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基于CRISPR/Cas9系统建立新吉富罗非鱼双等位基因敲除技术——以SLC24A5基因为例
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作者 张佳聪 鲁纪刚 《生物技术进展》 2024年第3期442-450,共9页
目前,簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白Cas9系统(CRISPR/Cas9)已经成为提高真核生物基因组编辑效率的主要技术。然而,对于像罗非鱼这样繁殖周期较长的物种,CRISPR... 目前,簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白Cas9系统(CRISPR/Cas9)已经成为提高真核生物基因组编辑效率的主要技术。然而,对于像罗非鱼这样繁殖周期较长的物种,CRISPR/Cas9技术由于低纯合效率,在进行大规模遗传筛选研究时面临一定的困难。为了解决这一问题,以罗非鱼为模型,以SLC24A5基因为例,开发了一种高效的CRISPR/Cas9方法,能够在注射的胚胎中以相对稳定的概率直接实现F_(0)代的双等位基因敲除。具体而言,采用两个高效的gRNA进行混合,Cas9蛋白的浓度为800 ng·μL^(-1),Cas9蛋白与gRNA的质量比例为4:1,注射剂量控制在1 nL,即800 pg的Cas9蛋白和200 pg的gRNA。这一敲除技术使得在新吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)的F_(0)代注射胚胎中,能够直接产生表型外显率(Lv.1、Lv.2、Lv.3和Lv.4)为71%的个体,其中显著表型外显率(Lv.1和Lv.2)为17%。这一技术突破为罗非鱼的遗传筛选提供了便利和高效的手段。 展开更多
关键词 新吉富罗非鱼 双等位基因敲除 敲除效率 CRISPR/Cas9 slc24a5
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鸡Slc24a5基因的cDNA克隆、表达分析及其与黑色素沉积的关系研究(英文) 被引量:9
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作者 罗娟 张炜 +2 位作者 于冰 胡晓湘 李宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第1期69-76,共8页
黑色素是一种由醌/吲哚-醌来源的混合物组成的生物高分子化合物.目前在小鼠中已发现的和黑色素沉积相关的基因已经超过了100个.Slc24a5(solute carrier family24,member5)基因是在斑马鱼中克隆的一个新基因.研究表明,Slc24a5基因可以调... 黑色素是一种由醌/吲哚-醌来源的混合物组成的生物高分子化合物.目前在小鼠中已发现的和黑色素沉积相关的基因已经超过了100个.Slc24a5(solute carrier family24,member5)基因是在斑马鱼中克隆的一个新基因.研究表明,Slc24a5基因可以调控斑马鱼中的黑色素沉积.鸡作为一种模式动物,已经广泛地被应用于实验研究.为了研究Slc24a5基因在鸡中的情况,克隆了鸡Slc24a5基因全长CDS,并且分析了其与黑色素沉积的关系.鸡Slc24a5基因全长CDS为1269bp,编码一个423氨基酸残基的蛋白质.该蛋白质比哺乳动物中的少大约80个氨基酸残基.基因全长超过11kb,包含8个内含子和9个外显子.RT-PCR结果显示,鸡Slc24a5基因在多处组织表达(眼、脑、皮、肉、心、肝、肾和肺).通过荧光实时定量PCR对不同鸡种中的Slc24a5基因表达量进行检测,发现其在白莱杭,乌骨鸡和北京油鸡的眼睛中表达量很高.并且在乌骨鸡的皮肤和肌肉中Slc24a5基因也有很高的表达.乌骨鸡眼睛中的Slc24a5基因表达量为白莱杭的2倍.而在乌骨鸡皮肤中,Slc24a5基因表达量为白莱杭的70倍,为北京油鸡的15倍.Slc24a5基因在乌骨鸡肌肉中的表达量为白莱杭的15倍,为北京油鸡的3倍.同时通过对这3个鸡种中黑色素在各组织中沉积量进行分析,发现黑色素沉积越多的地方,Slc24a5基因表达量越高.这些结果表明鸡Slc24a5基因的表达与鸡中黑色素的沉积相关. 展开更多
关键词 slc24a5 黑色素
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SLC24A5基因影响脊椎动物色素沉积的研究进展 被引量:7
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作者 曹绣娟 孙守荣 +4 位作者 王鑫玉 谭玉文 赵珊 毛华明 邓卫东 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第5期52-56,共5页
黑色素广泛分布于细菌、真菌、植物和动物体内并扮演了重要的作用。人类浅色皮肤的色素沉积是由于黑色素细胞内黑色素小体数量、大小和密度的减少造成的,而黑色素小体变化也导致斑马鱼由灰色突变为金色,这个金色突变位点编码一个推定的... 黑色素广泛分布于细菌、真菌、植物和动物体内并扮演了重要的作用。人类浅色皮肤的色素沉积是由于黑色素细胞内黑色素小体数量、大小和密度的减少造成的,而黑色素小体变化也导致斑马鱼由灰色突变为金色,这个金色突变位点编码一个推定的阳离子交换体SLC24A5基因,该基因位于黑色素小体或其前体的细胞膜上。人类和斑马鱼在这个基因的序列及功能上有很高的同源性。该基因的多态性主要出现在非洲和东亚人身上。而等位基因固定在欧洲人的身上,这与局部杂和性大量减少和较浅的皮肤色素沉积有关,表明SLC24A5基因在人类色素沉积方面起关键作用。作者总结了SLC24A5基因与黑色素的研究进展,并简要介绍了乌骨绵羊的发现及其分子特征。 展开更多
关键词 slc24a5 色素沉积 黑色素小体 乌骨绵羊
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他留乌骨鸡SLC24A5基因Nhe I mismatch PCR-RFLP标记与羽色及肤色相关性研究 被引量:5
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作者 滕召纯 孙利民 +5 位作者 陆晓屏 李庆华 王玉祥 黄英 张斌 史宪伟 《中国家禽》 北大核心 2014年第15期6-9,13,共5页
采用PCR测序与PCR-RFLP技术,研究了SLC24A5基因变异与他留乌骨鸡羽色及肤色的关系。通过对他留乌骨鸡麻羽、白羽和黑羽3个品系以及乌骨与非乌骨2个类型的SLC24A5基因个体测序,共检测到19个SNP位点,其中3个位点引起氨基酸变异。采用每个... 采用PCR测序与PCR-RFLP技术,研究了SLC24A5基因变异与他留乌骨鸡羽色及肤色的关系。通过对他留乌骨鸡麻羽、白羽和黑羽3个品系以及乌骨与非乌骨2个类型的SLC24A5基因个体测序,共检测到19个SNP位点,其中3个位点引起氨基酸变异。采用每个品系或类型PCR扩增池测序技术,确定了每个SNP位点在不同品系或类型的基因频率,在分析基因频率差异及SNP变异特性的基础上,针对G482C位点,建立了Nhe I mismatch PCR-RFLP分子标记。利用该遗传标记对所有受试个体进行基因分型,并分析其与羽色肤色性状的相关性。结果表明,SLC24A5基因Nhe I mismatch PCR-RFLP分子标记与肤色性状显著相关。 展开更多
关键词 slc24a5基因 SNP RFLP 羽色 乌色
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Slc24a5在不同毛色绵羊皮肤中的表达和定位研究 被引量:2
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作者 田雪 孟晓林 +2 位作者 李学军 孟立霞 董常生 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第4期125-129,共5页
为研究阳离子交换体(solute carrier family 24member 5,Slc24a5)在不同毛色绵羊皮肤中的表达情况,探究其与毛色形成之间的关系采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析黑色和白色绵羊皮肤中Slc24a5的相对表达量,并运用Western blot和免... 为研究阳离子交换体(solute carrier family 24member 5,Slc24a5)在不同毛色绵羊皮肤中的表达情况,探究其与毛色形成之间的关系采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析黑色和白色绵羊皮肤中Slc24a5的相对表达量,并运用Western blot和免疫组织化学方法对不同体色绵羊皮肤中Slc24a5蛋白的表达和定位情况进行分析.结果显示:Slc24a5基因在黑色绵羊皮肤组织中的相对表达量是白色绵羊皮肤组织的20.53倍(P<0.01);Western blot印迹结果证实绵羊皮肤组织总蛋白中存在分子量约为51kD的蛋白质条带,且黑色绵羊皮肤平均蛋白表达量显著高于白色绵羊(P<0.01).免疫组织化学结果显示,Slc24a5在绵羊皮肤毛囊外根鞘和毛基质处均呈阳性表达,且根据光密度值分析显示,Slc24a5在黑色绵羊中的平均蛋白质表达量显著高于白色绵羊.以上研究结果显示Slc24a5可能与绵羊毛色形成具有一定的相关性. 展开更多
关键词 阳离子交换体(slc24a5) 绵羊 表达 定位
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瓢鸡SLC24A5基因多态性与肤色性状的关联分析 被引量:3
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作者 李杨 杨向东 +3 位作者 谷合勇 王静 张斌 史宪伟 《家畜生态学报》 北大核心 2015年第7期16-19,共4页
利用DNA测序与PCR-RFLP方法,分析瓢鸡溶质载体24家族A5成员(SLC24A5)基因多态性,并与肤色性状进行了关联分析。结果表明,在SLC24A5基因第4外显子发现G482C多态位点,引起161位苏氨酸变为丝氨酸(T161S),建立了引入酶切位点的错配Nhe I PCR... 利用DNA测序与PCR-RFLP方法,分析瓢鸡溶质载体24家族A5成员(SLC24A5)基因多态性,并与肤色性状进行了关联分析。结果表明,在SLC24A5基因第4外显子发现G482C多态位点,引起161位苏氨酸变为丝氨酸(T161S),建立了引入酶切位点的错配Nhe I PCR-RFLP分子标记,利用该标记对52只白肤色与44只黑肤色瓢鸡个体进行了基因分型。试验结果提示,SLC24A5 NheI PCR-RFLP标记与肤色性状具有显著的相关性(P<0.05),G等位基因在白肤色群体和黑肤色群体均为优势基因,黑肤色群体的C等位基因频率显著高于白肤色群体。 展开更多
关键词 slc24a5基因 SNP RFLP 肤色
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SLC24A5,SLC39A9基因在黑线仓鼠及其A:CHA品系表达水平的比较分析
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作者 刘慧芳 孙书芳 +5 位作者 曾林 曹玉华 严翔 范君文 孙兆增 王新 《实验动物与比较医学》 CAS 2014年第6期438-442,共5页
目的 比较可溶性物质运输蛋白SLC24A5(solute carrier family 24,member5,SLC24A5)和SLC39A9(solute carrier family 39,member9,SLC39A9)在黑线仓鼠及其白化突变系(A:CHA)皮肤组织的基因表达差异,分析这两种基因对白化性状产生... 目的 比较可溶性物质运输蛋白SLC24A5(solute carrier family 24,member5,SLC24A5)和SLC39A9(solute carrier family 39,member9,SLC39A9)在黑线仓鼠及其白化突变系(A:CHA)皮肤组织的基因表达差异,分析这两种基因对白化性状产生的影响.方法 提取黑线仓鼠和A:CHA的皮肤组织总RNA,利用普通PCR的方法筛选引物,利用实时荧光定量PCR技术,比较分析黑线仓鼠和A:CHA皮肤组织SLC24A5、SLC39A9表达量的异同.结果 黑线仓鼠皮肤中的SLC24A5、SLC39A9基因mRNA的相对表达量分别是A:CHA组织中的2倍和3.8倍.结论 SLC24A5、SLC39A9基因在A:CHA皮肤组织的表达量下调,说明SLC24A5和SLC39A9基因与A:CHA白化性状的产生存在一定的关联性. 展开更多
关键词 黑线仓鼠 A: CHA slc24a5 SLC39A9 实时荧光定量PCR
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西里伯斯青鳉tyr和slc24a5的克隆及表达分析 被引量:3
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作者 马元 仲颖 +1 位作者 郭婧 李名友 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期282-291,共10页
为了探究黑色素合成相关基因酪氨酸酶(Tyrosinase,tyr)和溶质载体24家族成员5(Solute carrier family 24,member 5,slc24a5)在西里伯斯青鳉(Oryzias celebensis)中的表达特征,研究采用RACEs(Rapid Amplication of cDNA Ends)技术从西里... 为了探究黑色素合成相关基因酪氨酸酶(Tyrosinase,tyr)和溶质载体24家族成员5(Solute carrier family 24,member 5,slc24a5)在西里伯斯青鳉(Oryzias celebensis)中的表达特征,研究采用RACEs(Rapid Amplication of cDNA Ends)技术从西里伯斯青鳉精巢中克隆了tyr(Octyr)和slc24a5(Ocslc24a5)的全长cDNA(Complementary DNA)。Octyr的cDNA全长为2249 bp,开放阅读框长1635 bp,编码545个氨基酸;Ocslc24a5的cDNA全长为2065 bp,开放阅读框长1542 bp,编码514个氨基酸。氨基酸多重比对和系统发育树分析发现,Octyr和Ocslc24a5氨基酸序列非常保守,均与日本青鳉同源性较高。通过PCR克隆了Octyr和Ocslc24a5的基因组DNA序列,结果发现,Octyr开放阅读框跨越5个外显子,Ocslc24a5开放阅读框跨越8个外显子。荧光定量PCR(qRT-PCR)分析了Octyr和Ocslc24a5在不同组织和不同胚胎发育时期的相对表达水平,结果显示,Octyr和Ocslc24a5在脑、眼、肝、肾、肠、皮肤、卵巢和精巢中均有表达,且均在精巢中表达量最高,其次是眼和脑;Octyr和Ocslc24a5在胚胎发育不同时期均有表达,在胚胎发育到第7天时表达水平均达到最高。利用0.25 mmol/L苯基硫脲(PTU)抑制胚胎黑色素沉积后进行整体原位杂交(WISH)发现,Octyr和Ocslc24a5的表达模式相似,在囊胚期,Octyr和Ocslc24a5在所有胚胎细胞中均有表达;在神经胚期,Octyr和Ocslc24a5主要在背部和卵黄膜中表达;在体节期,Octyr和Ocslc24a5在眼睛、脑和背侧皮肤中表达。以上研究结果说明Octyr和Ocslc24a5可能参与西里伯斯青鳉黑色素的合成,研究为深入了解西里伯斯青鳉黑色素形成的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 tyr slc24a5 黑色素 基因表达 西里伯斯青鳉
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鹌鹑SLC24A5基因多态性与羽色性状的关联性分析
9
作者 赵毅威 张小辉 +4 位作者 庞有志 苑志文 户运奇 霍琳珂 任世威 《中国家禽》 北大核心 2023年第5期7-12,共6页
为研究SLC24A5基因与鹌鹑羽色性状的关系,试验采用RT-qPCR方法研究朝鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑在胚胎不同发育时期的mRNA表达水平。结果显示:SLC24A5基因在朝鲜鹌鹑胚胎发育时期的表达水平极显著高于北京白羽鹌鹑(P<0.01);鲜鹌鹑和北京... 为研究SLC24A5基因与鹌鹑羽色性状的关系,试验采用RT-qPCR方法研究朝鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑在胚胎不同发育时期的mRNA表达水平。结果显示:SLC24A5基因在朝鲜鹌鹑胚胎发育时期的表达水平极显著高于北京白羽鹌鹑(P<0.01);鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑的3种基因型频率分布差异极显著(P<0.01)。位于外显子1的SNP1(c.A5T)和外显子6的SNP2(c.G703A)均为中性位点,但SNP2(c.G703A)位点造成的编码蛋白G235S位点突变并不保守,属于多变性位点。研究表明,SLC24A5基因与鹌鹑羽色性状有关联性,可以为鹌鹑羽色育种提供理论依据。 展开更多
关键词 鹌鹑 羽色 slc24a5基因 基因突变
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SLC24A5在皮肤黑色素瘤组织中的表达及其临床意义
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作者 徐文超 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2021年第5期357-361,共5页
目的探究溶质载体家族24成员5(SLC24A5)的表达与皮肤黑色素瘤(SKCM)细胞增殖和侵袭的关系,对SLC24A5作为SKCM的潜在生物标志物和治疗靶点的可能性进行初步探讨。方法利用生物信息学的方法搜集相关信息,随后建立敲低SLC24A5的MEL-526和SK... 目的探究溶质载体家族24成员5(SLC24A5)的表达与皮肤黑色素瘤(SKCM)细胞增殖和侵袭的关系,对SLC24A5作为SKCM的潜在生物标志物和治疗靶点的可能性进行初步探讨。方法利用生物信息学的方法搜集相关信息,随后建立敲低SLC24A5的MEL-526和SK-HEL-5黑色素瘤细胞模型,通过Western blot与实时定量聚合酶链式反应(qPCR)实验验证SLC24A5的敲低效率,并探讨敲低SLC24A5对SKCM细胞增殖和侵袭的影响。结果SLC24A5在SKCM组织中的表达显著高于癌旁正常组织,高表达SLC24A5的患者的预后更差。敲低SLC24A5后,MEL-526和SK-HEL-5细胞的增殖受到抑制。结论SLC24A5在SKCM的进展中扮演着重要角色,有成为SKCM的治疗靶点和生物标志物的潜力。 展开更多
关键词 slc24a5 黑色素瘤 增殖 侵袭 生物标志物
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