甘草酸苷对肝癌细胞SMCC-7721凋亡的诱导作用

目的探讨甘草酸苷对肝癌细胞SMCC-7721凋亡诱导作用及相关机制。方法以甘草酸苷(0、10、30、100μg/mL)处理肝癌细胞SMCC-7721 48h后,咪唑蓝(MTT)法检测肝癌细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位;紫外分光光度法检测细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Caspase-9活性的影响;Western blot分析线粒体途径中相关蛋白p53、细胞色素C(CytC)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果与阴性对照比较,10、30、100μg/mL甘草酸苷可显著降低细胞的活力(P<0.01),诱导细胞凋亡(P<0.01),促进线粒体膜电位去极化(P<0.01),抑制肝癌细胞SMCC-7721Caspase-3、Caspase-9活性(P<0.01),并上调p53、CytC、Bax的表达(P<0.01),下调Bcl-2的表达(P<0.01),且作用呈现浓度依赖关系。结论甘草酸苷可通过线粒体途径诱导肝癌细胞SMCC-7721凋亡。

肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin的表达

目的研究肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin表达及分布情况。方法收集20例肝癌组织和3例正常肝组织标本,利用免疫组织化学、免疫细胞化学和Western blot法检测肝癌组织和肝癌HepG2、SMCC-7721细胞株β-catenin的表达及分布特征。结果免疫组化结果显示,β-catenin在肝癌细胞膜的分布不均匀、不连续,甚至缺如,在低分化肝癌细胞膜的表达较高分化癌少,而在细胞质呈高表达。有18例(90%)肝癌细胞膜β-catenin表达量明显减少,10例(50%)在胞膜的分布不连续或缺如;17例(85%)细胞质有明显的β-catenin积聚,而且分布不均匀。随肝癌分化程度不同,β-catenin表达也有明显差异,7例(77.8%)高分化肝癌细胞膜β-catenin分布较为清楚连续,细胞质表达量较多。分布均匀;4例(80%)低分化肝癌细胞膜β-catenin表达较少,细胞质β-catenin分布不均匀,呈点状积聚;中度分化的肝癌细胞膜和细胞质内β-catenin分布界于高低分化之间,5例(83.3%)细胞质β-cate- nin表达阳性。免疫细胞化学检测显示HepG2、SMCC-7721细胞株胞膜β-catenin表达不明显,胞质及胞核则有大量β-catenin积聚。Western blot检测显示肝癌组织和HepG2、SMCC-7721细胞株的胞质和胞核均有β-catenin表达,且在胞核内积聚。结论肝癌组织和肝癌细胞株胞膜β-catenin表达较少,而胞质β-catenin分布较多,胞核β-catenin积聚明显,其分布与肝癌分化程度相关。

基于PI3K/mTOR通路益气化瘀解毒方对人肝癌细胞SMCC-7721自噬流的影响

目的观察益气化瘀解毒方对人肝癌细胞SMCC-7721自噬流的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、重楼皂苷Ⅰ组、益气化瘀解毒方组、雷帕霉素组及索拉非尼组,各给药组给予相应药物。体外实验观察人肝癌细胞SMCC-7721自噬流发生情况并检测细胞微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ)、类胰岛素样生长因子2的mRNA结合蛋白质(p62)及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。结果重楼皂苷Ⅰ、益气化瘀解毒方及索拉非尼均能阻断人肝癌细胞SMCC-7721自噬流,导致细胞内自噬小体的蓄积,上调LC-3Ⅱ、p62的表达,同时可下调PI3K、mTOR蛋白的表达。结论益气化瘀解毒方可改变人肝癌细胞SMCC-7721形态;重楼皂苷Ⅰ、益气化瘀解毒方及索拉非尼均能阻断人肝癌细胞SMCC-7721自噬流,增加自噬体数量,其机制可能与抑制PI3K/mTOR信号通路有关。

相关巨噬细胞对肝癌SMCC-7721细胞迁移侵袭的影响及其机制研究

目的探讨分化巨噬细胞对肝癌SMCC-7721细胞增殖、迁徙和侵袭的影响。方法分化巨噬细胞分别与SMCC-7721细胞共培养。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法和Transwell法检测SMCC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭特性。Western blot法检测上皮间质转化(EMT)标记E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果促炎型巨噬细胞(M1)抑制SMCC-7721细胞增殖、迁移、侵袭能力,M2抗炎型巨噬细胞和TAMs促进SMCC-7721细胞增殖、迁移、侵袭能力;M1巨噬细胞的E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达下降;M2巨噬细胞和TAMs组的E-cadherin表达下降,N-cadherin和Vimentin表达升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论M2巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)促进肝癌细胞发生EMT样改变,从而促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学行为的改变。

干扰素-α通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞SMCC-7721的影响及相关性

目的 探讨干扰素-α（IFN-α）通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞SMCC-7721的影响及相关分子机制.方法 通过MTT法检测IFN-α对SMCC-7721细胞活力的影响;利用流式细胞术检测IFN-α对SMCC-7721细胞周期的影响;Western印迹分析脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路的激活状况及其下游靶基因糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、细胞周期蛋白D1（Cyclin Dl）、p21的表达变化,以及C-myc和Survivin的表达变化情况.结果 MTT结果显示IFN-α（5、10、15 U/L）均可显著抑制细胞的活力（P＜0.05）,并且在48 h抑制程度最高,抑制率分别为（10.5±3.1）％、（24.3±4.6）％、（39.4±5.5）％（P＜0.01）.流式细胞仪结果显示：与对照组比较,（5、10、15 U/L） IFN-α可使细胞周期阻滞在G1期,Western印迹结果显示：（10、15 U/L） IFN-α显著下调PI3K表达并抑制GSK-3β磷酸化（P＜0.05）,（5、10、15 U/L） IFN-α均可抑制Akt磷酸化,并下调Cyclin D1量及上调p21的表达（P＜0.05）,（10、15 U/L） IFN-α均可下调C-myc和Survivin的表达（P＜0.05）.结论 IFN-α可抑制肝癌细胞SMCC-7721生长和增殖,阻断PI3 K/Akt信号通路传导,影响Cyclin D1、p21、C-myc、Survivin等分子表达.

β-catenin在L-02,WB,HepG2和SMCC-7721细胞中的表达及其意义

目的探讨β-catenin的异常表达在原发性肝癌的发生、分化中的意义。方法将4种细胞株进行贴壁培养传代。利用免疫细胞化学法检测β-catenin在人肝细胞株(L-02),人肝干细胞株(WB),肝癌细胞株(HepG2,SMCC-7721)中表达的特征。结果在L-02细胞株中,β-catenin几乎全部分布于细胞膜,而细胞质和细胞核几乎无表达;在WB细胞株中,β-catenin主要分布于细胞膜,细胞质和细胞核有较少表达;在HepG2和SMCC-7721细胞株中,β-catenin几乎全部分布于细胞质和细胞核,并且有较高表达,在SMCC-7721中的表达多于HepG2细胞株。结论β-catenin由细胞膜逐渐向细胞质和细胞核异位表达在原发性肝癌的发生、分化过程中可能具有重要作用。

索拉菲尼对转化生长因子-β_1诱导的人肝癌细胞系SMCC-7721的上皮-间质转化的抑制作用

目的研究索拉菲尼对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的人肝癌细胞系SMCC-7721上皮-间质转化(EMT)的抑制作用。方法将肝癌细胞系SMCC-7721分4组:空白组、模型组和低、高2个剂量实验组。空白组加入磷酸盐缓冲液(PBS)处理肝癌细胞,模型组用TGF-β_15 ng·mL-1处理肝癌细胞。在造模基础上,实验组分别加入索拉菲尼10,2μmol·mL-1处理肝癌细胞。各组细胞处理24 h后,划痕实验和Transwell侵袭实验分别观察不同处理组肿瘤细胞迁移和侵袭情况;以蛋白印记实验分别检测E-cadherin和Vimentin和蛋白表达情况。结果模型组、空白组与高剂量实验组的伤口愈合率分别为(53.72±2.83)%,(40.35±2.55)%,(30.38±3.00)%;这3组的穿过小室肿瘤细胞数量分别为130.25±14.39,84.50±8.81,37.75±6.75,模型组明显高于空白组,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量实验组与模型组比较,这2项指标均明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组与高剂量实验组的E-cadherin蛋白表达分别为0.80±0.18,1.56±0.24;这2组的Vimentin蛋白的表达分别为1.25±0.14,0.55±0.29,高剂量实验组与模型组相比,两者差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论索拉菲尼可以抑制TGF-β_1诱导的肝癌细胞SMCC-7721的EMT和降低其迁移能力和侵袭性。

p115和MIF在肝癌细胞和正常肝细胞的表达情况

目的:研究人肝癌低分化SMCC-7721细胞株,高分化HepG2细胞株和人正常肝细胞株LO2的高尔基体转运蛋白p115和巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitoryfactor,MIF)的表达情况。方法:采用RT-PCR方法检测3组细胞株中p115和MIF的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测3组细胞株中p115和MIF的蛋白表达情况。结果:SMCC-7721,HepG2的p115和MIF mRNA表达和蛋白表达水平明显增加且SMCC-7721表达更强,与对照组正常肝细胞株LO2的表达量比较有显著差异(P<0.05);细胞免疫组化方法结果显示:SMCC-7721,HepG2中p115在主要位于除高尔基体外的细胞质中,但在细胞质中HepG2着色相对较淡,而LO2中位于细胞核旁的高尔基体上。MIF主要分布于细胞质中,其在SMCC-7721、HepG2、LO23组细胞表达量呈明显减弱,统计学有显著差异(P<0.05)。结论:p115和MIF的含量在SMCC-7721、HepG2、LO2 3组细胞株中呈递减性变化。说明随着细胞恶性程度增加,p115和MIF表达增高,提示二者可能与肿瘤细胞的异常分化有关。

β-环糊精淫羊藿苷包合物对肝癌细胞体外增殖能力的影响

目的:研究β-环糊精淫羊藿苷包合物对肝癌细胞SMCC-7721和Hep-G2细胞增殖能力的影响。方法:以不同终浓度的淫羊藿苷和β-环糊精淫羊藿苷包合物分别作用于SMMC-7721和Hep-G2细胞株,CCK8法检测其对SMMC-7721和Hep-G2细胞株的增殖影响。结果:不同剂量的淫羊藿苷和β-环糊精淫羊藿苷包合物对SMMC-7721细胞和Hep-G2细胞均有一定的增殖抑制作用,并呈明显的剂量依赖性,包合物对细胞的抑制效果明显。结论:β-环糊精淫羊藿苷包合物能够有效提高淫羊藿苷抑制SMMC-7721和Hep-G2增殖的能力。