hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备、穿膜效应及其抗氧化、抗炎症功效

目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析法、分子筛方法纯化Cu,Zn-SOD、hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白并利用Western blotting法鉴定其正确性;利用免疫荧光法、荧光共定位实验、Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD在细胞中的穿膜效应;利用Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白穿膜时间梯度和浓度梯度效应;利用SOD酶活性测定试剂盒检测hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后的SOD酶活性;利用MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。利用H2O2建立HEK293氧化应激细胞模型,通过流式细胞分析术(FCM)分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后细胞凋亡情况;并RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后凋亡相关因子的表达情况;通过ROS检测分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后抗氧化能力。TPA诱导建立小鼠耳部炎症模型(5只/组,共4组),然后RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后,NFκB,IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录情况;Western blotting检测NFκB p65、p-NFκB p65、IL-1β、TNFα基因的表达;免疫组化分析炎性因子p-NFκB p65、TNFα基因的表达。结果 成功构建了重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD,并获得Cu,Zn-SOD蛋白和hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白;免疫荧光试验结果表明5μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD转导HEK293细胞具有明显的穿膜效应;荧光共定位实验显示融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD入胞后定位在细胞膜内,部分蛋白定位在细胞核内;Western blotting实验结果表明hPP10-Cu,Zn-SOD转导Hela(P<0.05),HEK293(P<0.01)细胞具有浓度依赖性,细胞内hPP10-Cu,Zn-SOD存在可持续24 h;5μmol/L的hPP10-Cu,Zn-SOD转导细胞具有较好的抗氧化活性(P<0.01);MTT结果显示高达10μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD对于细胞活力的影响小。在氧化应激模型中,FCM结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞降低了细胞的早期凋亡(P<0.01)和晚期凋亡(P<0.05);RT-qPCR结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞使Bcl2、Mcl1、Deptor等抗凋亡因子升高(P<0.05),降低了Bad、P21、P27等促凋亡因子的表达(P<0.05);ROS结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞显著降低了细胞内的活性氧含量(P<0.01)。在炎症模型中,hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白可显著降低IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录(P<0.05);p-NFκB p65、IL-1β及TNFα的表达都呈现了抑制作用(P<0.05);hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白处理组较Cu,Zn-SOD蛋白处理组,降低了炎性因子p-NFκB p65及TNFα基因的表达(P<0.05)。结论 融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD具有明显的穿膜入胞、抗氧化、抗炎功效,且对细胞毒副作用很小。这些结果为hPP10作为新的递送载体奠定基础,也为hPP10-Cu,Zn-SOD应用于护肤品等提供了理论依据。

SODMC对低温胁迫后水稻幼苗SOD,POD同工酶谱的影响

用一定浓度的 (2 .5mg/L)超氧化物歧化酶模型化合型 (Superoxidedismutasemodelcom pound ,SODMC)以浸种和喷洒相结合的方式处理水稻 ,以幼苗二叶一心期为低温胁迫期 ,结果表明 :处理对SOD、POD同工酶主要谱带数无影响 ,但提高了某些同工酶的活性 ,使这些同工酶冷胁迫后恢复时仍保持高活力 .推测处理可使相应的基因开始表达 ,合成相关酶及蛋白质 。

外源SOD对葡萄SOD、POD活性及含糖量的影响

以二倍体玫瑰香葡萄为试材,探讨了不同浓度外源SOD对葡萄叶片、果实SOD活性、POD活性和果实可溶性糖含量的影响。结果表明:外源SOD能够提高叶片中SOD的活性,但对果实无相应作用;对叶片及果实中POD活性均无提高作用;对果实可溶性糖含量具有降低作用。

天麻健脑颗粒联合高压氧对血管性痴呆患者炎症因子、MMP-9、Hcy和SOD表达的影响研究

【目的】探讨天麻健脑颗粒(由半夏白术天麻汤衍化)与高压氧联合治疗对血管性痴呆(vascular dementia,VD)患者认知功能、日常生活能力及血清炎症因子、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、同型半胱氨酸(Hcy)和超氧化物歧化酶(SOD)表达的影响。【方法】将100例风痰瘀阻型VD患者随机分为试验组和对照组,每组各50例。2组患者均给予控制血压、降糖、调脂等对症治疗,对照组同时给予奥拉西坦胶囊口服治疗,观察组在对照组的基础上给予天麻健脑颗粒联合高压氧治疗,疗程为12周。观察2组患者治疗前后中医证候积分、简易精神状态量表(MMSE)评分、日常生活能力评定量表(ADL)评分和血清炎症因子、神经因子、凋亡因子及MMP-9、Hcy、SOD表达水平的变化情况。【结果】(1)量表评分方面,治疗后,2组患者的中医证候积分和ADL评分均较治疗前明显降低(P<0.05),MMSE评分均较治疗前明显升高(P<0.05),且试验组对中医证候积分和ADL评分的降低幅度及对MMSE评分的升高幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(2)炎症因子方面,治疗后,2组患者的血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且试验组对血清TNF-α、CRP、IL-6水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(3)神经因子方面,治疗后,2组患者的血清去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)水平均较治疗前明显升高(P<0.05),且试验组对血清NE、DA、5-HT水平的升高幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(4)凋亡因子方面,治疗后,2组患者的血清血红素加氧酶1(HO-1)水平均较治疗前明显升高(P<0.05),血清可溶性凋亡相关因子(sFAS)及其配体(sFASL)水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且试验组对血清HO-1水平的升高幅度及对血清sFAS、sFASL水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(5)MMP-9、Hcy、SOD表达水平方面,治疗后,2组患者的血清SOD水平均较治疗前明显升高(P<0.05),血清MMP-9、Hcy水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且试验组对血清SOD水平的升高幅度及对血清MMP-9、Hcy水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。【结论】天麻健脑颗粒联合高压氧能够改善VD患者的认知功能与生活能力,并具有良好的抗炎、抗氧化、调节神经递质表达的作用。

高pH胁迫对小龙虾的急性毒性和SOD活性的影响

pH是衡量水质的一项重要指标,水体pH过高或过低均会对水生生物构成危害。为了解水体pH对小龙虾的影响,为小龙虾养殖生产提供依据,本研究从pH 8–12以1.0为幅度设置5个梯度,分别记录24、48、72、96 h小龙虾的死亡数量来统计死亡率,在得出96 h LC50的基础上(9.71),设置对照组(pH 7.6)和实验组(pH 9.7)2个pH处理组,开始96 h高pH胁迫,于胁迫后0、2、8、24、96 h分别取样测定血液中SOD活性。结果表明,小龙虾在pH 8–12的5个梯度中各时间点的死亡情况不同,pH为8时,各时间点均无小龙虾死亡;pH为9时,24 h无小龙虾死亡;但随时间增长死亡率升高;pH为10时,小龙虾死亡率在24 h为16.50%,96 h增加到53.00%;pH为11时,小龙虾死亡率在24 h到达64.00%,48 h为100%;pH为12时,24 h死亡率为100%。对照组小龙虾血液中的SOD活性随时间变化不显著,各实验组小龙虾血液中的SOD活性随时间增加而降低,实验组与对照组之间0–8 h时无显著差异,24 h和96 h时差异显著(P<0.05)。

含磷席夫碱配合物对水稻幼苗SOD和POD活力影响的研究

采用 NBT光化学还原法和愈创木酚法测定了 N-呋喃亚甲基 -O,S-二甲基磷酰亚胺及其Ni( ) ,Cu( ) ,Zn( )配合物对水稻幼苗 SOD,POD的影响 .实验结果表明 FP-Ni( )配合物对水稻幼苗 SOD和 POD的影响最显著 。

冷锻炼对不同倍性西瓜幼苗SOD、POD活性及MDA含量的影响

通过对蜜枚和JM的不同倍性西瓜品种的幼苗进行4d、10℃的预冷处理,然后在5℃下低温胁迫8d,结果表明:JM4x和M3x的耐低温能力得到提高,超过2x.冷锻炼诱导多倍体西瓜SOD、POD活性大幅度提高,降低四倍体MDA的含量,增强四倍体西瓜的耐低温胁迫能力.

棉花不同耐高温品系的SOD、POD、CAT活性和MDA含量差异及其对盛花期高温胁迫的响应

分别以耐高温、中度敏感与敏感型3个棉花品系为材料,分析了它们在不同发育时期叶片和花药中SOD、POD、CAT保护酶活性和MDA含量的差异及在盛花期高温胁迫下的变化。3个品系间叶片保护酶活性在苗期和盛蕾期几乎相同,在盛花期和结铃盛期耐高温显著高于敏感类型,而耐高温棉花叶片MDA含量自盛蕾期起显著低于敏感类型。花药保护酶活性随生育进程而逐渐增加,耐高温棉花花药SOD和POD活性在花粉粒成熟期才显著高于敏感类型,而CAT活性和MDA含量在整个发育时期均分别显著高于和低于敏感类型材料。盛花期高温胁迫显著地抑制叶片和花药的保护酶活性,导致MDA含量极显著地增加,但耐高温棉花叶片和花药保护酶活性的降低和MDA含量的增加幅度明显少于敏感类型。

水分胁迫对2种生态型芦苇(Phragmites communis)的可溶性蛋白含量、SOD、POD、CAT活性的影响

研究利用 2种抗旱性迥异的芦苇为材料 ,用 PEG6 0 0 0进行水分胁迫处理 ,结果表明 ,抗旱性强的沙丘芦苇 (沙芦 )的可溶性蛋白含量明显低于沼泽芦苇 (水芦 ) ,约为水芦的 1 /5。但是 ,在受到 2 0 % PEG胁迫时 ,沙芦的可溶性蛋白含量有所上升 ,水芦的则稍微下降 ,在 3 0 %PEG胁迫时 ,水芦的可溶性蛋白含量显著下降 ,而沙芦则先升后降。沙芦的 3种自由基清除酶 (SOD、POD、CAT)的活性显著高于水芦。受到水分胁迫后 ,2种芦苇的 SOD、POD、CAT活性或升或降。但是 ,无论在 2 0 %还是 3 0 % PEG胁迫条件下 ,相对水芦而言 ,沙芦都保持较高的自由基清除酶活性 ,从而保证其较强的自由基清除能力 ,减轻自由基对植物细胞生物大分子如 DNA、蛋白质、脂肪酸的伤害 ,维持细胞正常的生命活动 。

芸芥自交亲和系与自交不亲和系SOD、POD和CAT酶活性

对芸芥(Eruca sativaM ill)自交亲和系(SC)与自交不亲和系(SI)柱头SOD、POD和CAT三种酶活性进行了测定。自交亲和系和自交不亲和系在授粉后都能引起SOD、POD和CAT三种保护性酶活性的变化。比较SC和SI的酶活性发现,在未授粉时二者SOD酶活性差异显著,而POD和CAT酶活性则无显著性差异;异花授粉后SC和SI的三种酶活性表现了相似的趋势,在各个时间段上无差异;自花授粉后自交亲和系的酶活性显著高于自交不亲和系的酶活性。结果表明,SOD、POD和CAT三种酶活性的变化与自交亲和系所具有的自交亲和基因的调控有关。

云南报春花SOD、POD酶量月际性变化与UV-B辐射关系的研究

利用低纬高原地区获得部分不同地区紫外辐射观测资料,研究不同地区紫外辐射月际性差异引起云南报春花SOD、POD酶量的差异变化,探讨在自然环境条件下,UV-B辐射对植物体内SOD、POD的影响。结果表明: (1)在低纬高原地区UV-B辐射强度变化具有特殊性和复杂性;(2)当报春花处于幼苗生长期(2月)时,UV-B辐射强度小,SOD、POD活性表现较弱;进入生长旺盛期和开花期(3月、4月),UV-B辐射增强,此时SOD、POD活性也随之增强;进入衰老期(5月),而UV-B继续增强,植物SOD、POD酶活性下降。

雄性不育烟草花蕾中SOD、POD和CAT活性研究

通过对4个烟草雄性不育系及其保持系不同大小花蕾的SOD、POD和CAT活性的测定,研究烟草雄性不育性与花蕾中SOD、POD和CAT活性的关系。结果表明:4个不育系的小、中、大花蕾SOD活性都比其相应的保持系更高;除MS云烟85的小花蕾POD活性低于其保持系外,各不育系不同大小花蕾的POD活性都比其相应的保持系高;4个不育系的小、中、大花蕾的CAT活性都不同程度地低于其保持系。

锌对水稻幼苗生长及体内SOD、POD活性的影响

研究了水稻幼苗期利用不同浓度锌处理对幼苗生长及体内SOD、POD活性的影响。结果表明:在水稻幼苗2叶1心期,喷施1.0mg/L的锌溶液能够促进幼苗的生长发育,苗高、根长、苗鲜重、根鲜重及根系活力均显著提高,分别比对照增加23.05%、10.74%、29.77%2、3.27%和89.97%;根内的SOD、POD活性比对照增加243.48%和43.60%,叶片中的SOD、POD活性分别比对照增加172.77%和75.35%。根据试验结果建议,在水稻幼苗期喷施锌溶液,浓度以1.0 mg/L为宜。

凡纳滨对虾不同组织内SOD、POD酶的细胞化学定位

运用电镜酶细胞化学技术对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内肝脏、肌肉、心脏、复眼和鳃等5种组织的SOD和POD酶的细胞化学定位进行了研究,并与感染病毒的凡纳滨对虾体内5种组织中SOD和POD的细胞化学定位进行比较。结果显示,在健康对虾体内,SOD酶阳性反应颗粒主要定位于肌肉、心脏、肝脏和鳃等组织细胞的线粒体膜、细胞质中,以及肝细胞的脂滴周围;POD酶主要定位于心脏、鳃和肝脏组织细胞的过氧化物酶体内,肝细胞中脂滴周围也有POD的阳性反应颗粒。感染病毒后,各组织细胞表现出明显的病理性结构变化,大量的髓样小体出现,脂滴数量明显减少。同时各组织中SOD和POD酶的细胞化学定位也发生了明显的变化,表现为心脏、鳃、肌肉组织细胞胞质中的SOD阳性颗粒消失,肝细胞中的SOD阳性颗粒明显减少,在心脏和鳃的线粒体基质内也出现SOD阳性颗粒;POD仍主要定位在过氧化物酶体中,但心脏中的过氧化物酶体解体而有许多呈阳性反应的小颗粒分布在细胞质中。结果表明SOD和POD在凡纳滨对虾防御氧的毒性损伤以及整个机体的免疫功能等方面起着重要的作用。

盐胁迫条件下γ-氨基丁酸对玉米幼苗SOD、POD及CAT活性的影响

逆境下植物体内积累氨基丁酸(GABA)。盐胁迫严重影响玉米种子的萌发,而加入外源GABA可明显提高玉米种子的萌发率。外源GABA能迅速提高SOD、POD、和CAT这三种酶的活性。鉴于超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶是植物抗氧化保护系统中重要的组成部分,推测,盐胁迫条件下,GABA可通过提高保护酶系统活性而缓解盐胁迫对植物的伤害。

干旱处理对烟草叶片SOD和POD活性的影响

通过对盆栽旺长期烟草(3个近等基因系,即转Mn-SOD基因叶绿体高表达品系、转Fe-SOD基因叶绿体高表达品系和非转基因品系;2个推广品种,即红花大金元和K326)给予多达10d的干旱处理和4d的复水,结果表明,过氧化物酶(peroxidase,POD)活性干旱胁迫下表现出升高的趋势;抗旱品种(系)的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性先迅速升高然后逐渐降低,而不抗旱品种(系)的则在干旱处理期间缓慢升高。

低温胁迫对晚熟桃枝条电导率、SOD及POD活性的影响

为探明低温胁迫条件下桃树枝条耐寒性生理指标的变化规律,以秋红蜜、秋红晚蜜、二十一世纪3个桃树品种的枝条为实验材料,对其在低温胁迫处理后的电导百分率、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的变化进行了测定。结果表明,3个桃树品种材料在受到低温胁迫时,秋红晚蜜的相对电导率变化不明显,秋红蜜次之,二十一世纪品种变化显著;3个桃树品种间的POD和SOD含量存在明显差异。

冬季低温对4种彩叶植物SOD、POD活性影响的研究

通过对4种彩叶植物枝条在冬季自然低温下SOD,POD活性变化规律研究来判断不同树种的抗寒能力,以期为彩叶树种引种应用提供理论依据。以4种彩叶植物休眠枝为材料,测定其休眠枝枝条在整个冬季SOD,POD的活性变化情况;结果表明,在整个越冬期间,各树种枝条内2种酶的活性均表现为先升高后降低的趋势,其中,各树种SOD活性的最高值为12—1月份,POD活性最高值为2月份,不同树种间相比较可以看出,在两项指标的最高值月份,紫叶矮樱SOD活性高于其他3个树种,POD活性却表现为最低,元宝枫的POD活性最高但是SOD活性最低,实验中同时发现低温下元宝枫SOD活性无明显变化但是POD活性变化剧烈,与初冬相比活性升高10.4倍;从试验结果可以看出,紫叶矮樱抗寒性最强,鸡爪槭最差,其他2种树种居中,紫叶矮樱与元宝枫保护酶的抗寒机理不同。

桃叶片POD、SOD、CAT活性与树体矮化和生长的关系

为探讨矮化桃树的酶学机制,笔者以普通型桃-春艳、短枝型桃-超红短枝和极矮化型桃-寿星桃叶片为试材,对其生长期中过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性与树体矮化和生长的关系进行了研究,以期为桃树矮化密植、丰产优质和优良短枝型品种的选育提供理论依据。结果表明,三种生长类型桃叶片内POD、SOD、CAT活性均达到了极显著水平,但季节性变化规律相似;酶活性的大小与桃树的矮化程度密切相关,即极矮化型桃的酶活性〉短枝型桃的〉普通型桃的,且POD的活性与树体生长势在三类型桃间均呈显著负相关;超红短枝叶片内SOD活性和寿星桃叶片内CAT活性与其对应的节间长度间的差异均达到了显著负相关水平。所以POD活性可以作为矮化品种的一个预选指标。

抗寒锻炼对假俭草SOD、POD活性及MDA含量的影响

选用4个居群的野生假俭草(Erem ochloa opiurodes)进行抗寒锻炼,测定SOD、POD活性和MDA含量的变化。结果表明,假俭草的SOD、POD活性升高,MDA含量降低;其中,经8d抗寒锻炼后,DJ01的SOD、POD活性最高,分别比对照提高了31.45%、36.82%,MDA含量最低,比对照降低了65.98%。