化瘀祛湿方对miR⁃21靶向Skp2介导早期膝骨关节炎软骨细胞自噬的影响

目的:研究miR‑21‑5p介导Skp2对膝OA软骨细胞自噬影响,探讨化瘀祛湿方对膝OA软骨细胞的保护作用。方法:(1)取全膝关节置换术的人体膝OA软骨组织,采用FISH单染试验检测miR‑21‑5p表达和定位,免疫荧光检测Skp2表达,TUNEL染色试验检测膝OA细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl‑2、Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ和Skp2相对表达量;(2)取SD大鼠36只,按随机数字法分为正常对照组、假手术组、模型组、模型+空载组、模型+miR‑21‑5p干扰组、模型+化瘀祛湿方组6组,每组6只;采用石蜡切片阿利新蓝染色观察软骨形态结构,qPCR、Western blot法检测各组软骨组织Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ、Skp2相对表达量,免疫组化检测Skp2的IOD/Area值。结果:FISH检测显示miR‑21‑5p在人体膝OA软骨组织中高表达,免疫荧光检测表明Skp2在人体膝OA软骨组织中低表达;TUNEL检测发现,人体膝OA软骨组织凋亡显著增加;Western blot法检测显示,与正常对照组相比,人体膝OA软骨组织中Bax、CARM1相对表达量较正常组显著升高,而Bcl‑2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Skp2相对表达量明显降低,Beclin1相对表达量稍降低(P<0.05)。动物实验显示,采用miR‑21‑5p干扰处理后,Beclin1、CARM1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著下降,Skp2稍降低;免疫组化检测发现Skp2 IOD/Area值与正常对照组相比,模型组IOD/Area值显著降低(P<0.05);与模型组相比,模型+化瘀祛湿方组IOD/Area值显著升高(P<0.05);石蜡切片阿利新蓝染色显示与假手术照组相比,模型+空载组、模型+miR‑21‑5p干扰组蓝色变浅,但模型组蓝色变深,模型+化瘀祛湿组蓝色较为明显。结论:miR‑21‑5p可负向调控Skp2,介导膝OA软骨细胞自噬,加速OA发展;化瘀祛湿方可能通过抑制miR‑21‑5p,提高Skp2表达,起到延缓膝OA退变的作用。

松果菊苷下调Skp2的表达抑制胶质母细胞瘤上皮间质转化及胶质瘤干细胞干性

目的研究松果菊苷(ECH)对胶质母细胞瘤(GBM)的上皮间质转化(EMT)及其对GBM干细胞的影响,并探讨其分子机制。方法①体外实验:将GBM U87和U251细胞以0、5、10和20μmol·L^(-1) ECH浓度处理24 h。采用CCK-8法评估细胞活性;进行克隆形成实验以测定克隆能力;通过Transwell实验评估迁移和侵袭能力;利用球形成实验评价GBM干细胞的成球能力;通过细胞免疫荧光检测干细胞标志物;使用Western blot分析EMT和干细胞相关蛋白表达。②体内实验:在裸鼠皮下注射U87细胞,每组5只。实验组腹腔注射ECH,对照组注射等体积溶剂。最后测定肿瘤体积、重量和体重,并用Western blot分析肿瘤中的Skp2、EMT和干细胞相关蛋白表达。结果①体外实验显示,相较于0μmol·L^(-1) ECH组,10、20μmol·L^(-1) ECH处理显著降低了细胞活性(P<0.05);在5、10和20μmol·L^(-1) ECH组中克隆形成数量显著减少(P<0.05);迁移和侵袭能力在5、10μmol·L^(-1) ECH组中随浓度升高而降低(P<0.05);成球能力和干细胞标志物表达及Skp2、EMT和干细胞特性相关蛋白表达在5、10μmol·L^(-1) ECH组中均显著降低(P<0.05)。②体内实验显示,ECH处理小鼠的肿瘤体积和重量显著小于对照组(P<0.05),且Skp2、EMT(Vimentin、Snail)和干细胞标志物(Sox2、Nestin)的表达显著减少(P<0.05);两组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。结论ECH通过降低Skp2表达抑制GBM的EMT和干细胞特性。

CircCSNK1G1调节miR-381-3p/Skp2轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的研究

目的探究CircCSNK1G1调节miR-381-3p/S期激酶相关蛋白2(Skp2)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法将HGC-27细胞分为未转染组、si-NC组、si-CircCSNK1G1组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-NC组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-381-3p组。qRT-PCR分别检测GC肿瘤组织和GC不同细胞系中CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆数量;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell小室法测定细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;双荧光素酶实验验证CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2三者的靶向关系。结果与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,GC肿瘤组织和GC细胞系中的CircCSNK1G1、Skp2 mRNA高表达,miR-381-3p低表达(P<0.05),且HGC-27细胞中miR-381-3p表达水平最低,CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达最高,因此后续选用HGC-27细胞并敲低CircCSNK1G1进行实验。与未转染组和si-CircCSNK1G1-NC组相比,转染si-CircCSNK1G1能够降低HGC-27细胞中CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达、细胞增殖活性、细胞迁移数以及Vimentin蛋白表达(P<0.05),提高miR-381-3p的表达、细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了CircCSNK1G1、Skp2均与miR-381-3p存在靶向关系,而且CircCSNK1G1可作为miR-381-3p的海绵RNA,进一步调节Skp2的表达和活性。结论敲低CircCSNK1G1能够靶向上调miR-381-3p表达,抑制Skp2表达,进而促进GC细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。

Skp2和P27^(kip1)在前列腺癌组织中的表达与临床病理特征的相关性研究

背景及目的:F-box蛋白Skp2参与细胞周期抑制蛋白P27kip1泛素化降解,研究发现Skp2在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中表达增加。本研究旨在探讨Skp2和P27kip1在前列腺癌组织中的表达及与前列腺癌各项临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。方法:用免疫组化EnVisionTM方法检测Skp2和P27kip1蛋白在41例前列腺癌和20例良性前列腺增生组织中的表达情况。结果:在前列腺癌中的Skp2蛋白阳性率犤(8.52±2.40)%犦显著高于良性前列腺增生犤(0.21±0.15)%犦(P<0.001)。Skp2蛋白表达与前列腺癌术前血清前列腺特异性抗原(PSA)水平(r=0.360,P=0.021)、局部浸润(r=0.570,P<0.001)、肿瘤分期(r=0.531,P<0.001)、病理分级(r=0.514,P=0.001)呈正相关。在前列腺癌中的P27kip1蛋白阳性率犤(70.71±4.25)%犦显著低于良性前列腺增生犤(97.21±2.10)%犦(P<0.001)。P27kip1蛋白表达与前列腺癌术前PSA水平(r=-0.399,P=0.010)、局部浸润(r=-0.329,P=0.036)、肿瘤分期(r=-0.453,P=0.003)、病理分级(r=-0.290,P=0.046)呈负相关。前列腺癌中P27kip1蛋白与Skp2表达呈负相关(r=-0.572,P<0.001)。结论:前列腺癌中Skp2蛋白表达与靶蛋白P27kip1蛋白降解有关,提示Skp2蛋白可能与前列腺癌的发生发展有关。

甲状腺乳头状癌及相关病变Jab1、Skp2和p27蛋白的表达及意义

目的探讨细胞周期有关的因子c-Jun激活区域结合蛋白-1(Jab1)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)和细胞周期素依赖激酶抑制剂p27蛋白在结节性甲状腺肿、桥本甲状腺炎和甲状腺乳头状癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测结节性甲状腺肿、桥本甲状腺炎、伴结节性甲状腺肿的甲状腺乳头状癌和伴桥本甲状腺炎的甲状腺乳头状癌中Jab1、Skp2和p27蛋白的表达。结果Jab1、Skp2蛋白的阳性表达率在伴结节性甲状腺肿的甲状腺乳头状癌者(86.9%、82.6%)和伴桥本甲状腺炎的甲状腺乳头状癌者(83.3%、66.7%)均分别明显高于结节性甲状腺肿者(26.3%、0%)和桥本甲状腺炎者(23.8%、4.8%)(P<0.01)。p27蛋白的阳性表达率在伴结节性甲状腺肿的甲状腺乳头状癌者(39.1%)和伴桥本甲状腺炎的甲状腺乳头状癌者(45.6%)均分别明显低于结节性甲状腺肿者(89.5%)和桥本甲状腺炎者(100%)(P<0.01)。甲状腺乳头状癌中,癌组织>1 cm者Jab1蛋白阳性表达率明显高于癌组织≤1 cm者(P<0.01);Jab1和Skp2蛋白表达与p27蛋白表达均呈负相关性(rs=-0.344,P=0.028;rs=-0.421,P=0.006);Jab1蛋白表达与Skp2蛋白表达呈正相关性(rs=0.43,P=0.005);肿瘤侵袭区域Jab1蛋白表达阳性的细胞百分率(61.22±8.99)%明显高于肿瘤中心区域(42.61±9.46)%(P<0.01)。结论Jab1、Skp2和p27蛋白表达可能参与结节性甲状腺肿和桥本甲状腺炎癌变为甲状腺乳头状癌的过程,甲状腺乳头状癌中Jab1、Skp2和p27蛋白表达之间可能存在相互调节的关系,Jab1蛋白表达可能与甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭有关。

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.

SKP2在食管癌组织中的表达及其临床意义

目的研究细胞S期激酶相关蛋白SKP2(S-PHASE KINASE-ASSOCIATED PROTEIN2)在食管癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化S-P方法检测121例食管癌组织中SKP2蛋白与P27蛋白的表达水平和90例正常食管组织中的SKP2蛋白表达水平。结果SKP2蛋白表达率在食管癌中为64.4%(78/121),而正常食管组织中为13.3%(12/90),差异有显著性(P<0.05)。SKP2蛋白阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05),与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。SKP2与P27表达呈显著负相关(P<0.05)。结论从蛋白水平证明SKP2异常表达可促进食管癌的发生发展,并将可能为食管癌的早期诊断和治疗提供新的手段。

Skp2反义寡核苷酸对K562细胞生长和增殖的影响

背景与目的:泛素-蛋白酶体途径是真核细胞中选择性降解短寿命蛋白的重要途径。S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase-associatedprotein2,Skp2)是此途径中的一个重要组件,它是决定细胞周期素依赖性激酶抑制因子p27降解的关键蛋白。近年来,在实体瘤的研究中发现Skp2是癌蛋白,能促进癌细胞的细胞周期进展,但在白血病细胞恶性增殖中所起的作用还未见报道。本实验旨在研究Skp2反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)对白血病细胞系K562细胞生长和增殖的影响及其可能的机制。方法:Skp2反义寡核苷酸和K562细胞共同培养,通过显微镜下观察、四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察K562细胞生长和增殖,流式细胞术分析细胞周期,逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)和细胞免疫化学测定Skp2mRNA、蛋白及p27mRNA、蛋白的表达。结果:Skp2反义寡核苷酸处理后,K562细胞增殖受抑,细胞周期阻滞于G0/G1期犤Skp2ASODN组(39.7±9.1)%,对照组(31.5±7.3)%,P<0.05犦。Skp2mRNA及Skp2蛋白水平降低;尽管p27mRNA未见改变,但其蛋白水平明显升高。结论:Skp2反义寡核苷酸能抑制K562细胞增殖,这种抑制作用主要是通过调控泛素-蛋白酶体途径,进而影响细胞周期进展而实现的。

Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p靶向SKP2缓解支气管肺发育不良

目的探讨来源于Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)外泌体(exosomal,Exos)-miR-21-5p(简称miR-21)靶向S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,SKP2)对支气管肺泡发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保护效应及作用机制。方法使用60只6~8周龄的SD大鼠,其中30只通过差速贴壁离心法提取原代AEC-Ⅱ并进行培养。密度梯度离心法用于获得AEC-Ⅱ来源的外泌体,密度梯度离心法用于提取AEC-Ⅱ培养基中囊泡,并通过透射电镜及粒径分析对其验证,双荧光素报告基因实验以确认miR-21与SKP2的靶向关系。剩余的30只大鼠按照3∶1的雌雄比例混合,以便于进行怀孕检测。将这些新生小鼠随机分为4个不同的实验组:空气对照组(Con组)、高氧处理组(BPD+PBS组)、接受高氧和外泌体治疗的小鼠(BPD+Exos-miR-21组),以及高氧联合外泌体miR-21抑制剂处理组(BPD+Exos-AV-miR-21组)。新生SD大鼠将暴露于85%的氧气环境中,以此建立BPD模型。经过14 d高氧处理后,使用RTq-PCR技术检测肺组织和外泌体中miR-21的表达水平。肺组织经HE染色观察其病理学变化,并计算了平均肺泡线性截距(MLI)和放射状肺泡计数(RAC)。分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)的水平,荧光分光光度法测定活性氧簇(ROS)水平。此外,利用Western blot技术检测了SKP2、NR2F2和VEGF-A蛋白的表达水平。结果电镜及粒径分析结果显示AEC-Ⅱ细胞提取的小泡结构物质属于外泌体,miR-21在外泌体中表达显著上调(P<0.01),双荧光素酶基因报告实验证实SKP2为miR-21的作用靶标。与Con组比较,BPD+PBS组及BPD+Exos-AVmiR-21组肺组织HE可见肺组织结构紊乱,肺泡增大、简化,ROS、MDA、MLI增高及SKP2蛋白表达升高(P<0.01);而RAC、SOD、T-AOC、miR-21下调及NR2F2、VEGF-A蛋白表达降低(P<0.01);与BPD+PBS组比较,BPD+Exos-miR-21组肺组织HE可见无肺泡数目增加,肺泡简化程度好转,同时MLI、ROS、MDA降低及SKP2蛋白表达降低(P<0.01);而ROC、SOD、T-AOC、miR-21上调及NR2F2、VEGF-A蛋白表达升高(P<0.01)。结论AEC-Ⅱ来源的Exos-miR-21可能靶向SKP2通过促进NR2F2、VEGF-A蛋白表达抑制氧化应激促进肺泡发育改善BPD。

胃癌中Cks1、p27^(Kip1)和Skp2蛋白的表达

目的探讨Cks1在胃癌发生及其在Skp2调节p27Kip1降解过程中的作用。方法应用流式细胞术测定正常胃粘膜和胃癌组织中Cks1、p27Kip1、Skp2蛋白表达。结果胃癌组织中Cks1、Skp2表达明显高于正常胃粘膜(χ2=22.69,P<0.05;χ2=13.42,P<0.05),而p27Kip1表达则低于正常胃粘膜(χ2=14.83,P<0.05)。胃癌中Cks1、Skp2表达与p27Kip1表达呈负相关(r=-0.649,P<0.05;r=-0.732,P<0.05);而Cks1蛋白表达与Skp2蛋白缺乏相关性(P>0.05)。胃癌中Cks1的表达与肿瘤分化程度相关(χ2=5.05,P<0.05),而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期不相关(P>0.05)。结论Cks1可能参与了胃癌的发生;胃癌中Cks1可能参与了Skp2调节p27Kip1泛素化降解过程。

口腔鳞状细胞癌中p27与Skp2蛋白表达及其意义的初步观察

目的:探讨p27与Skp2蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与口腔鳞状细胞癌临床病理之间的相互关系。方法:免疫组化SP法检测p27、Skp2蛋白在69例口腔鳞状细胞癌和12例正常口腔黏膜组织中的表达情况,并分析其与患者的年龄、性别、肿瘤的部位、临床分期、病理分级、颈淋巴结转移之间的相关性。结果:口腔鳞状细胞癌中p27蛋白的阳性率63.73%明显低于正常黏膜组织92.72%(P<0.05),Skp2蛋白在口腔鳞状细胞癌中的阳性率19.02%明显高于正常黏膜组织4.24%(P<0.05)。p27蛋白阳性表达率与肿瘤的临床分期、病理分级、颈淋巴结转移呈负相关(P<0.05),Skp2蛋白阳性表达率则与以上临床病理特征呈正相关(P<0.05);二者的阳性表达率与口腔鳞状细胞癌患者的年龄、性别、肿瘤部位无关(P>0.05)。p27蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达与Skp2蛋白呈负相关(P<0.05)。结论:Skp2蛋白表达与靶蛋白细胞周期抑制因子p27降解相关,可能参与了口腔鳞状细胞癌的发生、发展。联合检测p27和Skp2蛋白表达有助于判断口腔鳞状细胞癌的恶性程度和预后。

Cx43、Skp2在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及临床意义

背景与目的:间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是间隙连接蛋白家族的主要成员,在多种肿瘤细胞中表达下降。它在许多细胞系以依赖间隙连接(Gapjunction)的途径发挥抑癌作用。最近研究发现它还可能通过抑制S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein2,Skp2)的表达而起到抑制肿瘤生长的作用。Skp2是F鄄box蛋白家族的成员,它能特异性识别并促进某些调节G1期进程的关键性细胞周期调节物的降解,在许多肿瘤中表达升高。本研究检测Cx43和Skp2在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨它们的表达与卵巢癌发展的关系,以及这两种蛋白表达的相互关系。方法:收集81例卵巢上皮性肿瘤的外科手术石蜡标本(良性13例、交界性12例、恶性56例),用免疫组化的方法检测Cx43和Skp2蛋白的表达水平。分析它们的表达水平与临床病理参数的关系以及二者的相互关系。结果:Cx43蛋白在卵巢上皮性良性、交界性及恶性肿瘤中阳性率分别为84.6%、66.7%和33.9%,经免疫组化半定量分析,其在上皮性卵巢癌中的表达水平明显低于良性肿瘤(P<0.01)和交界性肿瘤(P<0.01),在不同年龄及组织类型的卵巢癌中表达无显著性差异(P>0.05),而在中低度分化组、Ⅲ～Ⅳ期组及有淋巴结转移组分别明显低于高分化组(P<0.05)、Ⅰ～Ⅱ期组(P<0.05)及无淋巴结转移组(P<0.

HeLa细胞中Skp2的表达调控p21WAFCIP1稳定性

泛素 蛋白酶体抑制剂MG 132处理的HeLa和SaoS 2细胞中 ,低表达的p2 1WAF CIP1受泛素 蛋白酶体通路调控 .为探讨肿瘤细胞中高表达的E3连接酶底物结合亚基 Skp2和低表达的p2 1WAF CIP1之间的关系 ,在HeLa细胞中转染Skp2的反义寡核苷酸后 ,p2 1表达水平明显升高 .同时 ,相对于转染空载体和Skp2ΔF(Skp2的F box缺失突变体 )的真核表达载体 ,转染全长Skp2的HeLa细胞中 ,p2 1表达水平显著下降 ,说明肿瘤细胞中Skp2调节p2 1的稳定性 ,并且这种调控作用依赖于Skp2蛋白中的F box结构 .免疫荧光结果表明 ,Skp2和p2 1共定位于细胞核 ,这为两者间的相互作用提供了前提 ;体内相互免疫共沉淀结果表明 ,p2 1和其它SCFSkp2 的底物一样与Skp2直接结合 ,并且它们之间的结合区不在F box结构域 ,这一结果在体外的GST

Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的相关性研究

目的从蛋白水平研究Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的相关性。方法采用En Vision两步法检测30例乳腺正常组织,30例导管上皮不典型增生组织（ADH）、30例导管原位癌（DCIS）和56例浸润性导管癌（非特殊类型）（IDC）中Skp2和p27Kip1的表达水平,并分析Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的关系。结果 1ADH组、DCIS组及IDC组的Skp2阳性率均高于正常对照组（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）,IDC组和DCIS组高于ADH组（P〈0.01,P〈0.05）,IDC组又高于DCIS组（P〈0.01）。ADH组、DCIS组和IDC组p27kip1阳性率均低于正常对照组（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）,IDC组和DCIS组均低于ADH组（P〈0.01,P〈0.05）,IDC组又低于DCIS组（P〈0.01）。2IDC伴淋巴结转移组Skp2阳性率显著高于DCIS淋巴结转移组（P〈0.05）;IDCⅢ级高于IDCⅠ-Ⅱ级（P〈0.01）。反之,p27kip1阳性率在IDC伴淋巴结转移组低于无淋巴结转移组（P〈0.05）;IDCⅢ级低于Ⅰ-Ⅱ级（P〈0.01）。结论 Skp2与p27Kip1异常表达与乳腺癌发生、病理分级和淋巴结转移有密切相关性。

p27和Skp2在大肠癌中表达及临床病理关系研究

目的:研究大肠癌组织p27和Skp2蛋白表达,以及p27和Skp2表达与临床病理关系,探讨两者之间相关性。方法:采用免疫组织化学SP法检测30例大肠癌标本组织和18例正常大肠粘膜组织p27和Skp2蛋白表达。结果:p27在正常大肠粘膜组织中平均阳性率为55.2%,显著高于大肠癌组织(27.5%,P<0.05)。p27表达与大肠癌分化程度,Dukes'分期及淋巴结转移呈显著性负相关(P<0.05)。Skp2在大肠癌组织中平均阳性率为9.5%,显著高于正常大肠粘膜组织(1.8%,P<0.05)。Skp2表达与大肠癌分化程度呈显著性负相关(P<0.05),与患者年龄,性别,Dukes'分期及淋巴结转移无明显相关(P>0.05)。大肠癌中p27与Skp2表达呈负相关(r=-0.806,P<0.01)。结论:大肠癌中Skp2与p27降解有关,Skp2是大肠癌致癌基因,参与了大肠癌发生,可能成为大肠癌治疗新靶点。

PI3K信号通路通过SKP2、p27调控肺癌细胞H446,A549增殖

目的探讨PI3K信号通路调控肺癌细胞增殖机制。方法培养肺癌细胞系H446和A549,LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;Western blot法检测PI3K信号下游蛋白SKP2、p27表达变化;FCM分析细胞周期变化。结果与对照组相比,处理组细胞生长速率受到抑制;Western blot结果显示H446、A549细胞中的SKP2蛋白表达水平降低,而p27蛋白表达水平升高;FCM结果表明抑制剂处理后肿瘤细胞阻滞于G1期。结论结果提示肺癌细胞中PI3K信号通路参与SKP2蛋白的表达调控,从而影响p27蛋白的降解,促进细胞周期,加速细胞增殖。

非小细胞肺癌中Skp2的表达及其与p27蛋白表达的关系

背景与目的S期激酶相关蛋白2(Skp2)是细胞周期正性调节因子之一,它能促进周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27的泛素化蛋白水解,在肿瘤中过表达,本研究旨在探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)中Skp2表达的临床意义及其与p27蛋白表达的关系。方法应用组织芯片和免疫组织化学方法检测Skp2和p27在68例NSCLC组织和17例正常支气管上皮细胞中的表达。结果Skp2仅在肺癌组织中表达,且与患者的组织学类型(P=0.039),肿瘤细胞的分化程度(P=0.016),性别(P=0.012)和吸烟与否(P=0.026)显著相关,而与患者的年龄和TNM分期无关。p27在正常支气管上皮细胞中均有表达,在肺癌组织中表达降低;Skp2阳性表达的患者中p27表达明显降低,两者呈负相关(P=0.021)。结论在NSCLC中,Skp2蛋白表达的增高与p27泛素化依赖的蛋白降解有关,提示Skp2蛋白过表达在NSCLC的发生和发展中可能起重要作用。

Skp2和p27在宫颈癌组织的表达及临床意义

目的:探讨Skp2、p27在宫颈癌的表达、两者的相关性,以及与临床病理因素和预后的关系。方法:用免疫组化SP法检测65例宫颈鳞状细胞癌(SCC),20例高级别宫颈上皮内瘤变(CIN)中Skp2、p27的表达,以60例正常宫颈组织(NCT)为对照。结果:(1)Skp2在SCC组的阳性表达率为55.4%,明显高于高级别CIN组的25.0%(P<0.05)及NCT组的6.7%(P<0.01);(2)p27在SCC组的阳性表达率为52.3%,明显低于高级别CIN组的85.0%(P<0.01)及NCT组的98.3%(P<0.01);(3)半定量分析表明SCC中Skp2、p27表达与年龄、肿瘤大小、临床分期无明显关系(P>0.05),而与肿瘤的病理分级、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移密切相关(P<0.05);(4)宫颈癌中Skp2阳性表达组的5年生存率(52.78%)明显低于Skp2阴性组(68.93%),Kaplan-Meier生存率分析,Log-rank=8.60,P=0.0034。而p27阳性表达组的5年生存率(70.59%)明显高于阴性表达组(58.38%),Log-rank=8.33,P=0.0039;经Spearman等级相关分析表明,宫颈癌中Skp2和p27的表达呈显著负相关,相关系数r=-0.311,P=0.015。结论:Skp2表达增强与宫颈癌的发生、发展密切相关,其表达水平越高提示患者预后越差;p27的表达正相反,并且两者的表达呈负相关。联合检测Skp2和p27的表达对判断宫颈癌的恶性潜能和预后具有重要的参考价值;两者可作为宫颈癌的预后指标,为宫颈癌的治疗提供新的靶点。

skp2,C-myc在肝细胞肝癌中的表达及其意义

目的研究skp 2和C-myc在肝细胞肝癌组织中的表达及其与临床病理指标的关系。方法用免疫组化PV 9 0 0 0二步法检测skp 2和C-myc蛋白在4 8例肝细胞肝癌、2 0例肝硬化患者和1 6例正常肝组织中的表达。结果肝细胞肝癌组织中skp 2的阳性表达率(3 3.3%)显著高于肝硬化组织(均为阴性表达)(P=0.0 0 8)和正常肝组织(均为阴性表达)(P=0.0 2 0)。skp 2在肝细胞肝癌中的表达与组织分化程度及转移有关(P<0.0 0 1及P=0.0 1 7),但与肿瘤大小无关(P=0.058),skp 2在高分化肝细胞肝癌中无表达。肝细胞癌组织中C-myc蛋白的的阳性表达率为5 8.3%,显著高于肝硬化组织的1 5%(P=0.0 0 1)和正常肝组织(阴性表达)(P<0.0 0 1)。C-myc蛋白阳性表达与组织分化程度、转移及肿瘤大小有关,组间差异依次为P<0.0 0 1,=0.0 2 3及=0.0 0 7。肝细胞癌中skp 2蛋白的表达与C-myc的表达呈正相关(r=0.5 0 8,P<0.0 0 1)。结论C-myc可能与肝细胞肝癌的发生发展有关。Skp 2的表达提示预后不良。C-myc可能对skp 2的表达起正性调节作用。

慢性粒细胞白血病细胞中Skp2的表达及其临床意义

目的 研究慢性粒细胞白血病 (CML)细胞中S期激酶相关蛋白 2 (Skp2 )的表达及其与p2 7的关系。方法 用免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)分别检测CML细胞中Skp2和p2 7蛋白水平及转录水平的表达。结果 免疫细胞化学染色显示 ,CML细胞Skp2蛋白表达增高 (14 .3%± 2 .9% ) ,与正常对照 (8.6 %± 0 .9% )相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;CML细胞中Skp2蛋白和p2 7蛋白呈负相关 (r=- 0 .75 ,P =0 .0 0 1)。但RT PCR结果显示 ,Skp2蛋白过度表达的CML细胞中p2 7mRNA未见明显变化。结论 Skp2在调控p2 7蛋白表达过程中起重要作用 。