人肝癌相关抗原SMP-30在肝癌中的表达及意义

目的:通过免疫组化方法检测人肝癌(HCC)中衰老标记蛋白-30(SMP-30)的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义。方法:制备48例人HCC及相应的癌旁组织、6例正常人肝组织和1例正常人肾组织的石蜡切片。采用免疫组化SABC法,检测SMP-30在HCC和癌旁组织中的表达,结合临床资料进行统计分析。结果:初步发现HCC癌旁组织的SMP-30表达高于HCC组织(P<0.05)。SMP-30的表达与HCC患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、肝硬化背景、HBsAg和AFP检测情况未见相关性(P>0.05)。结论:SMP-30与HCC的发生、发展有关,其过度表达可能是HCC的早期性、保护性事件。

肝癌相关抗原SMP-30基因工程菌培养条件的优化

目的：对重组人肝癌相关抗原SMP-30基因工程菌的培养条件进行研究,确定最佳培养方案以提高基因工程蛋白表达产量。方法：通过SDS-PAGE蛋白质电泳和电泳图谱扫描来分析诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导时间长短、培养温度和培养基成分对基因工程菌TB1表达肝癌相关抗原SMP-30的影响。结果：当工程菌培养条件合适,即在吸光度值A600为0.5左右时加入IPTG至终浓度0.5mmol/L,30℃培养7h,其表达的SMP-30融合蛋白可占细体总蛋白量的46.1%。将工程菌培养温度从37℃降到30℃时,表达蛋白质的可溶性部分可提高10%-15%。结论：通过对重组人肝癌相关抗原SMP-30基因工程菌的培养条件进行优化,获得较满意的应用工程菌表达肝癌相关抗原SMP-30的培养条件,为基因工程下游技术奠定了基础。

肝癌相关抗原SMP-30羧基端基因的构建、表达及血清学分析

目的 :用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌肿瘤相关抗原衰老标记蛋白 30 (SMP 30 ) ,检测肝癌、肝硬化及其它肿瘤病人血清中相应抗体的阳性率。方法 :PCR方法扩增经SEREX技术筛选出的人肝细胞癌相关抗原SMP 30羧基末端16 5个氨基酸的DNA序列 ,构建其表达质粒 ,经原核表达和亲和层析纯化获得目的蛋白 ,经N 末端氨基酸序列测序证实为SMP 30蛋白。采用ELISA方法检测肝癌、肝硬化与其他肿瘤患者血清中抗SMP 30抗体的阳性率。结果 :以 6 3例正常人血清为对照 ,肝癌、慢性肝炎、肝硬化和鼻咽癌血清中SMP 30抗体阳性率分别为 39 7% (2 3 5 8)、2 1 9% (7 32 )、6 4 7% (11 17)和2 1 6 % (5 2 3)。 7例肺癌和 2 5例胃肠疾病中无一例阳性。Westernblot亦显示部分肝癌患者血清存在有SMP 30蛋白抗体。结论 :SMP 30蛋白抗体检测可望作为肝癌和肝硬化等疾病的血清学诊断指标之一。

肝癌肿瘤抗原SMP—30融合蛋白的表达及纯化

用两种不同的表达载体构建、表达人肝癌肿瘤抗啄——衰老标记蛋白-30(SMP—30),并在体外对其表达产物进行纯化和鉴定。PCR方法扩增经SEREX技术筛选出的人肝细胞癌抗原SMP—30羧基末端165个AA的DNA序列,分别与pMAL—C2和pET16b两种表达载体重组后转入相应的宿主菌中诱导表达,并对表达产物进行分离纯化和鉴定。结果克隆的SMP—30基因经DNA测序与已公布的序列相同。pMAL—C2和pET16b两种重组载体分别表达出带麦芽糖结合蛋白和带10个组氨酸的SMP—30融合蛋白,麦芽糖结合蛋白——SMP—30是以可溶性蛋白形式表达,而带组氨酸的SMP—30则以包涵体的形式存在,对表达蛋白质N-末端15个氨基酸进行测序,结果与预期的完全相同。结果说明pMAL—C2表达载体更为适合于SMP—30蛋白质的表达;实验为肿瘤抗原免疫研究打下了基础。

衰老标记蛋白-30——一种新的肝细胞癌相关抗原

目的：寻找人肝细胞癌（ＨＣＣ）特异抗原。方法：应用重组克隆表达抗原的血清学鉴定技术（ＳＥＲＥＸ），用病人自身血清从广西肝细胞癌ｃＤＮＡ文库中筛选出编码ＨＣＣ肿瘤抗原的基因克隆，用肝癌患者及其他人血清检验ＨＣＣ肿瘤抗原对肝癌的特异性，测定抗原ＤＮＡ序列并与基因库核对寻找其同源结构。结果：其中一种ＨＣＣ肿瘤抗原与衰老标记蛋白－３０（ＳＭＰ－３０）是同源结构。相应抗体主要只见于ＨＣＣ病人，在２０例其它５种恶性肿瘤和４例肝硬化病人未查到相应抗体，２０例慢性肝炎病人血清和２０例正常人血清均只见１例呈阳性反应。结论：衰老标记蛋白－３０为一种新发现的ＨＣＣ相关抗原，对ＨＣＣ有诊断学意义。

衰老标记蛋白-30的表达与肝疾病的关系

目的通过检测人正常肝组织、病毒性肝炎组织、肝硬化组织和肝癌(HCC)组织及相应癌旁组织中衰老标记蛋白-30(SMP-30)的表达,探讨SMP-30与肝疾病的关系。方法将本课题组构建的含SMP-30羧基端165个氨基酸的cDNA序列表达质粒,经表达和纯化获得MBP-SMP-30,免疫家兔制备出抗MBP-SMP-30多克隆抗体。采用免疫组织化学SABC法,检测30例人正常肝组织、10例病毒性肝炎组织、49例肝硬化组织和48例人HCC及相应癌旁组织中SMP-30的表达。结果SMP-30定位于肝细胞的细胞质和细胞核,其在HCC癌旁组织中的表达高于另外4种组织,具有显著性差异(P<0.05),且HCC中SMP-30的表达与肿瘤大小和病理分级无关。结论用MBP-SMP-30融合蛋白制备的多克隆抗体可成功检测出人肝细胞中的SMP-30。SMP-30与肝疾病的发生发展有关,其高表达可能是HCC的早期性、保护性事件。

衰老标记蛋白-30和β-半乳糖苷酶的表达与晶状体上皮细胞凋亡相关性研究

目的探讨衰老标记蛋白-30和与衰老相关的β-半乳糖苷酶在老年性白内障患者的晶状体上皮细胞凋亡表达的相关性。方法 248例年龄相关性白内障患者(其中126例皮质性白内障154只眼,122例核性白内障有142眼),对每个患者进行晶状体前囊中心部的环形撕囊。TUNEL法观察晶状体上皮细胞凋亡,免疫组织化学染色和实时PCR检测蛋白与mRNA的表达水平。分析衰老标记蛋白-30和β-半乳糖苷酶蛋白表达水平与晶状体上皮细胞凋亡的关系。结果衰老标记蛋白-30在晶状体前囊中心部比晶状体前囊周边有较低的蛋白表达水平,而衰老相关的β-半乳糖苷酶的表达在中央部分明显高于周边部分。与核性白内障患者相比,皮质性白内障患者的衰老标志物蛋白-30和mRNA的表达水平降低了,而衰老相关的β-半乳糖苷酶的表达升高了。TUNEL检测结果显示,两组晶状体上皮细胞的前囊中心部凋亡率明显高于周围部分。在晶状体前囊区中心或周围,皮质性白内障比核性白内障晶状体上皮细胞凋亡明显增高。结论在核性白内障和皮质性白内障,衰老标记蛋白-30和衰老相关的β-半乳糖苷酶的表达均与晶状体上皮细胞的凋亡有相关性。

大鼠栓塞肺组织中代谢相关酶类的表达变化

目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中部分代谢相关酶类的表达变化。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、244、8 h提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常组为对照,采取半定量RT-PCR的方法研究3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、儿苯酚胺氧位甲基转移酶(COMT)、衰老标记蛋白-30(SMP-30)、3-α-羟类固醇脱氢酶(SDH)和延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH)在mRNA水平的表达变化;采用Western-blot方法进一步验证GAP-DH和COMT在蛋白水平的表达变化。结果大鼠急性肺栓塞后在不同的时间点,GAPDH、COMT、SMP-30、SDH和FAH的mRNA水平均逐渐减低,GAPDH和COMT在蛋白水平的表达也出现逐渐减低现象。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内大多数上述代谢相关蛋白均出现表达减低的现象。研究这些酶类的生物学功能和表达变化,将为我们阐明急性肺栓塞病理生理变化的分子机制奠定基础。

高龄肝脏与低龄肝脏生理差异的实验性研究

目的探讨生理情况下高龄肝脏与低龄肝脏的区别,寻找可以区分高龄肝脏与低龄肝脏的指标。方法取6周龄SD大鼠和9月龄以上退役SD大鼠各5只,采用超声弹性成像检测肝脏硬度、全自动生化检测仪检测血清学指标、H&E染色观察肝脏形态结构、Sirius Red染色及Masson染色检测胶原纤维的沉积、免疫组化SP法检测TGF-β1、p16INK4a、SMP-30蛋白的表达。结果高龄组和低龄组之间血清学指标、胶原纤维沉积及TGF-β蛋白、p16INK4a蛋白的表达无差异;超声弹性成像检测低龄组Vs值为(1.21±0.09)m/s,高龄组为(1.32±0.05)m/s(P=0.033);SMP-30蛋白低龄组IOD值为138244.988±51286.257,高龄组为116240.170±35017.936(P=0.007)。结论高龄大鼠与低龄大鼠肝脏的硬度及SMP-30蛋白的表达存在差异,随着年龄的增加肝脏硬度增大,SMP-30蛋白表达下降。肝脏硬度与SMP-30蛋白可作为区分高龄肝脏与低龄肝脏的指标。