pEGFP-BLCAP真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建真核表达载体pEGFP-BLCAP并转染骨肉瘤细胞SOSP-M。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-M细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因的cDNA,测序正确后插入真核表达载体pEGFP-C2中,构建的重组质粒经脂质体介导转染SOSP-M细胞,经观察荧光蛋白表达和Western blot鉴定目的蛋白在转染后的SOSP-M细胞中的表达情况。结果:RT-PCR成功地扩增出一条约280bp的片段,经限制性内切酶分析和DNA序列测定证实目的基因cDNA已插入重组质粒;荧光显微镜下观察到转染后的SOSP-M细胞发出较强绿色荧光,Western blot证明BLCAP能以融合蛋白的形式在SOSP-M细胞中获得表达。结论:构建了真核表达载体pEGFP-BLCAP并成功表达目的蛋白。