柚皮素激活SHH-GLI1信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的探究柚皮素(NAR)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导神经元损伤的改善作用及机制。方法将大鼠皮层神经元分为正常组、OGD/R组、NAR组和NAR+环巴胺组,给予相应处理。CCK-8法测定神经元活性;试剂盒测定神经元活性氧(ROS)、8-羟脱氧鸟苷(OHdG)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色观察神经元凋亡;Western印迹检测声波刺猬(SHH)-胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)1通路及脑源性神经营养因子(BDNF)、c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)水平;免疫荧光染色观察GLI1的核移位。结果CCK-8法分析显示,40 mg/L NAR为最佳作用浓度。相较于正常组,OGD/R组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量、SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于OGD/R组,NAR组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于NAR组,NAR+环巴胺组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显增加(P<0.05),BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1蛋白无明显变化(P>0.05)。结论NAR可以减轻OGD/R诱导的神经元氧化损伤,其作用机制与激活SHH-GLI1通路有关。

鳜Shh基因分子特征和时空表达规律及其对肌肉生长的调控

研究从鳜(Siniperca chuatsi)基因组中获得Shh(Sonic hedgehog)基因序列,对该基因编码的蛋白质和同源进化特征进行了分析。鳜Shh基因的开放阅读框(ORF)为1242 bp,编码413个氨基酸,分子量为46.01 kD,等电点(pI)为6.57,脂溶系数为82.83,亲水性平均系数为−0.292,拥有一个跨膜区,被推定为亲水性膜结合蛋白。Shh蛋白具有两个结构域,即Hh-N和Hh-C结构域。鳜Shh蛋白与自身所属的鲈形目鱼类Shh蛋白同源性较高。通过实时荧光定量PCR技术检测了鳜Shh基因的时空表达水平。结果显示:Shh的表达量在神经胚期表达显著上调,并在胚胎发育中后阶段保持较高水平。Shh在鳜不同组织中存在一定的表达差异,在脑、肠道中表达量较高,而在红肌、白肌等组织中表达量相对较低。通过环巴胺(Cyclopamine)处理鳜胚胎来抑制Shh信号通路的实验表明,Shh信号通路被抑制后,Pax3、Pax7、Myomaker、生肌调节因子及肌球蛋白重、轻链等基因的表达均显著降低,推测Shh参与调控鳜肌细胞的早期分化和发育过程。研究将有助于从分子水平了解Shh信号调控鱼类发育的分子机理,为鱼类发育生物学以及健康养殖提供参考依据。

百事乐胶囊调控SHH/Gli1信号通路对抑郁模型大鼠海马神经再生的影响

目的 观察百事乐胶囊调控SHH/Gli1信号通路对抑郁模型大鼠海马神经再生的影响及作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组(5.4 mg/kg)和百事乐胶囊组(2.88 g/kg),每组8只。采用慢性不可预见性温和应激加单笼饲养法建立抑郁大鼠模型,于造模同时给药,连续21 d。糖水偏好实验、旷场实验评价大鼠抑郁样行为,ELISA检测大鼠血清和海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)含量,免疫荧光染色观察海马齿状回5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、BrdU/双皮质素(DCX)、BrdU/神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数,免疫荧光、Western blot检测大鼠海马组织SHH、Gli1及跨膜转导蛋白Smo、Ptch荧光强度和蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠糖水偏好度明显降低,水平和垂直运动次数明显减少(P<0.01),血清、海马组织BDNF含量明显下降(P<0.05),海马齿状回BrdU、BrdU/DCX、BrdU/NeuN阳性细胞数明显减少(P<0.01),海马组织SHH、Gli1、Smo、Ptch荧光强度及蛋白表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,氟西汀组和百事乐胶囊组大鼠糖水偏好度明显升高,水平和垂直活动次数显著增加(P<0.05,P<0.01),血清、海马组织BDNF含量明显上升(P<0.05,P<0.01),海马齿状回BrdU、BrdU/DCX、BrdU/NeuN阳性细胞数明显增加(P<0.01,P<0.05),海马组织SHH、Gli1、Smo、Ptch荧光强度和蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论 百事乐胶囊可通过调控SHH/Gli1信号通路促进抑郁模型大鼠海马神经再生,进而发挥抗抑郁作用。

吴茱萸碱调节Shh/Gli1信号通路对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞利妥昔单抗耐药性的影响

目的:研究吴茱萸碱调节超音刺猬蛋白(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞利妥昔单抗(RIT)耐药性的影响。方法:体外培养OCI-LY10细胞采用梯度加药法构建其RIT耐药细胞系OCI-LY10/RIT,均以0、1、5、10、20、30μmoL/L的吴茱萸碱处理,采用CCK-8法测定各组OCI-LY10及OCI-LY10/RIT细胞活力并筛选出吴茱萸碱最佳作用浓度。将OCI-LY10/RIT细胞随机分为对照组、RIT组、RIT+吴茱萸碱组、RIT+空载组、RIT+吴茱萸碱+Shh过表达组,分组处理后以实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测各组细胞Shh/Gli1通路相关mRNA和蛋白表达;以CCK-8法和Edu染色检测各组细胞增殖;以流式细胞实验检测各组细胞凋亡;以免疫印迹实验检测各组细胞凋亡蛋白(Cleaved Caspase-3、Bax)与耐药蛋白{多药耐药相关蛋白5(MRP5)、P-糖蛋白(P-gp)}表达。体外培养OCI-LY10/RIT细胞并随机分为对照组、吴茱萸碱组、空载组、吴茱萸碱+Shh过表达组,分组处理后以CCK-8法检测0、16、32、64、128、256、384μg/mL的RIT处理下各组OCI-LY10/RIT细胞存活率,算出其耐药指数。结果:与对照组相比,RIT+吴茱萸碱组细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3与Bax蛋白表达升高(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA与蛋白表达、存活率、Edu阳性率、MRP5与P-gp蛋白表达降低(P<0.05);RIT组、RIT+空载组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与RIT组相比,RIT+吴茱萸碱组细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3与Bax蛋白表达升高(P<0.05),Shh、Gli1 mR-NA与蛋白表达、存活率、Edu阳性率、MRP5与P-gp表达降低(P<0.05);RIT+空载组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与RIT+吴茱萸碱组相比,RIT+吴茱萸碱+Shh过表达组细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3与Bax蛋白表达降低(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA与蛋白表达、存活率、Edu阳性率、MRP5与P-gp表达升高(P<0.05)。与对照组相比,吴茱萸碱组细胞耐药指数降低(P<0.05),空载组细胞耐药指数无明显变化(P>0.05);与吴茱萸碱组相比,吴茱萸碱+Shh过表达组细胞耐药指数升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可下调Shh/Gli1通路相关蛋白表达,从而减轻DLBCL细胞的RIT耐药性,诱导RIT处理下的RIT耐药DLBCL细胞凋亡并抑制其增殖。

肉桂醛调节Shh/Gli1信号通路对幽门螺旋杆菌胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只。通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型。建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周。HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态。将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组。除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤。

基于Shh途径分析山药提取物对老龄慢性萎缩性胃炎大鼠的干预作用

目的基于音猬因子(Shh)途径分析山药提取物对老龄慢性萎缩性胃炎大鼠的干预作用。方法选取12月龄的雄性SD老龄大鼠50只,随机分为空白对照组(A组)、慢性萎缩性胃炎模型组(B组)、低剂量山药提取物组(C组)、中剂量山药提取物组(D组)、高剂量山药提取物组(E组),每组10只。第2周至12周对B、C、D组进行造模,造模成功14 w时,给予B、C、D组山药提取物灌胃治疗,各组灌胃浓度依次为0.25、0.50、0.75 g/ml,剂量为10 ml/kg,连续灌胃5 w。A组不做处理,B组灌胃等体积生理盐水。第20周,收集、分析各组一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、胃分泌功能及微循环胃血流量、Shh通路蛋白表达。结果与A组相比,B组胃液分泌量、胃液酸度、胃蛋白酶活性明显降低(P<0.05);与B组相比,C、D、E组以上指标明显升高,且E组升高水平最优(P<0.05)。与A组相比,B组胃体部与幽门部血流量、胃血流量明显减少(P<0.05);与B组相比,C、D、E组以上指标明显增加,且E组增加水平最优(P<0.05);与A组相比,B组NO、MDA表达明显升高,SOD、GSH-Px表达明显降低(P<0.05);与B组相比,C、D、E组NO、MDA表达明显降低,SOD、GSH-Px表达明显升高(P<0.05)。与A组相比,B组Shh、蛋白质调控基因(Ptch)1、平滑受体蛋白(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白(Gli)1蛋白表达明显降低,Gli2、Gli3蛋白表达明显升高(P<0.05);与B组相比,C、D、E组Shh、Ptch1、Smo、Gli1蛋白表达明显升高,Gli2、Gli3蛋白表达明显降低,且E组变化幅度最优(P<0.05)。结论山药提取物可通过重新激活抑制状态Shh信号通路,改善老龄慢性萎缩性大鼠的胃黏膜病理改变,改善大鼠胃微循环血流量及氧化应激反应,同时调节胃液、胃酸、胃蛋白的分泌,抑制病情进展。

左归降糖解郁方促进糖尿病并发抑郁症大鼠的海马齿状回神经干细胞的自我更新并激活Shh信号通路

目的研究左归降糖解郁方调节糖尿病并发抑郁症大鼠海马Shh信号通路,改善齿状回神经干细胞自我更新的机制。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为5组,16只/组:模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)组、左归降糖解郁方高、中、低剂量组;另设健康SD大鼠为正常组。其中,左归降糖解郁方高、中、低剂量组和阳性药组分别给予相应药物,对照组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水。给药结束后,采用血糖试纸检测大鼠血糖,采用强迫游泳实验和水迷宫实验检测大鼠抑郁样行为和学习记忆功能,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清瘦素水平。采用双重免疫荧光法检测海马齿状回Nestin和Brdu蛋白表达;采用Western blot法检测海马神经干细胞自我更新标(P<0.01)志物及Shh信号蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖和瘦素水平显著升高(P<0.01),强迫游泳实验的不动时间显著延长(P<0.01),水迷宫实验中动物登台时间明显延长,寻台时间明显缩短,穿台次数明显减少(P<0.01);海马齿状回Nestin和Brdu表达显著减少(P<0.01),Cyclin D1、SOX2、Shh、Ptch1、Smo蛋白表达显著降低(P<0.01),Gli-3表达显著升高(P<0.01),细胞核内Gli-1蛋白表达显著减少(P<0.01)。与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量可显著降低模型大鼠的血糖(P<0.01)和瘦素水平(P<0.05),缩短动物在强迫游泳实验中的不动时间(P<0.01)和在水迷宫实验中的登台时间(P<0.05),延长寻台时间并增加穿台次数(P<0.01)。同时,该方高剂量可显著增加齿状回Nestin和Brdu表达(P<0.01),增加海马Cyclin D1、SOX2、Shh、Ptch1、Smo蛋白表达(P<0.01),降低Gli-3表达(P<0.05),并增加Gli-1蛋白的核表达(P<0.01)。结论左归降糖解郁方可有效改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马齿状回神经干细胞的自我更新能力,并激活干细胞Shh信号通路。

SHH与胃癌、EBV(+)胃癌患者临床病理特征和预后的相关性

目的探讨SHH蛋白表达在胃癌、EB病毒阳性[EBV(+)]胃癌及癌旁正常胃组织中表达及其与临床病理参数和预后的的相关性。方法免疫组化法检测SHH蛋白表达水平,分析其在胃癌、EB病毒阳性胃癌及癌旁正常组织芯片中的表达;原位杂交法检测胃癌组织芯片中EBV编码的小RNA(EBERs)。结果与正常胃组织相比胃癌组织中表达明显升高SHH蛋白(χ^(2)=20.012,P=0.000),且其表达与年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度、Lauren分型、血管侵犯、TNM分期均无关(P>0.05),与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05);Spearman等级相关分析显示:SHH蛋白表达与EBV(+)胃癌呈负相关(r=-0.129;P=0.012);Kaplan-Meier分析显示:SHH蛋白表达与EBV(+)、EBV(-)胃癌患者生存时间均无关。结论SHH蛋白在胃癌中表达上调且与EB病毒阳性胃癌相关,提示使用特定抑制剂阻断SHH通路可能是很有潜力的治疗靶点。

Shh信号通路在儿童急性淋巴细胞白血病中的活化及临床意义研究

目的 探讨Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的表达及意义。方法 采取RT-PCR法检测107例ALL患儿化疗前骨髓细胞Shh、Ptch1、Smo和Gli-1基因的表达情况,结合患儿危险度分级,探讨以上4个基因与疾病危险程度及早期疗效相关性,并以33例骨髓良性改变患儿作为对照组。结果 Shh、Smo和Gli-1基因在ALL初治组中的表达高于水平显著高于对照组(P<0.05),Ptch1在ALL初治组中的表达水平显著低于对照组(P<0.05);Smo和Gli-1基因表达水平与疾病危险程度正相关,且与早期治疗反应负相关;Shh和Ptch1基因表达水平与疾病危险程度及早期治疗反应均无相关性。结论 急性淋巴细胞白血病患儿Shh信号通路存在异常活化,靶向Shh信号通路的治疗有望成为新的方向。

基于绵羊角质形成细胞探究SHH通过Krox20调节IGFBP5的表达影响羊毛弯曲

本研究旨在探究音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)与羊毛弯曲形成的关系及其调控机制。本研究通过培养原代绵羊角质形成细胞,构建过表达和沉默载体,利用细胞转染、免疫共沉淀、实时荧光定量PCR和Western blot等方法探究SHH与羊毛弯曲的关系,分析SHH是否通过早期生长应答基因2(early growth response 2,EGR2/Krox20)调控胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin-like growth factor binding proteins 5,IGFBP5)来影响羊毛弯曲。结果显示,体外成功分离培养绵羊原代角质形成细胞,显微镜下呈“铺路石”样,免疫荧光鉴定结果呈阳性表达,CCK-8结果表明细胞生长曲线呈“S”型,符合细胞增殖趋势;过表达和沉默SHH后,羊毛弯曲相关基因KRT71、β-catenin和TCHH的表达量显著升高和降低;过表达Krox20后,羊毛弯曲相关基因的表达量显著升高;免疫共沉淀试验表明,在绵羊角质形成细胞中SHH可以与Krox20相互作用且正调控Krox20;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,过表达SHH后显著上调IGFBP5的相对表达量,沉默SHH后显著下调IGFBP5的相对表达量;过表达Krox20后IGFBP5的相对表达量显著升高。本研究表明,在绵羊角质形成细胞中SHH通过Krox20调控IGFBP5来影响羊毛弯曲,结果为毛发弯曲性状形成的相关分子调控机制提供了理论依据。

利多卡因通过SHH/GLI信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨利多卡因(Lid)调节SHH/GLI信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法将U87细胞分为U87组、L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组、PM组、H-Lid+PM组。U87组未做任何处理,L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组分别用5、10、15 mmol/L Lid处理U87细胞,PM组用1μmol/L的SHH/GLI信号通路激活剂PM处理U87细胞,H-Lid+PM组用15 mmol/L Lid和1μmol/L的PM共同处理U87细胞。CCK8检测U87细胞增殖;流式细胞术检测U87细胞凋亡;Transwell检测U87细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测SHH/GLI蛋白、凋亡蛋白表达;荷瘤小鼠模型验证Lid对U87细胞移植瘤的影响。结果与U87组相比,L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组的OD值、U87细胞迁移、侵袭数量、Bcl-2、SHH、GLI3蛋白水平、小鼠肿瘤体积依次显著下降(P<0.05),凋亡率、Bax蛋白水平依次显著升高(P<0.05);而PM组OD值、U87细胞迁移、侵袭数量、Bcl-2、SHH、GLI3蛋白水平、小鼠肿瘤体积显著升高(P<0.05),凋亡率、Bax蛋白水平显著下降(P<0.05);PM消除了H-Lid对U87细胞恶性生物学行为的抑制作用。Lid处理后移植瘤小鼠存活数量增加,而PM处理后移植瘤小鼠存活数量减少,H-Lid+PM组与L-Lid组数量相同。结论Lid可能通过下调SHH/GLI信号通路抑制U87细胞增殖,促进细胞凋亡,进而抑制胶质瘤的进展。

龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39与重度牙周炎患者治疗后预后的关系

目的研究龈沟液Shh蛋白、dickkopf相关蛋白1(DKK1)、人类软骨糖蛋白-39(HC-gp39)与前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后的关系。方法选取2019年1月至2022年1月核工业二一五医院收治的120例前牙区重度牙周炎患者作为研究对象。牙周基础治疗90 d后,将患者按照治疗后PD的差异分为预后不良组和预后良好组,比较两组患者龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39水平以及基线资料。通过多因素Logistic回归分析前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39预测前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后的效能。结果预后不良组龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39水平均高于预后良好组(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析发现:有吸烟史、治疗前PD>7.60 mm、治疗前临床附着丧失(CAL)>7.00 mm、Shh蛋白>4.00μg/L、DKK1>9.00μg/L及HC-gp39>60.00 ng/mL均是前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的危险因素(P<0.05)。龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39单项检测及3项联合检测预测前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.755、0.783、0.721、0.845,3项联合检测预测的效能优于单项检测。结论龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39与前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后的预后不良密切相关,可作为临床辅助判断患者预后的生物学指标。

circDUSP16调节miR-126-5p/SHH轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究circDUSP16对结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:qRT-PCR检测circDUSP16、miR-126-5p、SHH表达水平,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测SHH、PCNA、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达,荧光素酶实验检测circDUSP16和miR-126-5p/SHH的靶向关系。结果:沉默circDUSP16组SW480细胞circDUSP16、SHH mRNA表达、OD450值(24 h、48 h、72 h)、Bcl-2和N-cadherin蛋白表达降低,miR-126-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05);下调miR-126-5p减弱了沉默circDUSP16对SW480细胞的增殖、EMT发生的抑制,降低了细胞的凋亡能力;circDUSP16靶向负调控miR-126-5p表达,miR-126-5p靶向负调控SHH表达。结论:沉默circDUSP16可能通过上调miR-126-5p并下调SHH抑制SW480细胞增殖和EMT发生,促进凋亡。

基于Shh/Gli1信号通路探讨肾衰宁颗粒对5/6肾切除肾衰竭模型大鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究肾衰宁颗粒抑制Shh/Gli1信号通路改善5/6肾切除肾衰模型大鼠肾间质纤维化的作用机制。方法:将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、肾衰宁颗粒低、中、高剂量组(0.675、1.35、2.7 g/kg),每组8只。除假手术组外其余各组大鼠均通过5/6肾切除术建立慢性肾衰竭模型。术后,给药组大鼠每日灌胃相应药物,假手术组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,连续12周。检测大鼠血清中Scr、BUN、Alb、TG、TC、AST、ALT水平,以及TGF-β、ColⅠ的含量;HE染色和Masson染色观察大鼠肾脏组织形态和纤维化情况;Western Blot法检测大鼠肾脏组织中Shh、Gli1、α-SMA、ColⅠ、FN蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清中Scr、BUN、TG、TC水平,TGF-β、ColⅠ含量,肾脏组织中Shh、Gli1、α-SMA、ColⅠ、FN蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05),血清中Alb含量明显降低(P<0.05),AST、ALT含量差异无统计学意义(P>0.05);肾脏病理形态学观察显示肾小管扩张,胶原沉积明显,肾间质炎性细胞浸润明显。经肾衰宁颗粒干预后,大鼠血清、肾脏组织中上述指标水平均有不同程度的改善,肾脏组织病理损伤、胶原沉积均有所减轻。结论:肾衰宁颗粒可改善5/6肾切除肾衰模型大鼠的肾间质纤维化,其作用机制可能与抑制Shh/Gli1信号通路有关。

Shh信号通路变化对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的影响

目的:探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)及平滑激动剂(smoothened agonist,SAG)干预下小鼠胚胎腭突间充质细胞Shh信号通路改变后,小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬状态的变化。方法:体外培养胚胎14.5 d的C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞,根据干预方式分为4组:对照组、地塞米松组(DEX组)、地塞米松+SAG组(DEX+SAG组)、单独SAG干预组(SAG组)。通过透射电镜观察各组细胞自噬体或自噬溶酶体的数量,Western blot检测各组Shh、Ptch1、Smo、Gli3A/R、Cyclin D1及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ和P62、Beclin-1的表达情况。结果:电镜结果显示,对照组和DEX组中自噬体/自噬溶酶体的数量无明显差异,而SAG干预后可观察到大量自噬体/自噬溶酶体。Western blot结果显示,与对照组相比,P62、Ptch1、Smo、Gli3A/R、CyclinD1在DEX组中明显降低(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达无明显变化(P>0.05);DEX+SAG组及SAG组中Ptch1、Smo、Gli3A/R、CyclinD1的表达与DEX组相比明显升高(P<0.05),Shh表达无明显差异(P>0.05),Beclin1表达明显升高(P<0.05),P62表达明显降低(P<0.05);与SAG组相比,DEX+SAG组中Smo、Gli3A/R、Ptch1、CyclinD1表达明显降低(P<0.05),Shh表达无明显差异(P>0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1明显升高(P<0.05),P62表达明显降低(P<0.05)。结论:DEX可抑制小鼠胚胎腭突间充质细胞的Shh信号通路,激活Shh信号通路,诱发小鼠胚胎腭突间充质细胞产生自噬且Shh通路抑制后再激活,细胞自噬更加明显。

Shh信号通路对快速老化小鼠肾脏衰老的影响

目的探究Shh信号通路的异常激活对肾脏纤维化的影响。方法用10月龄快速老化(SAMP)8小鼠与同龄抗快速老化(SAMR)1小鼠进行比较,采用苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色方法观察肾小球、肾小管间质病理形态改变和纤维化程度;免疫荧光法检测Shh、平滑蛋白(Smo)、胶质瘤相关癌基因同源物(Gli1)蛋白的表达。结果与SAMR1小鼠相比,SAMP8小鼠肾脏可见肾小球及小管间质纤维化明显,Shh、Smo、Gli1蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论衰老肾脏纤维化的程度可能与Shh信号通路的异常活化密切相关。

LncRNA HOTAIR通过靶向miR-126激活SHH信号通路促进结直肠癌的发生发展

目的:探究miR-126与lncRNA HOTAIR的靶向关系及其对SHH信号通路的调节作用,并研究结直肠癌发生发展的分子机制。方法:收集2018年2月至2019年2月于河北省沧州市人民医院进行手术治疗的患者的正常结直肠、结直肠息肉、不典型增生组织、癌前病变、结直肠癌组织及其癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、免疫组化分析HOTAIR、miR-126及SHH表达情况,starBase数据库、荧光素酶实验、RNA免疫共沉淀及RT-qPCR验证miR-126与HOTAIR、SHH的作用关系,MTT实验、集落形成实验、划痕实验、Transwell实验检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力。结果:结直肠癌组织中的HOTAIR和SHH、Glil、Smo蛋白表达上调,miR-126表达下调(P<0.05)。HOTAIR靶向抑制miR-126表达,miR-126靶向抑制SHH表达。与sh-NC组相比,sh-HOTAIR组SW480、HCT116细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力下降,miR-126 inhibitor组增加(P<0.05);sh-HOTAIR+miR-126 inhibitor组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著高于sh-HOTAIR组,低于miR-126 inhibitor组(P<0.05);miR-126 inhibitor+sh-SHH组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著低于miR-126 inhibitor组(P<0.05)。结论:HOTAIR靶向抑制miR-126表达,从而促进结直肠癌的发生发展,其机制可能与激活SHH信号通路的表达有关。

Shh-BMSCs外泌体调控miR-133a对脂多糖诱导脊髓神经元细胞凋亡的影响

目的探讨音猬因子(Shh)-骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体调控miR-133a对脂多糖(LPS)诱导脊髓神经元细胞凋亡的影响。方法体外培养大鼠脊髓神经元细胞,通过CCK-8实验检测0、100、300、500、700、900μg/mL的LPS对其细胞活力的影响,筛选最佳作用浓度。然后以0、20、40、80、120、160μg/mL的Shh-BMSCs外泌体处理LPS诱导的脊髓神经元细胞,通过同样方法筛选最佳作用浓度。将大鼠脊髓神经元随机分为对照组、模型组、Shh-BMSCs外泌体组、miR-133a inhibitor阴性对照组、miR-133a inhibitor组、Shh-BMSCs外泌体+miR-133a inhibitor组,除对照组外,其余各组以LPS诱导脊髓损伤(SCI)细胞模型,然后分组处理后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测各组细胞轴突长度;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-10释放水平;实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-133a和Shh mRNA表达;免疫印迹实验检测各组细胞Shh及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性信号相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达明显降低(均P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显升高(均P<0.05)。与模型组比较,Shh-BMSCs外泌体组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达降低(均P<0.05);miR-133a inhibitor组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达升高(均P<0.05);miR-133a inhibitor阴性对照组脊髓神经元细胞各指标均无明显变化(P>0.05)。与Shh-BMSCs外泌体组比较,Shh-BMSCs外泌体+miR-133a inhibitor组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达降低(均P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论Shh-BMSCs外泌体可通过促进miR-133a表达而抑制NLRP3炎性信号激活,从而抑制LPS诱导的脊髓神经元细胞炎症,减轻其凋亡,缓解其轴突损伤。

轻重型再生障碍性贫血患者Shh蛋白表达与外周血白细胞计数、淋巴细胞的关系分析

目的 不同分型再生障碍性贫血患者Shh蛋白表达与外周血白细胞计数、淋巴细胞的关系。方法 选取我院2020年12月至2022年11月收治的再生障碍性贫血患者68例,对比不同分型再生障碍性贫血患者的Shh蛋白表达水平、白细胞、淋巴细胞、红细胞以及中性粒细胞计数,根据患者Shh蛋白表达均值分析Shh蛋白高表达和低表达患者的白细胞、淋巴细胞、红细胞以及中性粒细胞计数水平,并分析Shh蛋白表达与白细胞、淋巴细胞、红细胞以及中性粒细胞计数的相关性。结果 重型再生障碍性贫血患者Shh蛋白表达显著低于非重型再生障碍性贫血患者,差异有统计学意义(P<0.05)。重型再生障碍性贫血患者白细胞、淋巴细胞、红细胞以及中性粒细胞计数均显著低于非重型再生障碍性贫血患者,差异有统计学意义(P<0.05)。低表达组患者白细胞、淋巴细胞、红细胞以及中性粒细胞计数均显著低于高表达组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,患者Shh蛋白表达水平与白细胞、淋巴细胞、红细胞以及中性粒细胞计数均呈正相关性(P<0.05)。结论 再生障碍性贫血患者Shh蛋白表达明显降低,重型再生障碍性贫血患者Shh蛋白表达明显低于非重型患者;再生障碍性贫血患者Shh蛋白表达水平与白细胞、淋巴细胞、红细胞以及中性粒细胞计数均呈正相关性。

SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

研究Sonic Hedgehog信号通路(SHH)是否参与转录因子叉头框Q1基因(FOXQ1)引起胃癌细胞凋亡。观察癌旁组织及癌灶周围淋巴结转移瘤对该信号通路的影响并分析其机制。方法 采用qRT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中FOXQ1的表达情况,FOXQ1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-FOXQ1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),qRT-PCR和Western blot检测FOXQ1基因表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。通过对以上指标进行比较分析,探讨了不同胃癌细胞间以及同一胃癌细胞系内两种癌细胞之间是否存在差异。结果 FOXQ1在胃粘膜上皮细胞GES-1中的表达明显低于胃癌细胞(P<0.05),FOXQ1在胃癌SGC-7901细胞中的表达最高,可作为后续实验研究的对象。结论 胃癌细胞内FOXQ1基因高度表达;SHH信号通路与FOXQ1基因有关,其诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡是通过上调Bax及Cleaved Caspase3等蛋白的表达而实现。