瘤SHG44细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察As2O3对SHG44细胞的增殖抑制率;激光共聚焦显微镜检测As2O3作用于SHG44细胞后细胞内活性氧自由基(ROS)水平变化。结果 As2O3对SHG44细胞增殖具有明显抑制作用,随着As2O3浓度的升高和作用时间的延长,细胞的增殖抑制率升高,12μmol·L-1As2O3对SHG44细胞增殖的抑制率可达63.8%;As2O3可以明显提高SHG44细胞内ROS水平,其ROS水平随As2O3作用浓度的增高明显增高,具有浓度依赖关系。结论 As2O3能明显抑制SHG44细胞的增殖,抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性,其机制与升高细胞内活性氧水平有关。

凋亡抑制基因survivin真核表达载体的构建及其在SHG44细胞中的表达

目的:克隆细胞凋亡抑制蛋白基因survivin(SVV)的编码序列,构建含SVV基因的真核细胞表达载体并观察其在人胶质瘤细胞系SHG44中的表达.方法:利用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增SVV基因编码序列,扩增产物双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,成功构建SVV基因真核表达载体pcDNA3.1-SVV.通过脂质体介导用pcDNA3.1-SVV转染SHG44细胞,经G418筛选,RT-PCR、免疫蛋白印迹(Western Blot)和免疫细胞化学方法鉴定SVV的表达.结果:经酶切鉴定和核苷酸序列分析,证实成功构建了SVV基因真核表达载体pcDNA3.1-SVV.蛋白和RNA水平检测表明SVV基因在SHG44细胞中稳定表达.结论:真核表达载体pcD-NA3.1-SVV使SVV基因在SHG44细胞中稳定表达.

人参皂苷Rh2下调Wnt/β-catenin信号通路调控SHG44细胞的增殖和凋亡

目的研究人参皂苷Rh2(GS-Rh2)下调Wnt/β-catenin信号通路调控SHG44细胞的增殖和凋亡。方法体外培养SHG44细胞,以5、10、20、40、80μg/m L的GS-Rh2作用24 h和48 h,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞技术检测细胞凋亡情况,RT-PCR检测细胞Wnt-1,β-catenin m RNA表达的变化,Western blot检测GS-Rh2对SHG44细胞Wnt-1、β-catenin蛋白表达的变化。结果与空白对照组比较,5、10、20、40、80μg/m L GS-Rh2作用24 h和48 h时,SHG44细胞增殖抑制率依次升高(P<0.05),SHG44细胞总凋亡率依次增大(P<0.05);与空白对照组比较,5、10、20、40、80μg/m L GS-Rh2作用24 h和48 h时,SHG44细胞Wnt-1、β-catenin m RNA和蛋白水平依次降低(P<0.05)。结论 GS-Rh2具有一定的抗肿瘤活性,可抑制SHG44细胞增殖、诱导其凋亡,且具有剂量依赖性,其作用机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。

姜黄素对人胶质瘤SHG44细胞侵袭、迁移的影响

目的探讨姜黄素对人胶质瘤SHG44细胞侵袭和迁移的影响。方法胶质瘤SHG44细胞使用含10%胎牛血清DMEM培养基培养,终浓度分别5、10、20、40μmol/L姜黄素作用24、48、72 h;对照组加入等量二甲基亚砜。CCK-8比色法检测细胞增殖活力;细胞划痕实验检测细胞迁移距离及迁移率;Transwell实验细胞侵袭能力;免疫印迹法检测胶质瘤SHG44细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、9表达。结果姜黄素对SHG44细胞生长具有显著抑制,且呈时间与浓度依赖性(P<0.05);最佳作用浓度在10~20μmol/L。与对照组相比,姜黄素作用后,SHG44细胞迁移距离、迁移率、侵袭能力明显降低(P<0.05),SHG44细胞MMP2、MMP9蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论姜黄素可抑制胶质瘤SHG44细胞的增殖,进而抑制细胞的迁移及侵袭能力,且呈时间及浓度依耐性,其机制可能与下调MMP2和MMP9蛋白表达有关。

RNasin对脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的：探讨核糖核酸酶抑制因子（ＲＮａｓｉｎ）对脑胶质瘤生长的抑制作用及可能机理。方法：从人胎盘组织中提取制备ＲＮａｓｉｎ，体内外观察其对人ＳＨＧ４４和大鼠Ｃ６胶质瘤细胞生长的抑制作用。结果：（１）体外不同浓度的ＲＮａｓｉｎ对培养的Ｃ６及ＳＨＧ４４胶质瘤细胞存活率无明显影响，与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；（２）加入ＲＮａｓｉｎ后裸鼠体内Ｃ６胶质瘤平均重量为１．７２ ｇ±０．１８４ ｇ，平均大小（直径）为１２．８４ ｍｍ±１.１５ ｍｍ；ＳＨＧ４４胶质瘤平均重量为１．０１２ ｇ±０．１７４ ｇ，平均大小为１１．２０ ｍｍ±１．２１ｍｍ，均与对照组有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ＲＮａｓｉｎ体外对培养的胶质瘤细胞生长无抑制作用，而体内对胶质瘤瘤体的生长有明显抑制作用。

对乙酰氨基酚联合外照射对脑胶质瘤细胞照射后代增殖的影响(英文)

Objective:To study the effects of acetaminophen(ACE) combined with radiation on the progeny of the human glioma cell line SHG-44,and to investigate if ACE may be an useful therapeutic radiosensitivity agent in the treatment of recurrent human glioma.Methods:A randomized,controlled experiment,was performed at the Department of Radiology Laboratory,the First Hospital Affiliated to Soochow University,between September 2004 and January 2006.Brain glioma SHG-44 cells were divided into three groups:SHG-44,SHG-44-10,and SHG-44-10 + ACE cells groups.The SHG-44-10 cells group was irradiated with dose of 10 Gy by a linear accelerator(6 MVX).It was passaged for 15 generations and cultured in RPMI-1640 culture media.Then SHG-44-10 + ACE cells group was treated with ACE.Measures:Community re-double time,mean lethal dose(D0),extrapolation number(N),fraction surviving fraction irradiated by 2 Gy dose(SF2),quasi-threshold dose(Dq),and cell cycle.Results:The SF2 of the SHG-44,SHG-44-10,and SHG-44-10 + ACE cells groups were 70.8%,80.6% and 45.2%,respectively,with significance(P = 0.040).The SHG-44-10 and SHG-44-10 + ACE cells groups were irradiated with 8 Gy.After 12 hours,the G2/M ratio of the SHG-44-10 and SHG-44-10 + ACE cells groups were indicating significantly higher ratio compared to pre-irradiated groups(P < 0.01).After 24 hours,the G2/M ratio of the SHG-44-10 cells group decreased rapidly,while the ratio of the SHG-44-10 + ACE cells group still maintained in high level.Conclusion:In the present study,Subtoxic dose of ACE increased the radiosensitivity of the progeny of irradiated human glioma cell.ACE may be an useful radiosensitivity agent in the treatment of recrudescent human malignant glioma.

人脑胶质瘤新生血管的细胞来源与血液流通功能的初步评价

目的探讨胶质瘤中部分新生血管是否源于胶质瘤干细胞转分化，并初步评价其血液运输功能。方法将SHG44人脑胶质瘤细胞系接种于30只NC裸小鼠皮下和20只NC裸小鼠脑内尾状核，将SU-2细胞接种于12只表达绿色荧光蛋白的NC／C57BL／6J-绿色荧光蛋白裸小鼠的尾状核内。取移植瘤组织，石蜡切片后，分别进行CD34-PAS双染及CD31、CD34、CD133、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、人类白细胞抗原（Ki67）、HLA免疫组化染色，并结合HLA免疫荧光共聚焦显微成像对移植瘤血管进行分类，对肿瘤血管起源细胞进行鉴定。每组取3只荷瘤鼠，以活性炭颗粒混悬液行心脏灌注，对移植瘤切片进行相应的免疫组化染色，并在光镜下观察炭颗粒在肿瘤血管中的分布。结果裸小鼠移植瘤中，同时存在CD34一PAS双阳性的内皮细胞依赖型血管、CD34-PAS^＋的血管生成拟态和由肿瘤细胞与CD34^＋细胞嵌合而成的马赛克血管，炭颗粒随机分布在这些血管腔内。在人脑胶质瘤干细胞移植瘤中，CD31^＋细胞依附于血管壁腔侧面；CD34^＋细胞亦沿血管分布，但在形态上介于肿瘤细胞与内皮细胞之间；在血管壁上可见HLA^＋和人Ki67^＋细胞，提示构成血管壁的这些细胞来自人源细胞。HLA免疫荧光共聚焦显微成像可见，移植瘤中的血管以表达HLA（红色）的人源肿瘤细胞为主，兼有表达GFP（绿色）的宿主细胞，或人鼠融合细胞。结论在移植性人脑胶质瘤组织中存在具有血液运输功能的内皮细胞依赖型血管、血管生成拟态和马赛克血管3类血管，人脑胶质瘤干祖细胞有通过分化和转分化机制自主形成后两类肿瘤血管的潜能。