多发性骨髓瘤细胞中SWI/SNF核心亚单位SNF5调控的基因表达谱分析

目的研究染色质重塑复合物SWI/SNF核心亚单位SNF5对骨髓瘤细胞系基因表达谱的调控作用。方法在KM3细胞中构建四环素诱导的表达SNF5 siRNA的稳定细胞系,通过四环素诱导敲低SNF5,检测SNF5敲低前后的基因表达谱,对差异表达基因进行生物信息学分析,并对部分基因进行验证。结果 SNF5敲低抑制KM3细胞生长,基因表达谱分析发现545个表达差异基因,其中214个上调,331个下调。结论 SNF5是多发性骨髓瘤细胞生长所需的,它通过影响与细胞生长及凋亡相关基因的表达来发挥作用。

PIH1D1对染色质重塑复合物SNF5亚基降解的影响

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;SNF5通过蛋白酶体依赖的途径降解;PIH1D1抑制SNF5的降解,从而稳定SNF5。结论PIH1D1可能通过阻断蛋白酶体依赖途径,抑制SWI/SNF染色质重塑复合物SNF5亚基的降解,从而起到稳定SNF5的作用。

利用CRISPR/Cas9n系统敲除人源SNF5基因

目的:建立敲除人源基因组中SNF5基因的CRISPR/Cas9n系统。方法:设计一对靶向人源SNF5基因第1个外显子的sg RNA,分别克隆至p X461、p X462表达载体后,转入人胚肾293T细胞,通过Western印迹检测细胞株中SNF5基因的敲除效果。结果:测序证明构建的靶向SNF5基因CRISPR/Cas9n重组质粒与设计吻合。Western印迹结果显示,重组质粒p X461-h SNF5sg RNA转染293T细胞后24 h,细胞内SNF5表达水平明显降低;重组质粒p X462-h SNF5sg RNA转染293T细胞后48 h,细胞内SNF5表达水平显著降低。结论:通过CRISPR/Cas9n系统获得了靶向SNF5基因的重组质粒,构建的重组质粒能有效敲除SNF5基因的表达。

SNF5在膀胱癌中的表达水平及其临床意义

目的探讨SNF5在膀胱癌中的表达水平及临床意义。方法分别利用癌症基因组图谱数据库(the Cancer Genome Atlas,TCGA)分析RNA-seq数据、qPCR检测膀胱癌细胞系,研究膀胱癌中SNF5表达水平,并结合TCGA临床样本信息行Kaplan-Meier生存分析研究SNF5对预后的影响。收集2012年1月至2018年12月我科收治的157例膀胱癌患者肿瘤组织及临床信息,免疫组化法检测膀胱癌组织中SNF5蛋白水平,分析其与临床病理特征关系。结果在mRNA水平,SNF5在膀胱癌组织中和膀胱癌细胞系中均高于正常膀胱组织,在不同mRNA膀胱癌亚型和膀胱癌细胞系中表达也存在差异。生存分析中提示SNF5 mRNA低表达组患者总体生存时间明显缩短(P<0.01),而Cox分析进一步提示SNF5是膀胱癌独立预后因素。在蛋白水平,回顾性研究发现SNF5表达水平与肌层浸润(P<0.01)、淋巴结阳性(P<0.01)密切相关。结论SNF5在膀胱癌中表达上调,与膀胱癌发生、发展及预后密切相关,具有作为潜在治疗靶点的潜能。

染色体重塑分子SNF5血清差异性表达用于早期诊断乳腺癌的初步研究

目的探究染色体重塑分子SNF5血清差异性表达用于早期诊断乳腺癌的可行性。方法选择2010年8月—2015年8月间于宁波大学医学院附属鄞州人民医院病理检查证实的196例乳腺癌患者(0期23例、Ⅰ期46例、Ⅱ期29例、Ⅲ期67例、Ⅳ期31例,平均年龄36.3岁)为研究对象,并选择同期在该院健康体检的64名志愿者(平均年龄37.9岁)为对照组。采用实时定量PCR检测2组外周血血清中SNF5的表达水平。采用统计学软件对2组SNF5水平进行统计学分析,并采用ROC曲线分析SNF5诊断乳腺癌的价值,进而探究染色体重塑分子SNF5血清差异性表达用于早期诊断乳腺癌的可行性。结果乳腺癌患者外周血血清中SNF5水平显著性高于对照组(P<0.05),0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者SNF5水平分别是对照组的13、15、15、16、23倍(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,SNF5诊断乳腺癌的敏感度与特异度分别为82%和93%,曲线下面积为0.8734(95%CI:0.923~0.944)。结论染色体重塑分子SNF5在乳腺癌患者中的表达明显升高,其可作为早期诊断乳腺癌肿瘤的生物标志物,具有敏感度、特异度高的优点。

肝癌HepG2和Hep3B细胞系SNF5表达及定位

目的染色质重塑因子SNF5在肝细胞肝癌中的生物学功能仍有待深入研究,本研究检测SNF5在HepG2和Hep3B肝癌细胞系中的表达及亚细胞定位,并构建Flag-SNF5真核表达质粒。方法提取HepG2和Hep3B两种肝癌细胞系的总蛋白,蛋白质印迹法检测SNF5内源性表达;应用共聚焦激光扫描显微镜观察Hep3B细胞SNF5蛋白定位;提取HepG2总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增SNF5全长编码序列,亚克隆至含有Flag标签的真核表达载体中;将构建的重组质粒测序并转染到Hep3B细胞中,提取细胞蛋白进行蛋白质印迹检测,验证其表达情况;使用免疫沉淀的方法纯化Flag-SNF5融合蛋白。结果在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中,均检测到了SNF5蛋白的内源性表达。在Hep3B细胞中,SNF5主要定位于细胞核。将SNF5蛋白全长编码区成功克隆到pcDNA3-Flag载体中。重组质粒转染入Hep3B细胞后,检测到融合蛋白Flag-SNF5的表达,相对分子质量约为39×103,并对Flag-SNF5融合蛋白进行了纯化。结论 SNF5蛋白在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中均有表达,且在Hep3B细胞中主要定位于细胞核。成功地构建了Flag-SNF5的真核表达质粒,验证了重组质粒的表达,并纯化了该融合蛋白。

高表达染色质重构分子SNF5影响子宫内膜癌增殖

目的本研究拟通过体外细胞分子生物学实验,观察SNF5分子对子宫内膜细胞癌增殖的影响,并进一步探究其发生机制。方法 Western blot法检测不同子宫内膜癌细胞株SNF5蛋白表达水平;采用质粒转染技术,转染低表达SNF5的细胞株;CCK8实验比较低表达SNF5细胞与转染SNF5后以及高表达SNF5细胞间增殖能力的差异;利用细胞克隆形成实验,进一步探究SNF5分子对子宫内膜细胞癌增殖影响的机制。本研究不同组别间采用方差分析和t检验分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果随着子宫内膜癌细胞恶性程度的逐渐增高,SNF5的表达水平也呈上升趋势。其中,人子宫内膜癌细胞RL-952的SNF5的表达含量最高(2.82±0.1),JEC细胞次之(1.85±0.16),HHUA细胞最低(0.31±0.02)。为进一步探究SNF5分子影响子宫内膜癌细胞生物行为的具体机制,CCK8实验显示:HHUA-SNF5细胞的增殖能力明显高于HHUA细胞(3.8±0.5)倍,且恰好与高表达SNF5分子且高度恶性的RL-952细胞持平。为进一步探究SNF5影响细胞增殖的机制,克隆形成实验显示:HHUA-SNF5细胞的克隆形成能力明显高于HHUA细胞(5.0±0.3)倍;实时定量PCR显示:三个与增殖相关分子的转录因子的表达水平均明显上调,Sox2上调(2.4±0.7)倍(P<0.001),Nanog上调(1.5±0.4)倍(P<0.001),Oct4上调(1.9±0.2)倍(P<0.001)。结论 SNF5可通过促进子宫内膜癌中增殖相关分子(Sox2、Nanog和Oct4)的表达,以促进细胞自我更新,进而促进细胞增殖。

神经鞘瘤相关遗传学机制的最新研究进展

背景 神经鞘瘤发病与INI1、NF2抑癌基因突变失活有关,已被众多实验结果证实,但在部分神经鞘瘤病例中未发现INI1、NF2基因突变位点.近来LZTR1基因在神经鞘瘤中的作用,特别是在神经鞘瘤病中的致病作用,已成研究的热门领域.目的 通过对自1995年以来神经鞘瘤发病的相关遗传学机制实验研究的探索,总结INI1、NF2、LZTR1抑癌基因在神经鞘瘤及其亚型中的作用机制.方法 以“神经鞘瘤、神经雪旺细胞瘤、神经鞘瘤病、Schwannoma、neurinoma、neurinomatosis、SNF5、INI1、SNARCB1、BAF47、NF2、LZTR1”为检索词,应用计算机检索1995年至2015年PUBMED、CNKI、SCIENCE DIRECT数据库上的相关文献,排除重复性研究,保留61篇作进一步分析.结果和结论 神经鞘瘤发病与INI1、NF2、LZTR1突变失活有关;INI1基因突变可能是引起种系遗传的关键因素,特别是在家族性神经鞘瘤病中;NF2基因突变在神经鞘瘤的发生中起到了很大的促进作用,尤其是在散发性神经鞘瘤中的作用尤为明显;LZTR1基因在非INI1、NF2基因突变的神经鞘瘤中起到了关键作用,可能是家族性神经鞘瘤病发病的关键节点.