等位基因特异扩增实时定量PCR检测新生儿高胆红素血症相关基因SLC01B1 A388G多态性

目的建立检测高胆红素血症相关基因SLC01B1 A388G多态性位点的等位基因特异扩增实时定量PCR（allele-specific real-time PCR，ASPCR）方法，用于临床样本的检测和分析。方法针对SLC01B1基因A388G多态性位点设计引物，建立检测方法。构建野生型和突变型质粒标准品，并选取50例临床样本，其中已确诊并存在SLC01B1基因A388G突变的新生儿高胆血红素症病例30例，不存在SLC01B1基因A388G突变的健康新生儿20例，使用特异性引物和非特异性引物分别检测野生型质粒、突变型质粒和临床样本，根据二者Ct（cycle threshold）值判断是否存在A388G多态性位点。评价方法的准确性、灵敏度和特异性。结果特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差（△Ct）可达13．97±0．75，ASPCR法能正确区分野生型和突变型质粒，Probit回归分析显示其灵敏度可以达到5．28拷贝／μL。临床样本存在A388G突变的Ct值均远小于37．75，为阳性结果；不存在A388G突变的未见任何扩增或Ct值大于37．75，可判为阴性。结论ASPCR是一种快速、简便、有效的检测临床样本SLC01B1基因A388G多态性位点的方法，可用于大样本筛查新生儿高胆红素血症基因位点。