slp-76基因在肝癌及其他消化系统肿瘤中的差异表达分析

目的分析slp-76基因在肝癌、食管癌、贲门癌、胃癌、结肠癌及其癌旁组织中的表达情况。方法应用微阵列技术筛选出slp-76基因在肝癌组织中高表达,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对上述消化系统肿瘤组织及其癌旁组织中的slp-76基因表达进行检测;应用Northern blot技术对肝癌组织及其癌旁组织中的slp-76基因表达进行检测。结果 RT-PCR证实slp-76在79.3%(24/29)的肝癌组织中高表达(P=0.005);在73.3%(22/30)的食管癌组织中高表达(P=0.005);在75%(21/28)的贲门癌组织中高表达(P=0.014);在75%(15/20)胃癌组织中高表达(P=0.005);在72.2%(13/18)结肠癌组织中高表达(P=0.008);Northern blot证实slp-76基因在肝癌组织中呈高水平表达。结论 slp-76基因在消化系统肿瘤中高表达,slp-76与上述消化系统肿瘤生长关系密切;在RNA水平,该基因在上述肿瘤间的表达无显著性差异(P=0.968)。

SLP-76基因在消化道肿瘤中的表达差异分析

目的 分析SLP 76基因在食管癌、贲门癌、胃癌、结肠癌及其癌旁组织中的差异表达。方法 依据微阵列技术筛选出SLP 76基因在食管癌组织中高表达的结果 ,应用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,对上述消化道肿瘤组织及其癌旁组织中的SLP 76基因表达进行检测。结果 SLP 76在 73 .3 % (2 2 / 3 0 )的食管癌组织中高表达 (P =0 .0 0 5) :在 75% (9/ 12 )的贲门癌组织中高表达(P =0 .0 14 ) ;在 75% (12 / 16)胃癌组织中高表达 (P =0 .0 0 5) ;在 72 .2 % (13 / 18)结肠癌组织中高表达 (P =0 .0 0 8)。结论 在RNA水平 ,SLP 76基因在上述肿瘤之间的表达无显著性差异 (P =0 .9684)。但该基因在消化道肿瘤中高表达 ,SLP 76与上述消化道肿瘤生长关系密切 ;

转BtCry1Ac基因对107杨材性的非预期影响

为了探究外源BtCry1Ac基因对107杨材性性状产生的非预期影响,以转BtCry1Ac基因107杨2个株系(ECA1和ECA2)和野生型株系(WT)为材料,对其木材化学组分、物理和力学性质及纤维形态指标进行了定量测定。结果显示:BtCry1Ac基因的转入使107杨木材材性发生了非预期变化,具体表现为ECA1和ECA2的纤维素、灰分、苯醇抽出物及1%NaOH抽出物组分含量均显著低于WT(P<0.05);ECA1和ECA2的气干干缩性、全干干缩性显著低于WT(P<0.05),且ECA1和ECA2的气干密度、全干密度显著高于WT(P<0.05);ECA1和ECA2的冲击韧性、抗弯强度、抗弯弹性模量和顺纹抗压强度均显著高于WT(P<0.05);ECA1和ECA2的纤维长度显著低于WT(P<0.05)。总体表现为转基因株系的木材有着更小的干缩性,更高的密度和强度,其材性发生了非预期性改变,研究结果为转基因杨树的推广与应用提供了参考。

产蛋下降综合症病毒(EDS’76)核酸序列分析及基因扩增研究

从被EDS＇76病毒感染的鸭胚尿囊液中提取病毒核酸,经Pstl酶切后重组到PT_7/T_3a—19的PstI位点,再转化到Ecoli DH 5a中。在LB平板上筛选了一个EDS特异的PTEZ·P28重组质粒。用双脱氧末端终止法测定了该重组质粒中插入片段的一段核酸序列,在此基础上设计了一对引物,用这对引物成功地从EDS＇76—DNA上扩增出了一个209 bP的核酸片段。

淋巴细胞胞浆蛋白2的功能及其在恶性肿瘤中的研究进展

淋巴细胞胞浆蛋白2 (Lymphocyte cytoplasmic protein 2, LCP2,也称SLP-76)参与调控多种免疫细胞的活动,在T细胞激活中发挥着重要作用,介导T细胞生长发育过程中的多个信号转导过程,是多种疾病发展过程中的关键调节因子。其中,SLP-76可能与激活T细胞介导的抗肿瘤活性机制有关,在多种恶性肿瘤的发生和转移中发挥重要作用。本文归纳了SLP-76的结构域所参与免疫系统相关的调控机制以及对在肿瘤中的临床意义作一综述,为后续的研究提供参考。

转双抗虫基因欧美杨107杨中外源基因的表达

【目的】鉴定并分析转双抗虫基因(BtCryl Ac和API基因)欧美杨107杨(简称:转基因107杨)中外源基因的表达情况,并且筛选出对鳞翅目害虫美国白蛾和杨扇舟蛾具有高抗虫性的转基因107杨株系【方法】以10个转基因107杨株系2年生田间苗为试验材料,未转基因107杨为对照(CK),进行外源基因表达测定,包括PC R检测、绝对荧光定量PC R检测和毒蛋白检测以及鳞翅目害虫抗虫性对比试验【结果】PCR检测结果表明,10个转基因株系均检测到外源基因BtCryl Ac和API而对照未检测到,证明BtCryl Ac和API基因已稳定插入转基因植株基因组中。荧光定量PCR检测表明,8月份PB1,PB2,PB6,PB9和PB10这5个株系BtCryl Ac基因的转录丰度较高为1.72×10~8~7.91×10~9,PB1最高;PB3,PB7和PB8次之为1.03×10~7~2.35×10~7;PB4和PB5与对照一样未检测到BtCrylAc基因的转录表达。ELISA毒蛋白检测表明,CrylAc毒蛋白的表达量与转录丰度大小变化趋势一致,PBl最高,为665.11 ng·g^(-1),PB4和PB5与对照一样未检测到毒蛋白。室内饲虫试验证明转基因107杨对美国白蛾幼虫的杀虫效果高于杨扇舟蛾幼虫。8个表达毒蛋白的转基因株系对1-6龄美国白蛾幼虫的致死率均为100%,但致死时间存在一定差异,PB1和PB2对各龄幼虫的致死时间均较短;PB1,PB2,PB6,PB9和PB10对1~4龄杨扇舟蛾幼虫的致死率均为100%,其中PB1和PB2的致死时间较短,PB3,PB7和PB8对1~2龄杨扇舟蛾幼虫的致死率为100%,对3龄和4龄的致死率最高为22.22%。综合抗虫对比试验结果,可以将8个转基因株系划分为2个抗性水平:PB1,PB2,PB6,YB9和PB10为高抗株系对美国白蛾和杨扇舟蛾均表现高抗性;PB3,PB7和PB8为中抗株系,对杨扇舟蛾表现出中等抗性,但对美国白蛾表现出高抗性。【结论】通过对转基因107杨进行一系列分子检测及室内抗虫对比试验,证明外源基因已成功导入杨树基因组并稳定存在,并且有8个株系高效表达;抗虫试验证明转基因107杨对美国白蛾和杨扇舟蛾具有明显的抗性,筛选出的5个株系对2种害虫都具有高抗性,另外3个株系PB3,PB7和PB8对美国白蛾具有很高的抗性,而对杨扇舟虫我则表现出中低抗性。

欧美杨107耐盐转基因植株的试验

以欧美杨107(Populus×euram ericanacv.“74/76”)叶片为试材,采用根癌农杆菌介导法进行了胆碱单加氧酶(CMO)基因转化,获得了耐盐转基因植株。试验结果表明,15 mg.L-1卡那霉素(Km)可作为筛选转化细胞的选择压;在农杆菌工程菌液中添加200μmol.L-1的乙酰丁香酮(As)可以显著提高抗性芽诱导率;PCR及Southern检测证明CMO基因已整合进抗性植株基因组;组织培养条件下的植株耐盐性测定及离体叶片电导率测定结果证明,转基因植株的耐盐性得到了提高。

欧美杨107次生木质部纤维素合酶基因片段的克隆及序列分析

以欧美杨107次生木质部为材料提取总RNA,克隆得到了一个纤维素合酶基因片段。序列分析表明:该基因序列为883bp,与Populus tremula×Populus tremuloides木质部特异性纤维素合酶基因CesA1和Populus×canescens纤维素合酶基因的相似性均达到99%,与Populus tremuloides木质部特异性纤维素合酶基因CesA3的相似性达到98%。此片段拟表达的氨基酸序列具有纤维素合酶共有的锌指结构和一个不完全的高突变区,证明此DNA片段是纤维素合酶基因的片段,构建了重组质粒,并命名为pMD20-T-CesA1。

盐胁迫下转复合多基因欧美杨107杨幼苗生长及生理响应

【目的】通过观测转复合多基因欧美杨107杨(转基因107杨)幼苗在不同浓度盐胁迫下生长性状,质膜透性、光合作用等各项指标,以及外源基因表达产物积累量的变化,综合评价转复合多基因杨树在盐胁迫下的适应能力。【方法】以转化成功且已经过验证的转基因107杨为试验材料,未转基因107杨为对照(CK),进行组培扩繁,在幼苗株高10 cm时定植在花盆中,置于人工气候室中培养。分别用0、3、6 g·L^(-1)的Na Cl溶液进行盐胁迫处理,胁迫25天后观测2个株系幼苗的生长指标、生理参数变化,以及甜菜碱与Bt毒蛋白的积累量。【结果】2个株系的生长指标观测结果表明:在低盐浓度处理下,转基因107杨幼苗株高增长量显著高于非转基因对照,转基因株系幼苗地径增长量与对照差异不显著;高盐浓度处理下,2个株系幼苗株高与地径均受到盐胁迫的显著影响。2个株系的生理参数观测结果表明:在低盐浓度处理下,转基因107杨幼苗质膜透性显著低于对照107杨,叶绿素含量有一定程度的增加,净光合速率与蒸腾速率显著高于对照,光系统Ⅱ实际光合效率Y(Ⅱ)小幅度降低但显著高于对照,光系统Ⅱ能够保持较高的电子传递速率;F_v/F_m增幅较高,具有较大光合作用潜力。在高盐浓度下,转基因株系幼苗叶绿素含量降幅较小,而质膜透性、净光合速率均显著降低,F_v/F_m、Y(Ⅱ)均呈现较大幅度下降,光系统Ⅱ电子传递速率受到较大影响,光合能力下降,变化趋势与对照相同,2个株系幼苗均受到较大程度的盐害。转基因株系中外源基因表达产物积累量的ELISA研究结果表明,随盐浓度的增加,Cry1Ac毒蛋白、Cry3A毒蛋白及甜菜碱含量都呈现增加趋势;在高盐浓度胁迫下外源基因产物积累量均显著增加。【结论】转基因107杨在低浓度盐胁迫下表现出良好的适应性,耐盐性优于对照107杨。在高浓度盐胁迫下转基因株系与对照107杨均受到较大影响,转基因株系并未显示其优势。盐胁迫可以诱导外源Bt基因、BADH基因表达加强,盐胁迫下转基因107杨表现出良好的耐盐和抗虫潜力。