钙离子拮抗剂SKF96365与LOE908对缺血再灌注损伤的心肌内皮素-1表达的影响

目的探讨两种钙离子拮抗剂SKF96365和LOE908对缺血再灌注损伤的兔心肌内皮素-1(endothelin,ET-1)表达的影响。方法健康雄性成年新西兰家兔32只,随机分为4组(n=8):假手术对照(Sham)组、心肌缺血再灌注(I/R)组、SKF96365(SKF)组和LOE908组。开胸后心脏适应10 min,Sham组用4-0丝线仅穿过而不结扎冠脉左前降支上1/3处30 min,再观察120 min;I/R组用4-0丝线结扎冠脉左前降支上1/3处30 min,再恢复灌注120 min;SKF组和LOE908组在I/R组基础上,于恢复灌注即刻分别静脉注射0.06 mg/kg SKF96365和0.1 mg/kg LOE908,4组家兔于再灌注后30、60、120 min检测静脉血ET-1浓度变化,比较各组静脉血乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK-MB)含量,检测心肌梗死面积。结果与Sham组相比,I/R组、SKF组和LOE908组静脉血ET-1浓度随心肌再灌注时间延长而上升(P<0.05);与I/R组相比,SKF组和LOE908组中LDH与CKMB水平均降低(P<0.05),梗死面积减少(P<0.05);与LOE908组比较,SKF组再灌注120 min后LDH、CK-MB水平及心肌梗死面积均显著减少(P<0.05)。结论静脉血ET-1随心肌再灌注时间的延长而升高,而SKF96365和LOE908这两种钙离子拮抗剂能抑制其表达,而在心肌再灌注120 min时,SKF96365对缺血再灌注损伤心肌的保护作用比LOE908更显著。

钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365对慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性的作用

目的:观察钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365对小鼠慢性哮喘模型气道重塑和气道高反应性的影响。方法:用鸡卵清白蛋白(OVA)致敏和激发小鼠,建立慢性哮喘模型,33只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组、SKF96365组,每组11只,其中SKF96365组于每次激发前30 min给予SKF96365(10mg/kg)干预。哮喘组和SKF96365组于第0、7、14 d腹腔注射(i.p)200μL致敏液(含OVA粉剂20μg、氢氧化铝凝胶2 mg);自第21天起,腹腔注射1%戊巴比妥钠(70mg戊巴比妥钠/kg小鼠体重)麻醉小鼠后,OVA(40μg)滴鼻(i.n),连续6周,每周3次,共18次。对照组则在相同时间给予相应剂量的生理盐水腹腔注射和滴鼻。最后一次激发后24 h,各组分别随机取5只小鼠用于检测组织病理学变化,另6只小鼠采用Buxco小动物肺功能仪检测气道高反应性。其中组织病理学检测计算杯状细胞(过碘酸希夫染色阳性,PAS+)、胶原细胞(Masson阳性)和平滑肌细胞(α-SMA阳性)阳染面积/支气管基底膜周长值来评估小鼠气道重塑;观察给予不同浓度乙酰甲胆碱雾化时的气道阻力(resistance index,RI)最大值,评估小鼠气道高反应性。结果:对照组未见PAS阳性染色区域,哮喘组和SKF96365组杯状细胞增生高于对照组(7.29±2.04,4.49±1.70 vs 0.00±0.00,均P<0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P<0.05)。Masson染色显示哮喘组和SKF96365组上皮下胶原沉积高于对照组(9.23±1.41,7.30±1.33 vs 1.60±0.77,均P<0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P<0.05)。α-SMA免疫组化显示哮喘组和SKF96365组平滑肌增生肥大高于对照组(4.54±1.05,3.15±0.57 vs 1.97±0.69,均P<0.05),且SKF96365组低于哮喘组(P<0.05)。当乙酰甲胆碱(Mch)≤6.25 mg/m L时,3组小鼠气道阻力无显著差异(P>0.05),当25 mg/m L>Mch≥12.25 mg/m L时,哮喘组小鼠气道阻力明显大于对照组小鼠(P<0.001),当Mch≥25 mg/m L时,哮喘组小鼠气道阻力大于SKF96365组(P<0.05)。结论:采用SKF96365干预后,慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性指标均有改善,提示SKF96365可能对哮喘气道重塑和气道高反应性具有抑制作用。

基质交感分子1抑制剂SKF96365在动脉粥样硬化中的保护效应研究

目的探讨基质交感分子1(STIM1)抑制剂SKF96365在动脉粥样硬化中的保护效应及其具体机制。方法C57BL/6J小鼠做正常对照组(n=10),ApoE基因缺陷(ApoE-/-)小鼠(n=30)给予高脂饲料饮食,制备动脉粥样硬化(AS)模型,其中ApoE-/-小鼠不做任何处理(模型组,n=10);自ApoE-/-小鼠16周龄起连续给予阿托伐他汀钙(10 mg/kg·d)连续灌胃治疗持续8周(他汀治疗组,n=10);自ApoE-/-小鼠16周龄起连续给予SFK96365(10 mg/kg·d)皮下注射治疗持续8周(SKF96365治疗组,n=10);观察血脂及动脉粥样硬化斑块病理变化;Western blot检测组织中STIM1、pJNK、NF-κB、MMP-9蛋白的表达。结果SKF96365组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)显著低于模型组(P<0.05)。SKF96365组STIM1蛋白水平均显著低于模型组。SKF96365组p-JNK,NF-κB,MMP-9蛋白均显著低于模型组(P<0.05)。结论SKF96365可能通过减轻ApoE-/-小鼠动脉血管内的氧化应激及炎症损伤;影响MMP-9蛋白活性的表达,增加斑块的稳定性。

TRPC通道对PC12细胞缺氧缺糖再灌注后氧化损伤的保护作用

瞬时受体电位C通道(transient receptor potential canonical,TRPC)属于瞬时受体电位(TRP)离子通道家族成员之一,与Ca2+调控及氧化应激关系密切.然而,TRPC通道在缺血缺氧性脑损伤中的作用仍有争议.本实验采用MTT法、台盼蓝排斥实验、LDH漏出实验联合Annexin/PI染色流式分析等显示,当采用通道阻断剂—SKF96365特异阻断TRPC通道时,PC12细胞对缺氧缺糖再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD-R)引起的损伤变得更敏感,细胞凋亡增加.尽管同时采用SKF96365、NMDA受体、AMPA受体和L-型钙通道阻断剂可引起细胞损伤和死亡减弱,但仍呈现明显的SKF96365浓度依懒性,提示TRPC通道参与细胞对缺氧缺糖再灌注耐受的调节,具有保护作用.钙指示剂Fluo-3AM荧光标记结合激光共聚焦显微镜分析显示,SKF96365可明显降低缺氧缺糖再灌注后细胞内的Ca2+浓度.总之,实验结果提示,TRPC通道对缺氧缺糖再灌注引起的细胞损伤和凋亡具有保护作用,其机制可能涉及TRPC通道对细胞内钙浓度的调节,详尽机制有待进一步研究.