miR-126-3p.1通过SLC7A5调控间变性甲状腺癌细胞糖酵解的作用机制

目的 探讨miR-126-3p.1对间变性甲状腺癌(ATC)细胞糖酵解的作用,并分析其潜在的机制。方法 通过TCGA数据库检索miR-126-3p.1在甲状腺癌中的表达及与甲状腺癌诊断、预后的关系。运用荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测人正常甲状腺细胞Htori-3、人间变性甲状腺癌细胞SW1736、人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1中miR-126-3p.1、溶质运载家族7成员5(SLC7A5)的表达;将TPC-1细胞分为agomiRNA(转染agomiRNA)组、agomiR-126-3p.1(转染agomiR-126-3p.1)组、si-NC(转染si-NC)组、si-SLC7A5(转染si-SLC7A5)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA-SLC7A5(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA-SLC7A5)组,各组细胞用脂质体法转染至SW1736细胞。细胞计数试剂(CCK8)、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)法检测细胞增殖能力;ELISA法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成能力;蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞SLC7A5蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果 TCGA显示miR-126-3p.1在甲状腺癌中低表达。与Htori-3相比,SW1736、TPC-1细胞miR-126-3p.1低表达,SLC7A5表达显著升高(均P<0.05)。与agomiRNA组相比,agomiR-126-3p.1组细胞miR-126-3p.1表达显著升高,TPC-1细胞增殖率、EdU阳性率、相对葡萄糖消耗率、相对乳酸生成率、TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量均降低(P<0.05)。与antagomiRNA组相比,antagomiR126-3p.1组TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量显著升高(P<0.05)。敲减SLC7A5对TPC-1细胞具有相似作用。miR-126-3p.1靶向负调控SLC7A5,并且二者在甲状腺癌中呈负相关(R=-0.266,P<0.05)。过表达SLC7A5降低miR-126-3p.1表达,减弱miR-126-3p.1对SW1736细胞增殖、糖酵解的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-126-3p.1可能通过调控SLC7A5参与癌细胞的增殖、糖酵解,具有潜在的治疗价值。

SLC7A5对肿瘤细胞增殖的影响及其与转化生长因子-β1信号调控的关系

目的:研究氨基酸转运载体基因SLC7A5(solute carrier family 7,member 5)在肿瘤细胞中发挥的生物学效应及其转录调控机制。方法:利用基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库分析SLC7A5在人正常组织和相应的肿瘤组织中的表达情况;构建SLC7A5基因的重组质粒,采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法、流式细胞仪技术检测该基因对肿瘤细胞增殖的影响;通过生物信息学方法分析SLC7A5基因启动子及其转录因子结合位点,构建该基因的启动子质粒,并利用荧光素酶报告基因系统、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对SLC7A5基因的表达调控。结果:GEO数据库分析显示SLC7A5的分布具有组织特异性,且在大多数的肿瘤组织中的表达水平明显高于相应的正常组织;MTT比色法、流式细胞仪检测结果表明SLC7A5具有促进细胞增殖的作用;通过启动子分析、载体构建、报告基因检测和RT-PCR实验证实TGF-β1可上调SLC7A5启动子的活性,从而促进该基因的表达。结论:SLC7A5基因在肿瘤细胞中发挥促癌作用,且受TGF-β1信号通路的调控。

西农萨能奶山羊SLC7A5基因克隆及其功能初步研究

本研究旨在通过对奶山羊SLC7A5基因的克隆、生物信息学及组织表达谱分析,探究SLC7A5基因在奶山羊乳蛋白合成中的功能。实验以西农萨能奶山羊为研究对象,利用PCR技术克隆萨能奶山羊SLC7A5基因CDS序列,并使用多款生物软件和在线工具进行生物信息学分析,同时分析其组织表达情况。结果表明:成功克隆得到奶山羊SLC7A5基因CDS区,全长1 518 bp,其编码氨基酸505个,蛋白分子量为55.01 ku,理论等电点为8.18,有4个磷酸化位点,为具有跨膜结构的稳定碱性蛋白质;SLC7A5与SLC3A2、SLC38A2、SLC1A1、SLC1A2、SLC1A4、SLC1A5、SLC1A6、SLC1A7、C1H3orf58、BSG蛋白存在互作关系,与山羊、绵羊和牛亲缘最近;组织表达分析表明,SLC7A5基因在奶山羊乳腺组织中显著高表达,其次是脾脏,在小肠和肾脏中表达含量较低;SLC7A5基因在奶山羊泌乳后期显著高表达,其次是前期,泌乳盛期差异不显著。

SLC7A5对胃癌细胞增殖的影响及其病理学意义

目的:研究胃癌中SLC7A5转录和表达的特点,探讨SLC7A5对胃癌细胞增殖的影响及其在胃癌发生、发展中的临床意义。方法:应用免疫组化法检测52对临床采集的胃癌组织及相应的癌旁组织中SLC7A5的表达情况;分析4株胃癌细胞(SGC-7901、MKN-45、MGC-803和CRL-5974)中SLC7A5转录及表达水平与永生化胃黏膜细胞GES-1间的差异;结合临床病理指标,分析SLC7A5在胃癌组织中的表达水平与各项临床病理特征间的相关性;并应用pGU6/GFP/Neo/shRNA-SLC7A5质粒载体转染胃癌SGC-7901细胞,下调SLC7A5表达,通过CCK8检测及流式细胞术检测分析SLC7A5对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响。结果:SLC7A5在胃癌组织和细胞中的表达上调,且其表达水平与胃癌肿瘤的直径、局部浸润深度、淋巴结转移及TNM分期进展显著相关;而下调胃癌SGC-7901细胞SLC7A5表达,可显著减弱胃癌细胞增殖能力,并将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:SLC7A5可促进胃癌细胞增殖,与其肿瘤直径、局部浸润深度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征相关,可作为分子标志物评价胃癌的生物学行为,并可能成为胃癌诊断和防治中的新靶点。

实时荧光定量PCR技术用于MDS患者基因检测

目的探讨实时荧光定量PCR SYBR Green I探针技术用于骨髓增生异常综合征(MDS)患者基因检测的可行性。方法运用实时荧光定量PCR SYBR Green I技术,检测21例MDS患者的SLC7A5基因表达情况,并以IDA、ITP、增贫及其他贫血19例为对照组。结果实验组和对照组SLC7A5基因的表达无明显的统计学差异。结论real-time PCR技术检测目的基因的表达是非常方便、快捷、准确的方法。