SMARCAL1基因新发突变相关的Schimke免疫-骨发育不良1例报告

目的为Schimke免疫-骨发育不良(SIOD)患儿的诊断提供更多的临床资料及基因数据。方法对1例临床表现为短躯干型矮身材、胸廓畸形、特殊面容、皮肤色素沉着斑,实验室检查提示存在肾病综合征,影像学检查发现脊柱椎体变扁、椎间隙变窄、脑血管静脉发育异常,疑似Schimke免疫-骨发育不良(SIOD)的5岁患儿进行全外显子基因学分析。提取患儿及其父母外周血基因组的DNA,然后通过末端修复、接头连接和PCR扩增技术,对患儿及父母的相关基因进行测序。结果基因检测提示存在SMARCAL1基因突变,为复合杂合突变,突变位点分别为c.1334+1G>A和c.1866G>A,分别来源于患儿父母,c.1334+1G>A为既往报道的剪接突变,c.1866G>A(p.W622X)为未报道的错义突变。结论以“矮小”就诊的患儿,如合并肾功能损害、骨骺发育异常、特殊面容、皮肤色素沉着等临床表现,需警惕SIOD可能,明确诊断需基于基因学检测结果及临床症状。

SMARCAL1在维持复制叉、端粒稳定性中的作用及Schimke免疫骨性发育不良的研究进展

SMARCAL1也称为HARP,是一种ATP依赖退火解旋酶,可在DNA损伤期间稳定复制叉。该基因中的突变是造成Schimke免疫性骨发育不良(SIOD)的原因,SIOD是一种常染色体隐性遗传疾病,以生长功能障碍、肾脏损害、T细胞免疫缺陷为表征。我们总结了SMARCAL1在应对DNA复制应激过程中对DNA修复,维持端粒和复制叉稳定上的主要作用、SMARCAL1基因突变导致的疾病表型、癌症预测、SIOD的诊疗进展等方面进行总结。

退火解旋酶SMARCAL1在维持基因组稳定中的作用与机制

SMARCAL1是属于SWI/SNF(SWItch/Sucrose Non-Fermentable)相关、基质相关和激动蛋白依赖的染色质调节因子家族成员ATP驱动的DNA退火解旋酶。SMARCAL1在体外和体内能催化单链结合蛋白RPA结合的DNA单链与其互补链退火成双链DNA。人Smarcal1基因的突变与Schimke免疫骨性发育不良(Schimke immuno-osseous dysplasia,SIOD)所能表现出的临床症状呈高度相关。本文对SMARCAL1在DNA损伤部位DNA复制叉的重塑、在DNA双链断裂(double-stranded DNA,dsDNA)处参与经典的非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)修复,以及在人染色体端粒完整性维护等方面的作用与机制进行了梳理,对Smarcal1基因突变类型与SIOD症状之间的对应关系进行了更新,并对SMARCAL1在三核苷酸重复序列扩增关联的神经–肌肉退行性病变过程中的可能作用进行了分析和讨论,旨在更好地理解该退火解旋酶在维持基因组稳定中的作用和机制。

SMARCAL1基因突变所致生长发育障碍的临床表现及基因分析

目的探讨SMARCAL1基因突变所致生长发育障碍患者的临床表现及基因突变特点。方法分析在江门市中心医院就诊的1例生长发育障碍儿童的临床特点,用直接测序+MLPA,发现致病基因,并对该基因外显子直接测序,对该患儿的父母进行验证,进而分析获得基因结果。结果该例SMARCAL1基因突变的患儿主要表现为生长发育障碍,高额头,耳位低,颈短,躯干短,躯干部主要是腹部皮肤可见数十个咖啡牛奶斑,直径为0.3~0.4 cm,周围皮肤正常,腹部膨隆,脊椎椎体发育欠佳,骨盆成骨不良,髋关节半脱位,T淋巴细胞缺陷。结论该例SMARCAL1基因突变所致生长发育障碍患儿特征表现为比例失调的身材矮小,SMARCAL1基因(NM014140.3)Exon12,c.1930C>T p.(Arg644Trp);SMARCAL1(NM-014140.3)Exon8c.1444delC p.(Leu482fs)杂合突变,致病突变。

弥漫性大B细胞淋巴瘤治疗中利妥昔单抗耐药与Smarcal1、PP2A-B55-α、PP2A-B56-α蛋白表达的相关性

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)治疗中利妥昔单抗耐药与Smarcal1、PP2A-B55-α、PP2A-B56-α蛋白表达的相关性。方法选取2种“双重打击”淋巴瘤衍生的细胞系,活化B细胞样(ABC型)OCI-LY10(LY10)和生发中心B细胞样型(GCB型)OCI-LY18(LY18),利用“梯度加药法”构建利妥昔单抗耐药细胞系(LY10RR及LY18RR);采用CCK-8法检测不同浓度利妥昔单抗分别干扰亲本及耐药细胞后的细胞存活率并计算半数生长抑制浓度值(IC_(50));AnnexinⅤ/PI双染法检测50μg/mL利妥昔单抗分别干扰亲本及耐药细胞48 h后的凋亡比率;western blot检测细胞耐药后对Smarcal1、PP2A-B55-α和PP2A-B56-α蛋白表达的影响;在耐药细胞系中分别干扰Smarcal1和PP2A-B55-α的表达以及过表达PP2A-B56-α,采用CCK-8法检测不同浓度利妥昔单抗对转染后耐药细胞活力的影响。结果经不同浓度利妥昔单抗处理48 h后,LY10及LY10RR细胞IC_(50)分别为(0.91±0.07)μg/mL和(287.40±26.30)μg/mL,耐药指数为315.58;LY18及LY18RR的IC_(50)分别为(4.73±0.24)μg/mL和(532.10±37.95)μg/mL,耐药指数为112.41,二者差异具有统计学意义(t值分别为10.51和15.18,P均<0.001);经50μg/mL利妥昔单抗处理48 h后,LY10RR和LY18RR的凋亡率与对照组的细胞凋亡率相比,差异均无统计学意义(t值分别为2.86和2.90,P值分别为0.06和0.05),而利妥昔单抗处理48 h后,LY10和LY18的凋亡率明显高于对照组细胞的凋亡率,且差异有统计学意义(t值分别为10.50和9.86,P均<0.001)。与亲本细胞相比,在发生利妥昔单抗耐药细胞系中,Smarcal1和PP2A-B55-α表达量增加,PP2A-B56-α表达水平下降,且差异均具有统计学意义(P均<0.05)。耐药细胞系转染并经不同浓度利妥昔单抗处理后,sh-Smarcal1组、sh-PP2A-B55-α组细胞存活率均明显低于sh-NC组,oe-PP2A-B56-α组细胞存活率明显低于oe-vector组(P均<0.01)。结论成功构建并鉴定稳定的对利妥昔单抗耐药的LY10RR和LY18RR细胞模型,并证实了Smarcal1、PP2A-B55-α及PP2A-B56-α蛋白异常表达与DLBCL的利妥昔单抗耐药形成相关。

构建人SMARCAL1基因过表达慢病毒载体调控胚肾细胞增殖

背景:研究发现SMARCAL1在人类发育和成熟肾脏的多种细胞类型中选择性表达,表明其在肾脏发育过程中发挥着重要的功能作用。目的:探讨SMARCAL1过表达对于胚肾细胞增殖功能的影响。方法:取293T细胞和HEK293细胞的第3代细胞用于实验。选用pHBLV-CMV-MCS-3FLAG-EF1-ZsGreen-T2A-PURO载体构建人SMARCAL1基因过表达慢病毒载体,转染293T细胞包装慢病毒。实验分为3组:空白组为无处理的HEK293细胞;阴性对照组为转染空载病毒的HEK293细胞;SMARCAL1过表达组为转染SMARCAL1过表达病毒的HEK293细胞。对SMARCAL1过表达慢病毒转染后用嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株。通过观察转染率来检测病毒滴度;荧光定量PCR和Western印迹法验证稳转细胞株;CCK-8和EdU染色法检测细胞增殖情况;进一步通过荧光定量PCR探讨对Wnt通路的影响。结果与结论:①SMARCAL1过表达质粒基因序列与目的基因一致,经慢病毒包装后测得SMARCAL1过表达慢病毒滴度为1×108 TU/mL,空载慢病毒滴度为3×108 TU/mL;②与空白组和阴性对照组比较,SMARCAL1过表达慢病毒转染后细胞中SMARCAL1 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),细胞增殖活力明显下降(P<0.05),Wnt通路中CTNNB1和WNT4基因表达水平降低(P<0.05);③实验结果表明,SMARCAL1过表达慢病毒载体构建成功并能够在细胞中顺利表达;SMARCAL1基因可能通过Wnt通信号通路参与调节胚肾细胞增殖,进而影响肾脏发育。

SMARCAL1基因突变致Schimke免疫-骨发育不良1例

目的本研究旨在探讨SMARCAL1基因突变导致的Schimke免疫-骨发育不良(SIOD)的临床特点及遗传学特征。方法选取1例就诊于石河子大学第一附属医院儿科的Schimke免疫-骨发育不良(SIOD)患者,采集病史,并收集临床资料,行全外显子组测序,进行文献分析和总结。结果患儿系11岁7个月女童,以“鼻出血2次”为主诉就诊,伴有双侧眼睑及下肢水肿、腹胀表现,多次就诊后诊断为骨骼发育不良、凝血功能异常、甲状腺功能减退、轻度贫血、腹腔积液、听力减退。全外显子组测序提示患儿在Schimke免疫-骨发育不良(SIOD)相关基因SMARCAL1存在一处纯合突变:c.2425G>A,最终确诊为Schimke免疫-骨发育不良。结论SMARCAL1基因的c.2425G>A变异是该患儿的遗传学病因,该突变的发现进一步拓展了Schimke免疫性骨发育不良的基因变异谱。

SMARCAL1新发突变致Schimke免疫性骨发育不良1例

1例以“眼睑水肿伴大量蛋白尿”为主诉的4岁7个月男童,伴反复呼吸道或消化道感染入院治疗,其生后因身材矮小及发育落后,于1岁5月时最终经基因检测确诊为Schimke免疫型骨发育不良(SIOD)。患儿SMARCAL1基因中2个新发突变位点,分别为:来源于患儿父亲的c.1777C>T(Gln593Ter)突变;来源于母亲的c.1860G>A(p.Trp620Ter)突变。通过对1例就诊于山东省菏泽市立医院儿科的患儿,其基因检测确诊为SIOD的病例分析,旨在提高临床医生对该病的认识,也为该病进一步提供临床及基因资料。

Schimke免疫-骨发育不良儿童基因分析

目的对2例临床疑似Schimke免疫-骨发育不良（Schimke immuno-osseous dysplasia，SIOD）患儿进行SMARCAL1基因分析，寻找致病突变，进而了解中国人SMARCAL1基因突变类型以及基因诊断的意义。方法对2008-2014年于北京协和医院就诊的2例临床表现为脊柱骨骺发育不良、身材矮小不对称，进行性加重的肾病综合征，细胞免疫功能缺陷的疑似SIOD患儿，在获得知情同意后，取患儿及其父母新鲜抗凝外周血，常规提取DNA，设计引物后对SMARCAL1全部16个外显子及外显子内含子交界处进行PCR扩增，经凝胶电泳分离PCR产物，纯化，测序。并对发现的错义变异进行SIFT软件验证以及50名正常人测序验证。结果（1）2例患儿共检测到4种基因变异：两种错义变异：c．1129G〉C，P．Glu377Gln及c．1933C〉T，P．Arg645Cys。两种剪切突变：c．1334＋1G〉A及c．2142．1G〉A。（2）c．1129G〉C，P．G1u377Gln为已报道的致病突变，检验50名正常人中，15名携带此变异，证实其为单核苷酸多态性，而非致病突变。（3）c．1334＋1G〉A及c．2142．1G〉A为本研究发现的两种新突变。结论（1）通过SMARCALl基因分析，共检测到3种致病突变，发现新突变2种。（2）错义变异c．1129G〉C，p．Glu377Gln至少在中国人种中为单核苷酸多态性，而非致病突变。

Schimke免疫-骨发育不良1例

Schimke免疫-骨发育不良(Schimke immunoosseous dysplasia, SIOD)是一种常染色体隐性遗传性的罕见疾病,SIOD的发病率为1∶(100万~300万),国内发病率不详,本研究报道1例于西安市儿童医院肾脏科以肾病综合征就诊,后经基因确诊为SIOD患儿的临床资料,以提高临床医生对此病的认识。1 病例介绍患儿,男,7岁10个月,以"间断浮肿2个月余,加重6天"入院。