回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响

目的探讨回药爱康方(AKF)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响。方法雄性SD大鼠80只,按体重随机分为8组:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKFL、AKFM、AKFH)组,环磷酰胺(CTX)组,AKFL、AKFM、AKFH联合CTX组。分别给予相应AKFL、AKFM、AKFH浓缩水煎剂灌胃,连续5d;CTX组和联合组再按20mg·kg-1给予环磷酰胺于第1、3、5天腹腔注射。NS组给予等量生理盐水。上述各组动物取血制备含药血清,体外培养人肺鳞癌SK-MES-1细胞。应用MTT法检测各组含药血清对SK细胞增殖的影响,流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果 AKF含药血清作用不同时间对SKMES-1细胞生长有抑制作用(P<0.05)。AKF联合CTX含药血清能够抑制SK细胞增殖,其中AKFH联合CTX组的抑制率明显高于其他组,48h之内抑制程度呈时间和浓度依赖性。5%、10%、20%浓度组的含药血清作用SK-MES-1细胞24、48、72h后,与NS比较,除AKFL外,其余各组抑制率均有升高(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,AKF含药血清及联合CTX含药血清能使SK细胞阻滞于G1期,随着药物浓度的增加,G1期细胞增多、S期细胞减少,和NS组比较,高剂量以及联合组尤为明显(P<0.05)。10%、20%浓度含药血清组与NS组比较,各组的G0/G1期细胞增多、S期细胞逐渐减少(P<0.05);而与CTX组比较,G0/G1期细胞少于CTX组,S期细胞多于CTX组(P<0.05),各联合组G0/G1期细胞多于CTX组,S期细胞少于CTX组(P<0.05)。结论 AKF含药血清可抑制SK细胞增殖,并与CTX有协同作用,其机制可能与其阻滞细胞于G1期有关。

PEDF对肺鳞状细胞癌SK-MES-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对肺鳞状细胞癌(鳞癌)SK-MES-1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,阐明PEDF与肺鳞癌发生发展的关系。方法:培养SK-MES-1细胞,设不加PEDF的细胞为阴性对照组,PEDF干预组细胞分别加入180、360和720nmol·L-1 PEDF;MTT法检测各组SK-MES-1细胞增殖抑制率,细胞侵袭实验测定阴性对照组和720nmol·L-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数,倒置显微镜观察各组SK-MES-1细胞形态学,流式细胞术检测各组SK-MES-1细胞凋亡率。结果:PEDF干预组细胞增殖抑制率均显著高于阴性对照组(P<0.01),不同剂量PEDF干预组间比较差异也有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组细胞贴壁生长良好,PEDF干预组细胞排列逐渐稀疏,形态改变明显。720nmol·L-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数(31.6±15.8)低于阴性对照组(75.4±19.3),差异有统计学意义(P<0.01)。随着PEDF干预剂量增加,细胞凋亡率逐渐升高,不同剂量PEDF干预组与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PEDF抑制SK-MES-1细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,对肺鳞癌生长和转移发挥对抗效应。提示PEDF可能成为肺鳞癌患者预后判定、抗癌治疗的有效因子。

苦参碱诱导人肺鳞癌SK-MES-1细胞凋亡作用及其可能机制

目的:探讨苦参碱(MT)诱导人肺鳞癌细胞株SK-MES-1凋亡作用及其抗肿瘤机制。方法:培养人肺鳞癌细胞株SK-MES-1,用不同浓度的MT处理SK-MES-1细胞,用MTT法检测MT对SK-MES-1细胞生长增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;流式细胞术检测细胞相关凋亡蛋白Bcl-2、bax、caspase-3表达。结果:MT抑制SK-MES-1细胞增殖和诱导SK-MES-1细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性。与对照组相比,苦参碱处理后的SK-MES-1细胞G0/G1期百分比明显增高,S期细胞比例下降。Bax和capase-3表达增强,Bcl-2表达下调。结论:MT在体外能抑制人肺鳞癌细胞株SK-MES-1增殖,诱导细胞凋亡,其诱导作用具有明显的量效和时效关系,可能与抑制Bcl-2活性、激活bax和capase-3有关。

藤黄酸诱导SK-MES-1肺鳞癌细胞凋亡

目的研究藤黄酸(GA)对人肺鳞癌细胞株(SK-MES-1)的生长抑制、诱导凋亡作用及分子机制。方法采用改良四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和流式细胞术检测GA对SK-MES-1的生长抑制及细胞凋亡作用,Western-blot法检测不同浓度GA作用SK-MES-1后细胞凋亡蛋白酶Caspase9、10及p53蛋白表达。结果GA对SK-MES-1有明显的生长抑制和促凋亡作用;GA呈浓度依赖性上调Caspase9、10及p53蛋白的表达。结论GA具有显著的促SK-MES-1肺鳞癌细胞凋亡作用,其分子机制可能与上调Caspase9、10及p53蛋白的表达有关。

携带凋亡素基因的重组腺病毒对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299凋亡的影响

目的:研究携带凋亡素基因VP3的重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299的凋亡的影响。方法:取对数生长期SK-MES-1、NCI-H1299细胞,各分为重组腺病毒(Adxsi-GFP-VP3)组、空病毒(Adxsi-GFP)组和细胞对照(磷酸盐缓冲液)组,依次记为A、B、C组。采用逆转录-聚合酶链反应和Western blot法检测A、B组细胞转染48、72 h的VP3 mRNA和Apoptin表达情况,透射电镜观察A组细胞转染72 h的超微结构变化。采用MTT法检测3组细胞转染24、48、72、96 h的细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞转染后24、48、72 h的凋亡率及细胞周期变化。结果:与B组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞转染48 h后有VP3 mRNA表达,转染72 h后有Apoptin表达。A组转染72 h后SK-MES-1、NCI-H1299细胞均出现细胞凋亡的超微结构改变。与B、C组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加,且与转染时间呈正相关;转染72 h S期的SK-MES-1、NCI-H1299细胞比例降低、G2/M期细胞比例增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Adxsi-GFP-VP3能有效诱导SK-MES-1、NCI-H1299细胞凋亡。

茶色素对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞生长及凋亡的影响

目的:探讨茶色素对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞生长及凋亡的影响。方法:以超声细胞破碎法提取茶色素并计算得率。常规培养SK-MES-1细胞株,采用噻唑蓝溴化四唑(MTT)比色法观察不同浓度(5、2.5、1.25、0.625、0.3125 mg/m L)茶色素作用24、48 h对SK-MES-1细胞株生长的抑制作用,计算生长抑制率及IC_(50);以流式细胞术(FCM)荧光双染法(Annexin V/PI)观察茶色素对SK-MES-1细胞株凋亡的影响。结果:茶色素提取得率为7.35%。MTT实验结果显示随茶色素浓度增高和培养时间延长,其对细胞的生长抑制率也相应升高,即呈现剂量-时间依赖性,24 h和48 h处理的IC_(50)分别为2.353 mg/m L和1.494 mg/m L。流式细胞术检测作用24 h细胞凋亡,空白对照、0.625 mg/m L和1.25 mg/m L剂量组的SK-MES-1细胞凋亡率分别为7.7%、20.37%和25.25%。结论:茶色素可促进SK-MES-1细胞凋亡并抑制其增殖。

回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白表达的影响

目的探讨回药爱康方(AKR)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白表达的影响。方法将80只大鼠分为8组,每组10只:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKRL、AKRM、AKRH)组,环磷酰胺(CTX)组,回药爱康方低、中、高剂量联合环磷酰胺(AKRL/AKRM/AKRH+CTX)组。制备含药血清。MTT法检测各组含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖的影响,免疫细胞化学法检测细胞Bcl-2以及p53蛋白的表达。结果和NS组比较,回药爱康方对SK-MES-1细胞生长增殖有抑制作用(P<0.05)。回药爱康方高剂量联合CTX组的抑制率最高(P<0.05)。免疫细胞化学法检测结果显示,在不同浓度的含药血清作用下,和NS组相比,各实验组细胞的IOD值逐渐减小,差异有统计学意义(P<0.05);20%浓度的含药血清各实验组IOD值低于5%、10%浓度的含药血清组(P<0.05)。分别干预细胞24h、48h、72h后,与NS组比较,各实验组细胞的IOD值逐渐减小(P<0.05);20%浓度含药血清干预细胞72h,各实验组的阳性表达逐渐减弱,IOD值较低(P<0.05),AKRH+CTX组细胞的抑制率最高,故阳性表达最弱,IOD值最低。结论回药爱康方可以降低人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白的表达,抑制SK-MES-1细胞增殖。

南美响尾蛇神经毒素对吉非替尼诱导人肺鳞癌SK-MES-1细胞凋亡的影响

目的探讨南美响尾蛇神经毒素(crotoxin)对吉非替尼(iressa)诱导人肺鳞癌SK-MES-1细胞凋亡及其对吉非替尼的抗肿瘤效果的影响。方法应用MTT法和流式细胞仪annexinV-PI双标法研究crotoxin及其与iressa联用对人肺鳞癌SK-MES-1细胞促凋亡作用。结果 Crotoxin作用浓度大于或等于25μg/ml时对人肺鳞癌SK-MES-1细胞有明显生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与iressa联合作用明显高于单用crotoxin和iressa,其Q值均在0.85～1.15之间,两者呈现出相加的抗肿瘤效果。结论 Crotoxin对人肺鳞癌SK-MES-1细胞的生长有抑制作用,并呈浓度依赖性,与iressa联合应用对人肺鳞癌SK-MES-1细胞有明显的促凋亡作用。

CENPF通过抑制Akt信号通路上调CLDN1表达抑制肺鳞癌转移的研究

目的探讨CENPF在肺鳞癌组织中的表达与患者临床预后关系及其对肺鳞癌细胞侵袭、转移能力的影响。方法收集90例肺鳞癌患者180个组织样本点,含配对癌组织和癌旁组织。生物信息学分析筛选公共数据库中与肺鳞癌预后相关基因CENPF。组织芯片免疫组化验证CENPF表达,Cox风险分析影响患者生存的病理因素,CENPF表达与患者预后、临床病理分期及分级的关系。敲减SK-MES-1细胞中CENPF表达,检测细胞增殖、侵袭及迁移能力;RNA-seq检测mRNA表达谱分析下游信号通路及靶基因;验证基因表达及细胞信号通路激活。结果数据库及临床样本组化结果均证实CEPNF在肺鳞癌细胞中表达上调(t=7.821,P<0.001),并与肺鳞癌患者预后相关(χ^(2)=4.09,P<0.001),且CENPF与肺鳞癌患者N分期相关(χ^(2)=7.869,P=0.005)。敲减CENPF表达后,细胞增殖(t=5.319,P<0.01)及迁移(t=13.72,P<0.001)和侵袭能力(t=7.555,P<0.001)显著增强;RNA-seq显示细胞黏附分子通路基因表达改变显著(P<0.001)。Western blot及qPCR表明敲减CENPF后SK-MES-1细胞中CLDN1(Claudin-1)及E-cadherin表达显著下调,而N-cadherin则显著上调(均P<0.05);Akt激活水平显著升高,且抑制Akt激活后CLDN1表达下调则被消除(均P<0.05)。结论CENPF的表达与肺鳞癌患者临床预后呈正相关,其通过抑制Akt信号通路的激活上调CLDN1的表达抑制肺鳞癌的转移。