脑胶质瘤组织SNAT1蛋白表达及其意义

目的 探讨人钠耦合中性氨基酸转运蛋白1（human sodium coupled neutral amino acid transporter 1,SNAT1）在胶质瘤组织中的表达及其与临床病理参数,预后的关系。方法 用免疫组织化学法,蛋白质印迹法观察89例胶质瘤患者的胶质瘤组织和瘤周组织中的SNAT1的表达与分布,其中低级别胶质瘤55例（WHOⅠ-Ⅱ）,高级别胶质瘤（WHOⅢ-Ⅳ）34例,采用两独立样本t检验分析蛋白质印迹中SNAT1的表达,采用单因素χ-2检验分析SNAT1的表达与临床病理参数间的关系,采用Kaplan-Meier法观察SNAT1的不同表达对患者预后的影响,并建立Cox回归模型。结果 胶质瘤组织中SNAT1的表达明显高于瘤周组织（t=-9.803,P=0.001）,高病理级别组织中SNAT1的表达明显高于低病理级别胶质瘤组织（t=-6.682,P=0.003）;SNAT1的表达与胶质瘤直径,病理级别有关（χ-2=4.963,8.527,P〈0.05）;Cox回归模型显示肿瘤病理级别,SNAT1蛋白不同表达为影响胶质瘤患者预后的独立危险因素。结论 SNAT1蛋白的表达与胶质瘤病理级别及患者预后密切相关,有望成为判断胶质瘤生物学特征及评价患者预后的分子新靶点。

SNAT1在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨人钠耦合中性氨基酸转运蛋白1(SNAT1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法构建含98例NSCLC组织芯片,免疫组化检测NSCLC组织和癌旁正常组织中SNAT1蛋白的表达,分析其表达与NSCLC临床病理特征及患者生存之间的关系。构建sh-SNAT1表达载体质粒转染肺癌A549细胞,分别用MTT法和克隆形成实验检测敲除SNAT1表达后其增殖能力的变化。结果 NSCLC组织中SNAT1阳性表达率为53.1%(52/98),而癌旁正常组织中不表达。NSCLC组织中SNAT1表达与淋巴结转移、分期和分化程度均呈正相关,其中SNAT1蛋白阳性表达患者的中位总生存时间为23.3个月,明显低于阴性表达者的40.5个月(P<0.001)。敲除SNAT1表达时NSCLC细胞的增殖能力显著减弱。结论SNAT1在NSCLC发生发展过程中过度活化,是评估NSCLC患者预后的重要指标之一。

pBK-CMV ⊿-EGFP-SNAT2质粒载体构建及其表达鉴定(英文)

SNAT2是SLC38基因家族编码的Na+偶联中性氨基酸转运蛋白中属于system A的成员之一.它在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.增强型绿色荧光蛋白EGFP的连接对于SNAT2在细胞表达中的定位以及检测都有很大的帮助.采用PCR扩增和酶切技术将EGFP连接到质粒pBK-CMV⊿-SNAT2中SNAT2的N端.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和测序验证得到pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体,将构建好的质粒瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293 cells)用Western blot和激光共聚焦电子显微镜检测EGFP-SNAT2的表达与亚细胞定位.结果表明:EGFP-SNAT2在细胞中正确表达并定位于细胞膜上.pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体的构建对于进一步研究SNAT2的结构和功能具有重要意义.

牛乳腺上皮细胞SNAT2对氨基酸调节乳合成的影响

试验旨在研究氨基酸转运体钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白(the sodium-dependent neutral amino acid transporter 2,SNAT2)在牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中对氨基酸调节乳合成的影响。利用组织块法成功培养原代BMEC,添加不同氨基酸(蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)和亮氨酸(Leu)刺激BMEC后,通过实时荧光定量PCR、Western blotting技术和甘油三酯试剂盒检测SNAT2、酪蛋白(β-casein)基因的表达量和BMEC培养液上清甘油三酯的分泌量;将N-flag-SNAT2真核表达载体及SNAT2siRNA分别转入细胞中进行SNAT2基因的过表达和敲低试验;通过Western blotting和甘油三酯试剂盒分别检测SNAT2、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(the mammalian target of rapamycin,mTOR)、β-casein蛋白表达量和BMEC培养液上清的甘油三酯含量。结果显示,3种氨基酸(Met、Lys、Leu)均能显著促进BMEC分泌乳蛋白和乳脂,并激活mTOR信号途径,其中Met、Lys还能够显著上调SNAT2基因表达;SNAT2能够正向调节BMEC乳蛋白和乳脂肪的合成,并激活mTOR信号通路,说明氨基酸激活mTOR信号通路是通过SNAT2基因介导完成的,进而调节了BMEC乳蛋白和乳脂肪合成。

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Western blot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位.pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法.

SNAT2介导蛋氨酸对牛乳腺上皮细胞增殖与自噬的调节作用

钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2)是一种氨基酸转运蛋白,可转运中性氨基酸,广泛分布于多种细胞中。氨基酸既可作为蛋白质合成的底物,也是调节细胞新陈代谢的关键信号分子,但SNAT2是否介导氨基酸调节BMECs增殖和自噬尚未见报道。本研究利用CASY细胞计数和Western blotting技术检测SNAT2过表达和siRNA干扰后牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖情况以及SNAT2对自噬标志蛋白LC3-Ⅰ/Ⅱ表达量的影响,并利用免疫荧光检测细胞自噬斑点(LC3-Ⅱ)变化。结果显示,SNAT2过表达时,p-PI3K、p-mTOR和Cyclin D1表达量增加,反之,p-PI3K、p-mTOR和Cyclin D1表达量下降。SNAT2抑制时,LC3-Ⅱ表达量增加,免疫荧光检测自噬斑点增多。添加自噬增强剂海藻糖(trehalose,Tre)和蛋氨酸(methionine,Met)后,与单一添加Tre组相比,Met+Tre组p-mTOR表达量增加,LC3-Ⅱ表达量降低,胞浆内绿色自噬斑点减少;添加Tre和Met并抑制SNAT2时,p-mTOR表达量下降,LC3-Ⅱ表达量增多,胞浆内绿色自噬斑点增加。以上结果表明,SNAT2可介导Met通过调控PI3K-mTOR/Cyclin D1信号通路调节BMECs的增殖与自噬。

大鼠中性氨基酸转运蛋白SNAT1-HA融合蛋白的构建和表达(英文)

Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1是一种膜蛋白,属于转运蛋白第38家族(SLC38),在中枢神经系统(CNS)中起到重要的生理学作用.为了更容易地检测SNAT1在细胞膜上的表达,以pBK-CMVΔ-SNAT1为模板,用PCR,双酶切和T4连接酶连接的方法在SNAT1的C端加上了一个HA标签蛋白,构建了一个新质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA.用该质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T),转染36 h以后,融合蛋白SNAT1-HA可以用HA抗体检测.Western blot结果显示在约54 kDa处有一条特异性条带,与预期分子量大小一致.利用重组质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA可以更方便地检测到SNAT1在细胞膜上的表达与定位,为进一步研究SNAT1结构与功能奠定了基础.

大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT1-EGFP融合蛋白的构建与鉴定

目的利用分子生物学方法构建大鼠谷氨酰胺转运蛋白1重组质粒p EGFP-N1-SNAT1并进行鉴定。方法对载体p EGFP-N1和质粒p BK-CMV(Δ[1098-1300])-SNAT1双酶切,纯化后连接,构建重组质粒p EGFP-N1-SNAT1。用Western blot检测融合蛋白的表达,采用免疫荧光检测SNAT1在细胞膜上的表达和定位。结果成功构建重组质粒p EGFP-N1-SNAT1并正常表达、定位于细胞膜上。结论重组质粒p EGFP-N1-SNAT1的成功构建为研究SNAT1的结构和功能提供了有效工具。

结直肠癌组织中SNAT3表达水平与临床病理生物学的关系

目的:探讨钠耦合中性氨基酸转运蛋白A3 (SNAT3)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化检测96例结直肠癌组织中SNAT3蛋白的表达情况,分析其与结直肠癌患者临床病理指标之间的关系。结果:本组结直肠癌SNAT3蛋白高表达率为56.3% (54/96例),其中癌浸润深度T3 + T4病例的SNAT3蛋白表达率(74.1%、40/57例)显著高于T1 + T2病例(25.9%、14/39例) (P <0.05);低分化型癌SNAT3蛋白表达率(88.9%、16/18例)显著高于分化型癌(48.7%、38/78例) (P <0.05),淋巴结转移病例SNAT3表达水平(64.8%、35/48例)显著高于无淋巴结转移(35.2%、19/48例) (P <0.05);与I + II期患者相比,III +IV患者的SNAT3蛋白表达率显著升高(75.9%、41/58例vs. 24.1%、13/38例) (P <0.01);且复发转移结直肠癌的SNAT3表达率(81.8%、18/22例)显著高于无转移患者(48.6%、36/74例) (P <0.01)。本组除3例失访外,其余93例随访资料完整,1、3、5年生存率分别为89.2% (83/93例)、38.7% (36/93例)及30.1% (28/93例),且SNAT3阳性患者的1、3、5年生存率显著低于阴性病例(86.5% vs. 92.7%、32.7% vs. 46.3%及25.0% vs. 36.6%) (P <0.05)。结论:SNAT3蛋白在结直肠癌组织中高表达,其高表达可能与结直肠癌的侵袭和转移密切相关,且可能在结直肠癌转移中发挥重要作用。

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2的研究进展

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(sodium-coupled neutral amino acid transporter 2,SNAT2)是SLC38基因编码家族中转运系统A(SystemA)的重要成员。SNAT2广泛表达于哺乳动物各组织中。其表达受高渗、pH值、激素、炎症因子等因素的影响。SNAT2可以通过改变细胞内氨基酸的水平来调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)的下游通路,从而影响细胞蛋白质合成。SNAT2在肥胖、糖尿病、关节炎、癌症等多种病理生理过程中发挥着重要的作用。本文对SNAT2的研究进展进行综述。

基于Linux操作系统的SNAT策略

随着Internet网络在全世界范围内的迅速发展,IPv4协议支持的可用IP地址资源逐渐变得山穷水尽,资源的匮乏使得许多企业难以申请更多的公网IP地址,或者只能承受一个或者少数几个公网IP地址的费用。而与此同时,大部分企业面临着将局域网内的主机接入Internet的需求。针对这一问题,讨论一下在Linux操作系统下怎样使用Iptables的SNAT策略来化解这一难题。

龙眼褪黑素合成途径SNAT、ASMT和COMT家族基因鉴定及表达分析

基于第3代龙眼(Dimocarpus longan)基因组及转录组数据库,对褪黑素合成路径上可能的限速基因SNAT(serotonin N-acetyltransferase)、ASMT(N-acetylserotonin methyltransferase)和COMT(caffeic acid O-methyltransferase)进行基因家族成员鉴定,利用实时荧光定量PCR技术研究其在龙眼体胚早期的表达谱,并研究外源IAA、GA3、MeJA、SA和ABA对龙眼胚性愈伤组织中褪黑素含量的影响,以及褪黑素合成途径相关基因的表达模式。结果显示:龙眼SNAT(DlSNAT)、ASMT(DlASMT)和COMT(DlCOMT)基因家族分别含有2、18和7个成员,蛋白质结构域保守,相同家族的成员之间保守基序相差极小,DlASMT和DlCOMT家族成员高度相似。基于氨基酸序列进行系统进化树分析,龙眼、拟南芥、水稻、小麦、番茄、辣椒和卷柏的SNAT家族可分为3个亚组;ASMT和COMT家族具有高度同源性,共同建树并分为3个亚组。DlSNAT、DlASMT和DlCOMT家族成员的启动子中含有大量响应生长素、赤霉素、茉莉酸甲酯、水杨酸和脱落酸的顺式作用元件。表达谱分析显示,DlASMT和DlCOMT家族成员主要在龙眼不完全胚性紧实结构和球形胚阶段高表达,DlSNAT1和DlSNAT2在龙眼体胚发生早期始终处于高水平表达。用0.1 mmol·L^(-1)IAA处理龙眼胚性愈伤组织,内源褪黑素含量在24 h内显著降低,GA;、MeJA、SA和ABA处理则显著提高了褪黑素含量;同时分析DlSNAT、DlASMT、DlCOMT成员表达情况,内源褪黑素含量变化趋势和DlSNAT表达基本一致。综上,DlSNAT、DlASMT和DlCOMT可能通过影响内源褪黑素的合成参与调控龙眼早期体胚发生。

多链路管理中的负载均衡策略

企事业单位为了提高与因特网互联的速度和可靠性,通常设置多条链路与因特网互联.但是出现了某些链路负载过重,而另外一些负载过轻的问题,通过在多条链路的出口处增设一个链路均衡器可以实现各条链路中的负载均衡功能.本文提出链路负载均衡技术,分析了链路负载均衡的特点,利用SNAT技术实现双向数据流的引导,提出计算链路负载的公式和正常状态随机法、最短路由最小负载法两个均衡算法.

运用Linux系统打造NAT防火墙的技术研究与实现

针对因特网地址匮乏及网络安全性等问题,详细介绍了NAT技术的工作原理及其在防火墙中的应用。阐述了在Linux系统下打造NAT防火墙的设计方案和策略,并且给出了基于NAT的防火墙的具体设置步骤和所实现的检测结果。在对NAT技术的安全性进行了具体分析的基础之上,结合设计中出现的问题,进一步探讨了需要改进的措施和方法。由此得出打造系统安全防火墙所需要的技术实现的方法和思路。

用iptables实现NAT

主要介绍如何使用iptbales实现linux2.4下的强大的NAT功能。

钠耦合中性氨基酸转运子1在食管鳞癌中的表达及其预后价值

目的检测钠耦合中性氨基酸转运子1(SNAT1)在食管鳞癌组织中的表达,分析其在评估食管鳞癌患者预后中的价值。方法构建含183例食管鳞癌和癌旁组织的组织芯片,用免疫组化技术和蛋白质印迹法检测SNAT1蛋白在食管鳞癌组织中的表达,并分析其与临床病理参数和总生存时间的相关性。结果 SNAT1在正常鳞状上皮组织中不表达,在食管鳞癌组织中高表达,过表达率为45.4%(83/183);SNAT1的过表达与肿瘤大小(P=0.023)、淋巴结转移(P=0.007)以及疾病进展(P=0.003)有关;生存分析显示SNAT1过表达患者的预后要劣于SNAT1阴性表达患者(P<0.001)。此外,SNAT1过表达是评估食管鳞癌患者预后的独立因素(P=0.004)。结论 SNAT1在食管鳞癌中异常活化,是判断食管鳞癌患者预后的重要因素之一。

NAT技术及其在网络安全中的应用

分析了NAT(网络地址转换 )技术的工作原理、目的和安全性 .通过对文件的操作来进行读取和接收用户所选择的服务协议类型 ,完成对远端WEB界面的防火墙及对NAT进行操纵和管理 ,给出一种基于WEB的防火墙和NAT的实现设计 。

基于双向NAT和智能DNS内网服务器安全快速访问策略

校园内网服务器的访问通过教育网链路进行,公网用户的访问速度慢。通过双向NAT策略将公网用户的请求IP封包进行有效转换,将此IP包的公网源地址和目的地址转换为内网源地址和目的地址,并避开边界路由器内网口策略路由,实现通过公网链路进行路由选路;智能DNS对公网用户和教育网用户针对同一域名分别解析各自所在网络的IP地址,保证公网用户通过公网链路访问内网服务器。实验结果表明,公网用户的访问速度明显提高。

基于Netfilter/iptables的IP地址隐藏技术研究

随着Internet的迅速发展,网络中因为IP地址信息泄漏而遭受的攻击日益严重。通过代理服务器来隐藏内部网络设备IP地址的传统方式,不仅影响数据传输速率,而且其本身也易成为攻击的目标。针对这一亟待解决的问题,基于Netfilter/iptables模块和IP地址替换技术,在Linux环境下通过DNAT和SNAT,以及多线程系统调用的方式实现了静态IP和DHCP动态分配IP的地址信息隐藏。通过网络实验证明,达到了预期的目的。

N-糖酰胺酶F(PNGase F)在大肠杆菌中的表达纯化及其脱糖基化作用鉴定

N-糖酰胺酶F(PNGase F)是由革兰氏阴性菌——脑膜炎脓杆菌分泌的一种分子量为34.8 kDa的去糖基化酶.本研究通过PCR技术扩增出945 bp的N-糖酰胺酶F基因,经酶切、连接,构建了大肠杆菌表达载体pET28a-PNGase F.将pET28a-PNGase F转入大肠杆菌BL21中,16℃诱导表达及Ni柱纯化后,SDS-PAGE鉴定,获得超过95%纯度的可溶性表达的N-糖酰胺酶F.对Na+依赖的中性氨基酸转运蛋白1(SNAT1)和2(SNAT2)进行脱糖基化作用检测,结果证明:纯化的N-糖酰胺酶F对SNAT1和SNAT2具有高效的脱糖基化作用.