RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用

目的:探讨RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用。方法:构建RhoA真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV3,用RT-PCR和Westernblot检测SKOV3RhoAmRNA及蛋白表达水平;Boyden小室体外侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA的实验组与转染空载体的对照组比较,RhoAmRNA的表达丰度(RhoA/GAPDH)为12.01±1.72,明显高于对照组的6.81±1.24;RhoA蛋白的表达水平(RhoA/β-actin)为4.81±0.56,亦明显高于对照组的3.02±0.32,两者差异都有统计学意义(P<0.05)。Boyden小室体外侵袭实验中实验组与对照组平均侵袭百分数分别为(47.60±1.47)%和(22.60±2.40)%(P<0.05),比较划痕后0h与24h的宽度差,实验组和对照组愈合百分比分别为(65±6.4)%和(54±5.5)%(P<0.05);表明转染RhoA后,细胞侵袭和迁移能力明显增强。结论:RhoA增强了卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移能力。

T7-shRNAs对SKOV3卵巢癌细胞株中C-erbB2基因的RNAi作用

目的：探讨设计含有T7-启动子的Oligo-DNA，继而合成T7发夹RNA，并应用T7-shRNAs对卵巢癌SKOV3细胞株的卵巢癌C-erbB2基因进行RNAi。方法：自行设计并应用体外转录法合成、筛选出3条T7-shRNAs，脂质体转染卵巢癌SKOV3细胞株，分为非转染组、无关RNA组、shRNA（a、b、c）组，免疫细胞、RT-PCR及CCK-8观测干涉结果。结果：体外转录结果，合成后电泳检测shRNA（a、b、c）纯度较高，符合实验标准；转染后免疫细胞爬片结果，非转染组、无关RNA组和shRNAc链24、48、72h可见细胞生长正常，与时相无关，着色为深棕色，无抑制效果；shRNAa链24h可见有一定抑制效果，但48h即开始恢复生长，72h已恢复正常；shRNA b链24、48、72h可见有明显抑制效果，以24-48h最为明显，至72h仍维持相当抑制率；在核酸水平上半定量的RT-PCR结果与上述结果相符合；CCK-8动态观测，经shRNA干涉后不同时间内的抑制曲线显示，shRNAb链的抑制作用最明显，而shRNAa链和shRNAc链的抑制作用不明显（P〈0.01），但shRNAa链抑制作用强于shRNAc链（P〈0.01），从整个时间段来看，shRNAb在48h的抑制作用最强。结论：研究证实应用发夹RNA对肿瘤细胞可以取得明显干涉效果，发现shRNAb对C-erbB2基因干涉具有明显抑制作用，进一步完善RNA干涉实验来抑制肿瘤细胞生长是存在可能的。