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毛兰素调节CD47/SIRPα信号轴抑制非小细胞肺癌发生发展 被引量:1
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作者 李胤谕 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2023年第3期275-281,共7页
目的分析毛兰素(erianin)通过调节CD47/SIRPα信号轴对非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展的影响。方法选取2020年9月至2022年6月期间本院行手术切除的NSCLC患者48例,取其癌组织与癌旁组织,应用免疫组织化学染色检测比较组间CD47水平。Western... 目的分析毛兰素(erianin)通过调节CD47/SIRPα信号轴对非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展的影响。方法选取2020年9月至2022年6月期间本院行手术切除的NSCLC患者48例,取其癌组织与癌旁组织,应用免疫组织化学染色检测比较组间CD47水平。Western blot检测人正常肺上皮细胞与NSCLC细胞系HCC87、A549、NCI-H157细胞CD47水平。将高水平表达CD47的HCC87细胞分为对照组、毛兰素低浓度组(31μg/L)、毛兰素中浓度组(62.5μg/L)、毛兰素高浓度组(125μg/L)和B6H12组(3.3μg/mL B6H12),CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡,体外吞噬实验检测巨噬细胞对HCC87的吞噬效果,Western blot法测定HCC87细胞Bax、Bcl-2、CD47、p-SIRPα、SIRPα水平。结果与癌旁组织相比,癌组织CD47免疫反应性增强,强阳性率增高;与正常肺上皮细胞相比,HCC87、A549、NCI-H157等NSCLC细胞系CD47水平升高;与对照组相比,毛兰素低、中、高浓度组和B6H12组HCC87细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax水平、巨噬噬细胞对HCC87细胞的吞噬率均升高,Edu阳性细胞比例、Bcl-2水平、CD47水平、p-SIRPα/SIRPα水平降低。结论毛兰素可抑制NSCLC细胞癌进展,其可能是通过抑制CD47/SIRPα通路,提升巨噬细胞对HCC87细胞的吞噬效率。 展开更多
关键词 毛兰素 非小细胞肺癌 CD47/sirpα 吞噬
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重组SIRPα1的体外表达及其在红细胞CD47-SIRPα信号通路研究中的应用
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作者 叶璐夷 杨启修 +7 位作者 夏荣伟 荀春志 赵俸涌 张嘉敏 李勤 王晨 向东 朱自严 《中国输血杂志》 CAS 2018年第9期934-937,共4页
目的获得野生型信号调节蛋白α1(SIRPα1)功能结构域重组蛋白,以用于研究正常或异常红细胞的吞噬和清除中CD47-SIRPα信号通路的作用。方法全基因合成人源野生型SIRPα1 IgV结构域编码区;将合成片段构建入携带组氨酸(His)标签的pET-... 目的获得野生型信号调节蛋白α1(SIRPα1)功能结构域重组蛋白,以用于研究正常或异常红细胞的吞噬和清除中CD47-SIRPα信号通路的作用。方法全基因合成人源野生型SIRPα1 IgV结构域编码区;将合成片段构建入携带组氨酸(His)标签的pET-21a大肠杆菌载体,获得重组表达载体。使用大肠杆菌BL21 (DE3)细胞体外表达重组SIRPα1,并通过亲和层析法纯化;利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组SIRPα1;采用基于ELISA的红细胞结合试验评估2名Rh缺失表型献血者与正常Rh表型个体对照在红细胞结合水平的差异;流式细胞术检测红细胞CD47表达;采用单因素方差分析对数据做统计分析。结果成功构建重组表达载体,纯化获得野生型重组SIRPα1。成功建立了基于ELISA的红细胞结合试验方法并应用于评估重组SIRPα1与红细胞的结合。伴随CD47表达量的明显降低,Rh缺失表型个体的红细胞和正常个体相比,其与重组SIRPα1的结合能力下降。结论 CD47-SIRPα信号通路可能在Rh缺失表型红细胞的清除中发挥了作用。 展开更多
关键词 信号调节蛋白α1(sirpα1) 重组蛋白 CD47-sirpα信号通路 体外表达 红细胞结合试验
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天然免疫检查点CD47-SIRPα在恶性肿瘤中的研究进展 被引量:1
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作者 查莉 于姣姣 许斌 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2018年第8期604-608,共5页
针对CTLA-4/B7和PD-1/PD-L1的免疫检查点抑制剂现已广泛应用于临床,其他检查点抑制剂也正在开发中。CD47是广泛表达于正常细胞表面的蛋白质,在肿瘤细胞中呈过表达状态,其受体为髓系抑制性免疫受体SIRPα。阻断CD47与SIRPα之间的相互作... 针对CTLA-4/B7和PD-1/PD-L1的免疫检查点抑制剂现已广泛应用于临床,其他检查点抑制剂也正在开发中。CD47是广泛表达于正常细胞表面的蛋白质,在肿瘤细胞中呈过表达状态,其受体为髓系抑制性免疫受体SIRPα。阻断CD47与SIRPα之间的相互作用可增强巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬作用进而消灭肿瘤细胞。此外,越来越多的证据表明阻断CD47-SIRPα轴还可以增强抗原呈递细胞的功能,从而刺激T细胞介导的抗癌免疫。随着该领域研究的发展,CD47-SIRPα轴的临床应用将会是未来肿瘤免疫治疗的热点之一。 展开更多
关键词 恶性肿瘤 CD47 sirpα 免疫检查点 免疫治疗
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SIRPα对乳腺癌细胞MDA-MB-231黏附、侵袭和凋亡的影响
4
作者 王晨 杜荣辉 白蕊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期609-614,共6页
目的:研究信号调节蛋白α(signal regulatory protein α,SIRPα)对乳腺癌细胞黏附、侵袭和凋亡的影响及其可能机制。方法:Western blotting检测侵袭能力强的MDA-MB-231乳腺癌细胞和侵袭能力弱的MDA-MB-435乳腺癌细胞中SIRPα蛋白的表... 目的:研究信号调节蛋白α(signal regulatory protein α,SIRPα)对乳腺癌细胞黏附、侵袭和凋亡的影响及其可能机制。方法:Western blotting检测侵袭能力强的MDA-MB-231乳腺癌细胞和侵袭能力弱的MDA-MB-435乳腺癌细胞中SIRPα蛋白的表达。脂质体法将pcDNA3.0-SIRPα转染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR检测MDA-MB-231细胞SIRPαmRNA的表达,TUNEL法检测细胞的凋亡,细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力变化,黏附实验观察细胞黏附能力变化,Westernblotting检测JNK和p-JNK蛋白的表达。EGF刺激MDA-MB-435细胞,免疫共沉淀检测MDA-MB-435细胞中SIRPα与SHP2的结合。结果:侵袭能力强的MDA-MB-231细胞不表达SIRPα,侵袭能力弱的MDA-MB-435细胞表达高水平SIRPα蛋白。pcDNA3.0-SIRPα转染可增强MDA-MB-231细胞的黏附,降低MDA-MB-231细胞的侵袭能力,并促进MDA-MB-231细胞的凋亡。pcDNA3.0-SIRPα转染抑制MDA-MB-231细胞JNK的磷酸化。EGF刺激可进一步上调MDA-MB-435细胞中SIRPα蛋白表达,并促进SIRPα与SHP-2蛋白的结合。结论:SIRPα与乳腺癌细胞的黏附、侵袭能力相关,并可能通过抑制JNK磷酸化促进乳腺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 信号调节蛋白α(sirpα) 凋亡 JNK 侵袭 黏附
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表达SIRPα-Fc的基因-溶瘤腺病毒对胆管癌治疗作用的实验研究
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作者 巩睿智 吕赛群 +8 位作者 马宜冬 左明辉 叶真龙 朱海莉 吴红平 施军霞 李林芳 金华君 钱其军 《现代肿瘤医学》 CAS 2015年第3期310-314,共5页
目的:研究表达SIRPα-Fc融合基因的基因-溶瘤腺病毒SG655-SF对胆管癌的治疗作用。方法:将信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα,SIRPα)突变体CV1与人Ig G1 Fc段融合(简称SF),构建SF编码序列(基因)。将SF基因插入条件增殖型腺病... 目的:研究表达SIRPα-Fc融合基因的基因-溶瘤腺病毒SG655-SF对胆管癌的治疗作用。方法:将信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα,SIRPα)突变体CV1与人Ig G1 Fc段融合(简称SF),构建SF编码序列(基因)。将SF基因插入条件增殖型腺病毒载体SG655,构建基因-溶瘤腺病毒SG655-SF。重组病毒经鉴定正确后,经扩增、滴度测定,感染293细胞。Western blot检测外源基因的表达情况。间接免疫荧光检测293细胞表达的SF蛋白对胆管癌细胞的结合能力。噻唑蓝(MTT)法测定病毒对胆管癌细胞的杀伤作用。建立人类胆管细胞癌裸鼠移植瘤模型,用SG655-SF治疗,观察疗效。取肿瘤组织进行切片检查,验证其抗肿瘤作用。结果:成功构建SF表达框、基因-溶瘤腺病毒SG655-SF。SG655-SF感染293细胞后,能高效表达SF蛋白。293细胞表达的SF蛋白能有效结合CD47高量表达的胆管癌细胞株EH-CA1-T、EHCA1-Y。SG655-SF能有效杀伤胆管癌细胞。SG655-SF可以有效抑制肿瘤在裸鼠体内生长。肿瘤组织切片检查提示有肿瘤坏死和病毒浸润。结论:基因-溶瘤腺病毒SG655-SF具有良好的抗胆管癌活性。 展开更多
关键词 胆管癌 溶瘤腺病毒 CD47 sirpα
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SIRPα1转染对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响
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作者 张璐瑶 王晨 曾科 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1503-1507,共5页
目的:探讨外源性SIRPα1基因对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响及相关的分子生物学机制。方法:乳腺癌细胞株MCF-7本身不表达SIRPα1,将SIRPα1基因转染入MCF-7,用EGF刺激,Western blot法检测JNK蛋白及磷酸化的JNK蛋白表达水平的变化,... 目的:探讨外源性SIRPα1基因对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响及相关的分子生物学机制。方法:乳腺癌细胞株MCF-7本身不表达SIRPα1,将SIRPα1基因转染入MCF-7,用EGF刺激,Western blot法检测JNK蛋白及磷酸化的JNK蛋白表达水平的变化,MTT法检测细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:转染SIRPα1基因后,JNK蛋白的总量没有发生变化,而磷酸化的JNK减少,同时细胞增殖受抑,凋亡增加。SIRPα1胞内段的酪氨酸残基可被多种有丝分裂原活化而发生磷酸化。用EGF刺激转染SIRPα1质粒的MCF-7细胞,与未加刺激的相比,细胞凋亡无明显变化。结论:SIRPα1能促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,是一种候选的抑癌基因。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞株MCF-7 EGF sirpα1基因 JNK蛋白 细胞凋亡
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CD47-SIRPα信号通路在宫颈癌组织中的表达及意义 被引量:3
7
作者 柏雪丽 单风平 曹霞 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第16期3014-3017,共4页
目的:探讨CD47-SIRPα信号通路在宫颈癌组织中的表达,分析其表达水平与患者临床特征之间的关系。方法:收集120例宫颈癌病理标本及临床资料作为研究对象,60例宫颈上皮内瘤变组织(HSIL)及16例正常宫颈组织作为对照组。采用免疫组织化学法... 目的:探讨CD47-SIRPα信号通路在宫颈癌组织中的表达,分析其表达水平与患者临床特征之间的关系。方法:收集120例宫颈癌病理标本及临床资料作为研究对象,60例宫颈上皮内瘤变组织(HSIL)及16例正常宫颈组织作为对照组。采用免疫组织化学法检测CD47和SIRPα的表达水平,并分析其相关性及临床意义。结果:宫颈癌组织中CD47高表达率为68%,显著高于正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤变组织,差异有统计学意义(P<0.05)。SIRPα在宫颈癌组织中的高表达率(21%)低于宫颈上皮内瘤变组织(35%)及正常宫颈组织(44%),差异具有统计学意义(P<0.05)。CD47与SIRPα表达呈正相关。CD47的表达水平与宫颈癌临床分期、分化程度、淋巴结转移、HPV感染相关(P<0.05),与年龄无关(P>0.05)。结论:CD47-SIRPα信号通路是宫颈癌中有潜在价值的诊断和预测分子标志,同时可能为抗肿瘤免疫治疗提供潜在靶点。 展开更多
关键词 CD47 sirpα 宫颈癌 免疫逃逸 抗肿瘤免疫
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SIRPα及其配体CD47在巨噬细胞吞噬过程中的作用 被引量:3
8
作者 黄丽芳 李国华 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2016年第5期85-88,共4页
SIRPα是信号蛋白家族(SIRPs)中典型的抑制性受体,可与体内广泛存在的跨膜糖蛋白CD47相互作用,形成SIRPα/CD47信号复合体。此复合体在抑制巨噬细胞吞噬红细胞、调节异种移植免疫排斥反应及肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。且随着研究逐渐... SIRPα是信号蛋白家族(SIRPs)中典型的抑制性受体,可与体内广泛存在的跨膜糖蛋白CD47相互作用,形成SIRPα/CD47信号复合体。此复合体在抑制巨噬细胞吞噬红细胞、调节异种移植免疫排斥反应及肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。且随着研究逐渐深入,巨噬细胞中SIRPα/CD47途径为抑制红细胞清除、异种移植器官存活及肿瘤治疗提供新的治疗视角。 展开更多
关键词 sirpα CD47 巨噬细胞 吞噬
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CD47-SIRPα与妇科恶性肿瘤相关性的研究进展 被引量:1
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作者 郭楚鸿(综述) 吴砂 王薇(审校) 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期591-595,共5页
CD47是新型的免疫检查点分子,通过与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(SIRPα)结合,启动"别吃我"抑制性信号,从而使肿瘤细胞躲避巨噬细胞的吞噬,并影响特异性杀瘤性T细胞活化,介导肿瘤细胞的生长及转移。近年来,CD47-SIRPα轴促... CD47是新型的免疫检查点分子,通过与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(SIRPα)结合,启动"别吃我"抑制性信号,从而使肿瘤细胞躲避巨噬细胞的吞噬,并影响特异性杀瘤性T细胞活化,介导肿瘤细胞的生长及转移。近年来,CD47-SIRPα轴促使子宫内膜癌、卵巢癌以及宫颈癌等妇科恶性肿瘤发生及恶性进展的重要作用逐渐被证实,尤其在卵巢癌的预后评估、协同高危HPV感染促进子宫颈癌变进展和子宫内膜癌免疫抑制微环境形成等方面意义显著。通过靶向结合于CD47或SIRPα的药物来阻断CD47-SIRPα信号通路,是妇科恶性肿瘤免疫治疗的新途径。 展开更多
关键词 CD47 sirpα 免疫检查点 妇科恶性肿瘤 免疫治疗
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Notch通过抑制信号调节蛋白α(SIRPα)调控巨噬细胞M1型极化作用 被引量:6
10
作者 郭世博 刘佳祺 +3 位作者 张芽龙 梁世倩 江逊 林燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期673-678,共6页
目的研究缺刻基因(Notch)信号通过信号调节蛋白α(SIRPα)调控巨噬细胞极化的作用。方法将小鼠RAW264.7细胞分别给予脂多糖(LPS)与γ干扰素(IFN-γ)或者白细胞介素4(IL-4)刺激极化为M1/M2后,通过实时定量PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)... 目的研究缺刻基因(Notch)信号通过信号调节蛋白α(SIRPα)调控巨噬细胞极化的作用。方法将小鼠RAW264.7细胞分别给予脂多糖(LPS)与γ干扰素(IFN-γ)或者白细胞介素4(IL-4)刺激极化为M1/M2后,通过实时定量PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12、IL-10、甘露糖受体(MR)及SIRPα的mRNA水平,Western blot法检测SIRPα的蛋白表达水平;通过基因转染方法激活Notch信号或利用γ分泌酶抑制剂(GSI)阻断Notch信号后,Western blot法检测巨噬细胞SIRPα表达变化;利用小鼠基因组DNA扩增SIRPα启动子区(-2615-+123),通过报告基因实验观察Notch信号激活对SIRPα的调控作用。结果M1型巨噬细胞SIRPα表达降低,M2型巨噬细胞SIRPα表达增加;Notch信号激活可抑制巨噬细胞SIRPα的表达,而GSI抑制Notch信号可增加巨噬细胞上SIRPα的表达;进一步报告基因实验证实Notch激活可显著抑制由SIRPα启动子片段驱动的荧光素酶表达。结论Notch信号通过抑制SIRPα表达参与调控巨噬细胞M1型极化作用。 展开更多
关键词 NOTCH 信号调节蛋白α(sirpα) 巨噬细胞 极化
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小鼠可溶性信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段蛋白增强巨噬细胞对L1210白血病细胞的吞噬能力 被引量:3
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作者 林燕 李玉品 +3 位作者 虎崇康 曾令超 梁世倩 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1057-1062,共6页
目的克隆小鼠信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段基因(mSIRPα)并构建其原核表达载体,实现蛋白的可溶性表达后,研究mSIRPα^(ext)在肿瘤免疫调节中的作用。方法利用小鼠淋巴结来源的cDNA扩增mSIRPαext基因,并进一步构建pET32a-SIRPα^(ext)... 目的克隆小鼠信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段基因(mSIRPα)并构建其原核表达载体,实现蛋白的可溶性表达后,研究mSIRPα^(ext)在肿瘤免疫调节中的作用。方法利用小鼠淋巴结来源的cDNA扩增mSIRPαext基因,并进一步构建pET32a-SIRPα^(ext)原核表达载体。在实现含有硫氧还蛋白(Trx)标签的重组Trx-mSIRPα^(ext)融合蛋白可溶性表达后,培养小鼠骨髓来源单核细胞并诱导其向巨噬细胞分化,接着将巨噬细胞与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记的L1210白血病细胞共培养,在共培养体系中添加Trx-mSIRPα^(ext)蛋白及Trx对照蛋白,通过免疫荧光细胞化学染色和共聚焦显微镜观察重组蛋白在巨噬细胞吞噬肿瘤细胞中的作用。结果获得纯化的可溶性Trx-mSIRPα^(ext)蛋白,利用体外吞噬实验证明该蛋白可增强巨噬细胞对小鼠L1210白血病细胞的吞噬作用。结论原核表达的Trx-mSIRPα^(ext)蛋白可有效提高巨噬细胞对白血病细胞的吞噬作用,从而发挥抗肿瘤免疫治疗效果。 展开更多
关键词 信号调节蛋白α(sirpα) CD47 原核表达 吞噬作用 巨噬细胞
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SIRPα工程化外泌体阻断CD47/SIRPα信号轴研究
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作者 关新刚 王明月 +1 位作者 穆业腾 郭冲 《北华大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第4期479-483,共5页
目的制备分离表达SIRPα受体的外泌体,探讨SIRPα外泌体的结构特性、细胞相容性、细胞内分布及对CD47/SIRPα信号轴的阻断作用.方法通过差异超速离心法从稳定表达SIRPα的HEK293T细胞中分离外泌体;通过动态光散射法(DLS)和透射电子显微... 目的制备分离表达SIRPα受体的外泌体,探讨SIRPα外泌体的结构特性、细胞相容性、细胞内分布及对CD47/SIRPα信号轴的阻断作用.方法通过差异超速离心法从稳定表达SIRPα的HEK293T细胞中分离外泌体;通过动态光散射法(DLS)和透射电子显微镜(TEM)技术分析外泌体的尺寸和形貌特征;Western blotting检测外泌体中SIRPα-GFP融合蛋白的表达;通过MTT法检测外泌体与NIH3T3细胞的相容性;应用荧光成像技术研究外泌体的肿瘤细胞内吞;通过肿瘤细胞与巨噬细胞共孵育实验研究外泌体阻断CD47/SIRPα信号轴带来的肿瘤吞噬效果.结果利用差异超速离心法分离得到尺寸约80 nm的SIRPα外泌体,透射电子显微镜下呈现为尺寸均一的圆球形结构;免疫印迹证实了外泌体上SIRPα的表达;MTT法结果显示SIRPα外泌体具有良好的生物相容性;荧光成像结果显示SIRPα外泌体被B16F10细胞内吞后分散在细胞质中;共孵育实验表明SIRPα外泌体与CD47单抗均能促进骨髓来源巨噬细胞吞噬黑色素瘤细胞.结论成功分离了表面表达SIRPα受体的外泌体;SIRPα外泌体具有良好的细胞相容性;SIRPα外泌体可以成功阻断CD47/SIRPα信号通路,激活了巨噬细胞对肿瘤的吞噬功能. 展开更多
关键词 信号调节蛋白α 外泌体 吞噬
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抗人SIRPα抗体制备及抗肿瘤活性研究
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作者 刘思瑾 李松 +5 位作者 郭慧琴 陈典泽 白星 朱文琪 田文志 喻红 《中国医院药学杂志》 CAS 北大核心 2023年第16期1795-1800,共6页
目的:制备抗人信号调节蛋白α(signal regulatory protein alpha,SIRPα)抗体并进行抗肿瘤活性评价。方法:通过杂交瘤技术获得高亲和力鼠抗人SIRPα抗体。采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)和毛细管凝胶... 目的:制备抗人信号调节蛋白α(signal regulatory protein alpha,SIRPα)抗体并进行抗肿瘤活性评价。方法:通过杂交瘤技术获得高亲和力鼠抗人SIRPα抗体。采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)和毛细管凝胶电泳检测抗体纯度;采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及荧光激活细胞分选法(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测抗体抗原结合活性及抗体依赖性细胞介导的吞噬(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)活性;采用生物干涉膜技术(bio-layer interferometry,BLI)检测嵌合抗体与人SIRPα结合动力学;利用转基因Balb/c小鼠皮下移植CT26-hCD47/hPD-L1肿瘤细胞的模型进行候选抗体药效学评价。结果:制备出纯度高于90%的3种抗体14C4、59G5及4C10。3种抗体都能特异性地与人源不同水平的多基因型SIRPα结合,同时能协同增强Rituximab或IMM40H(CD70抗体)的ADCP活性。体内药效实验显示,抗体14C4与PD-L1抗体联合用药具有显著抑制实体瘤生长的效果。结论:该研究获得了具有高亲和力和特异性结合不同SIRPα并阻断CD47/SIRPα结合的3株抗肿瘤候选抗体。 展开更多
关键词 sirpα抗体 CD47/sirpα信号轴 巨噬细胞 吞噬
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抗SIRPα单克隆抗体的制备及其体外活性
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作者 赵丽丽 赵文鹏 +3 位作者 许永亮 张贵民 曹宇 刘忠 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期366-373,共8页
利用分子生物学技术构建可表达带有小鼠抗体Fc端(mFc)的信号调节蛋白α(SIRPα)的质粒,并转染至中国仓鼠卵巢癌细胞(CHO细胞)中来制备SIRPα-mFc蛋白。将获得的SIRPα-mFc蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,并将免疫后的小鼠脾脏细胞与SP2/0... 利用分子生物学技术构建可表达带有小鼠抗体Fc端(mFc)的信号调节蛋白α(SIRPα)的质粒,并转染至中国仓鼠卵巢癌细胞(CHO细胞)中来制备SIRPα-mFc蛋白。将获得的SIRPα-mFc蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,并将免疫后的小鼠脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经过酶联免疫吸附反应(ELISA)和流式细胞仪的多轮筛选后,得到7株靶向SIRPα的单克隆抗体。其中,40F3和57B10这2株单克隆抗体结合活性较高,半数效应浓度(EC_(50))分别为5.866、5.457ng/mL;半数抑制浓度(IC_(50))分别为65.31、63.29 ng/mL,均优于商业化抗体SE5A5(抗SIRPα/β抗体,EC_(50)为22.47 ng/mL,IC_(50)为121.2 ng/mL)。并且,这2株抗体的亲和力数量级在1×10^(–11)且不与SIRPg结合,为后续的抗体人源化以及临床前研究提供了参考。 展开更多
关键词 信号调节蛋白α(sirpα) 单克隆抗体 抗体亲和力 制备 体外活性
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基于Oncomine和GEO数据库分析SIRPα基因在乳腺癌中的表达意义以及丹参酚酸B的干预作用研究
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作者 李丹 余涛 +3 位作者 曾智 叶鹏 吴杰 沈秉正 《现代药物与临床》 CAS 2018年第5期1013-1018,共6页
目的通过挖掘Oncomine和GEO基因芯片数据库中的相关数据,分析信号调节蛋白α(SIRPα)基因在乳腺癌中的表达及其临床意义,并探讨丹参酚酸B对乳腺癌细胞中SIRPα基因的干预作用。方法检索Oncomine和GEO数据库中有关乳腺癌和丹参酚酸B干预... 目的通过挖掘Oncomine和GEO基因芯片数据库中的相关数据,分析信号调节蛋白α(SIRPα)基因在乳腺癌中的表达及其临床意义,并探讨丹参酚酸B对乳腺癌细胞中SIRPα基因的干预作用。方法检索Oncomine和GEO数据库中有关乳腺癌和丹参酚酸B干预乳腺癌的数据集,对所获取的数据资料进行数据挖掘,并结合文献资料综合分析。考察丹参酚酸B作用于乳腺癌MCF7细胞的基因表达谱。结果对Oncomine数据库中共收集的9项关于乳腺癌和乳腺正常组织SIRPα基因有差异表达的研究数据进行分析,发现乳腺癌组织中SIRPα基因的表达明显低于乳腺正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过生存分析发现低表达SIRPα基因乳腺癌患者无病生存期明显差于高表达者,高表达患者的预后更好(P<0.05)。通过挖掘GEO数据库中的数据集GSE85871发现丹参酚酸B能够上调乳腺癌细胞SIRPα基因的表达(P<0.01)。结论SIRPα基因在乳腺癌组织中呈现低表达,并与乳腺癌患者的预后相关,该基因可能是丹参酚酸B干预乳腺癌细胞的一个新靶点。 展开更多
关键词 丹参酚酸B 乳腺癌 sirpα基因 数据挖掘
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新型融合蛋白pro-SIRPα的构建及体外活性研究
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作者 赵一蓉 徐进 +5 位作者 郭怀祖 李彦韬 陈曦 钱卫珠 李晶 李博华 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期89-95,共7页
筛选获得肿瘤特异性释放封闭肽的高亲和力新型融合蛋白pro-SIRPα并对其体外活性进行了研究。首先利用噬菌体表面展示肽库筛选能与信号调节蛋白SIRPα-cv1活性区结合的短肽,并以含有尿激酶(uPA)酶切位点的linker将其连接在SIRPα-cv1融... 筛选获得肿瘤特异性释放封闭肽的高亲和力新型融合蛋白pro-SIRPα并对其体外活性进行了研究。首先利用噬菌体表面展示肽库筛选能与信号调节蛋白SIRPα-cv1活性区结合的短肽,并以含有尿激酶(uPA)酶切位点的linker将其连接在SIRPα-cv1融合蛋白的氨基末端,构建完整的pro-SIRPα。通过竞争ELISA实验验证pro-SIRPα前端封闭肽具有封闭效应。由于氨基端封闭肽的存在,pro-SIRPα与CD47的结合能力显著下降。而肿瘤微环境中富含uPA,可水解pro-SIRPα氨基末端的linker,使得封闭肽解离并暴露出的完整SIRPα-cv1,恢复与CD47的结合能力。因此,pro-SIRPα可特异性作用于肿瘤细胞,减少了与正常血液系统细胞的非特异性结合,降低了毒性以及可能引起的抗原沉默(antigen sink effect)现象。我们的体外实验还证实,与单独应用抗EGFR-IgG1单抗相比,pro-SIRPα与抗EGFR-IgG1单抗联用可显著增强巨噬细胞对A431肿瘤细胞的吞噬作用。pro-SIRPα的研制可能为肿瘤靶向治疗提供新的策略。 展开更多
关键词 sirpα CD47 封闭肽 高亲和力突变体
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CD47-SIRPα在人类红细胞老化与吞噬过程中的作用 被引量:4
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作者 周洁 李勤 朱自严 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期409-414,共6页
探讨CD47-SIRPα在人类红细胞衰老与吞噬过程中的作用。采用Western blot检测体外4℃和37℃保存红细胞(RBC)及老化过程中红细胞膜上CD47的表达量;用单核细胞单层分析试验(monocyte monolayer assay,MMA)观察人THP-1单核细胞系对不同年... 探讨CD47-SIRPα在人类红细胞衰老与吞噬过程中的作用。采用Western blot检测体外4℃和37℃保存红细胞(RBC)及老化过程中红细胞膜上CD47的表达量;用单核细胞单层分析试验(monocyte monolayer assay,MMA)观察人THP-1单核细胞系对不同年龄段红细胞和CD47抗体F(ab’)2端封闭红细胞的吞噬情况及Western blot检测THP-1细胞上SIRPα磷酸化情况。结果发现,无论是在体内老化还是体外老化过程中,红细胞膜上CD47的表达量均出现显著下降趋势,随着保存时间的延长,CD47的表达量最大可下降82.64%(4℃保存情况下);THP-1细胞对不同年龄段红细胞的吞噬情况存在差异性,更易吞噬年老红细胞,吞噬率为35.32%,对年轻红细胞的吞噬率为13.72%(n=7,P<0.02);对新鲜红细胞的吞噬率为2.22%,对CD47抗体F(ab’)2端封闭红细胞的吞噬率为31.51%(n=7,P<0.02);吞噬不同年龄段红细胞后,THP-1细胞上磷酸化SIRPα量不同,与吞噬年轻红细胞相比,吞噬年老红细胞后,磷酸化SIRPα的量下降了57.12%。表明人类红细胞的老化与吞噬过程和CD47-SIRPα相互作用存在密切关系。 展开更多
关键词 CD47 sirpα 磷酸化 红细胞 老化与吞噬
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重组信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段及其高亲和力突变体的表达、纯化与活性鉴定 被引量:2
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作者 徐进 刘涛 +6 位作者 赵自叶 彭晓芸 夏懋 郭怀祖 张大鹏 钱卫珠 王皓 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期353-357,共5页
制备野生型信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段和高亲和力突变体,并进行纯化条件优化与结合活性鉴定。通过全基因合成获得SIRPα-wt和高亲和力突变体SIRPα-cvl的全基因;利用分子克隆技术将其连入表达载体,最终通过大肠杆菌BL21(DE3)工程菌... 制备野生型信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段和高亲和力突变体,并进行纯化条件优化与结合活性鉴定。通过全基因合成获得SIRPα-wt和高亲和力突变体SIRPα-cvl的全基因;利用分子克隆技术将其连入表达载体,最终通过大肠杆菌BL21(DE3)工程菌株表达Trx-SIRPα-wt和Trx-SIRPα-cvl两种融合蛋白。通过肠激酶酶切去除融合标签以及多次层析纯化后,利用质谱技术分析目的蛋白所在组分。经SDS-PAGE电泳显示,最终获得了纯度高于90%的SIRPα-wt和SIRPα-cvl,与CD47结合活性结果表明两种蛋白都能与CD47-Fc融合蛋白结合。据此,本研究成功表达并纯化得到了具有配体结合活性的SIRPα-wt和其高亲和力突变体SIRPα-cvl两种重组蛋白。 展开更多
关键词 sirpα CD47 融合蛋白 高亲和力突变体 蛋白纯化
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miR-17-5p靶向信号调节基因SIRPα调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌的炎症反应 被引量:4
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作者 张帆 何萌 +7 位作者 李元 王淑娥 洪丹彤 王雅蓉 刘宏鹏 姜中佳 安维军 郭乐 《生物技术》 CAS 2020年第1期30-37,共8页
[目的]验证miR-17-5p对TLRs负向调控因子SIRPα的靶向性,探讨其对抗结核分枝杆菌(MTB)炎症反应的调控作用。[方法]利用生物信息学预测miR-17-5p对SIRPα的靶向性,构建SIRPα野生型和突变型报告载体,利用双荧光素酶报告法、Western Blot... [目的]验证miR-17-5p对TLRs负向调控因子SIRPα的靶向性,探讨其对抗结核分枝杆菌(MTB)炎症反应的调控作用。[方法]利用生物信息学预测miR-17-5p对SIRPα的靶向性,构建SIRPα野生型和突变型报告载体,利用双荧光素酶报告法、Western Blot、激光共聚焦等技术验证miR-17-5p对SIRPα的靶向性;通过H37Ra感染THP-1巨噬细胞,用miR-17-5p mimics及其inhibitor处理细胞。利用Q-PCR检测H37Ra感染后miR-17-5p的表达;通过免疫荧光、Western Blot和ELISA等技术检测SIRPα和细胞因子TNF-α的表达情况。[结果]H37Ra感染可下调miR-17-5p表达,且随感染复数的增加,下调表达愈加显著;荧光素酶报告法、Western Blot等结果证实miR-17-5p可靶向结合SIRPα3’-UTR,下调SIRPα的表达,进而上调细胞因子TNF-α的表达。[结论]MTB可下调miR-17-5p表达,而miR-17-5p可靶向抑制SIRPα的表达,从而调控巨噬细胞抗MTB的炎症反应。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 炎症反应 miR-17-5p sirpα
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基于SIRP法的相关韦布尔分布雷达杂波仿真 被引量:3
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作者 李青华 孔令讲 杨晓波 《雷达科学与技术》 2011年第3期253-258,共6页
推导了韦布尔分布参量满足的最大似然(ML)估计方程和其为球不变随机矢量(SIRV)的条件,给出了模拟相关韦布尔分布雷达杂波的原理和流程。在此基础上,基于球不变随机过程(SIRP)法仿真了具有高斯谱的韦布尔分布及其特例——瑞利和指数分布... 推导了韦布尔分布参量满足的最大似然(ML)估计方程和其为球不变随机矢量(SIRV)的条件,给出了模拟相关韦布尔分布雷达杂波的原理和流程。在此基础上,基于球不变随机过程(SIRP)法仿真了具有高斯谱的韦布尔分布及其特例——瑞利和指数分布,弥补了零记忆非线性(ZMNL)法不能独立控制边缘概率密度函数(PDF)与相关函数的不足。最后不仅验证了模拟数据的PDF与理论分布,估计的功率谱与理论谱的吻合程度,而且分析了ML估计的分布参数与真实值之间的相对误差。结果表明,基于SIRP法仿真相关韦布尔分布雷达杂波是有效的。 展开更多
关键词 球不变随机过程(sirp) 相关韦布尔 ML估计 零记忆非线性(ZMNL)
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