miR-138-5p靶向调控SOX4对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-138-5p(miR-138-5p)通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡的机制。方法:分别利用miR-NC与miR-138-5p体外模拟物(mimics)转染骨肉瘤细胞系MG63,构建阴性对照与miR-138-5p上调表达模型;采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力和迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;通过双荧光素酶活检检测miR-138-5p与SOX4的相互作用关系;利用Real-time PCR(RT-PCR)法检测不同处理组中miR-138-5p与SOX4的mRNA水平表达变化;利用Western blot法检测不同处理组中SOX4及凋亡相关蛋白BAX与BCL2的表达变化。结果:利用miR-138-5p mimics转染MG63细胞后,细胞中miR-138-5p表达较对照组显著上调(t=8.661,P=0.001);miR-NC与miR-138-5p mimics分别转染细胞24 h、48 h以及72 h后,CCK8结果显示MG63细胞的增殖能力较对照组显著降低(24 h:t=4.145,P=0.0032;48 h:t=13.88,P<0.0001;72 h:t=14.78,P<0.0001);Transwell实验结果显示与miR-NC组相比,miR-138-5p mimics组细胞侵袭能力显著下降(t=6.573,P=0.0028),迁移水平大幅度降低(t=3.01,P=0.0395);流式细胞仪结果显示miR-138-5p mimics组MG63细胞的凋亡水平较miR-NC组显著升高(t=10.3,P=0.0005);RT-PCR和Western blot实验分别证实miR-138-5p转染后,骨肉瘤细胞中SOX4的mRNA和蛋白水平表达均受到明显抑制;而凋亡相关蛋白BAX表达升高,抗凋亡蛋白BCL2表达降低。结论:miR-138-5p通过靶向下调SOX4的表达参与抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡。

CircRHOT1调节miR-187-3p/SOX4轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:研究环状RNA ras同源物基因家族成员T1(CircRHOT1)调节miR-187-3p/性别决定区Y框蛋白4(SOX4)轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot检测体外培养的人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231中CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;将体外培养的MCF-7细胞随机分为对照组、CircRHOT1敲低(转染CircRHOT1 siRNA质粒)组、miR-187-3p mimics(转染miR-187-3p mimics)组、共转染阴性对照(转染空载质粒和miR-187-3p inhibitor阴性对照)组、CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor(转染CircRHOT1 siRNA质粒和miR-187-3p inhibitor)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;采用EdU染色和平板集落形成实验检测各组细胞增殖;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达比值(Bax/Bcl-2)。各组细胞与人外周血淋巴细胞共培养并分组转染后,采用流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例;采用MTT法检测人外周血淋巴细胞对各组MCF-7细胞的杀伤率。采用双荧光素酶报告实验检测MCF-7细胞CircRHOT1对miR-187-3p、miR-187-3p对SOX4的靶向调控。结果:与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,人乳腺癌MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231细胞CircRHOT1、SOX4蛋白与mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-187-3p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,CircRHOT1敲低组、miR-187-3p mimics组细胞SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率降低(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率升高(P<0.05)。与CircRHOT1敲低组相比,CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor组细胞CircRHOT1表达差异无统计学意义(P>0.05),SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率升高(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低CircRHOT1可通过上调miR-187-3p而降低SOX4表达,从而减弱乳腺癌细胞增殖活性,并促进其凋亡,还可抑制CD8^(+)T细胞活化并增强其癌细胞杀伤力,减弱乳腺癌细胞免疫逃逸。

转录因子SOX4对卵巢颗粒细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的通过构建稳定过表达SOX4的人卵巢颗粒细胞(KGN细胞系),探究SOX4对卵巢颗粒细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法利用同源重组法将SOX4(人)基因序列构建到线性化pLV-EF1a-GFP/Puro载体中建立重组慢病毒质粒pLV-EF1a-GFP/Puro-SOX4;将慢病毒表达载体感染人卵巢颗粒细胞(KGN细胞系),以感染pLV-EF1a-GFP/Puro-NC的KGN细胞作为LV-CON组,感染pLV-EF1a-GFP/Puro-SOX4的KGN细胞作为LV-SOX4组,转染后利用嘌呤霉素筛选出稳定表达SOX4的KGN细胞;RT-qPCR和Western blot法检测LV-CON组和LV-SOX4组KGN细胞中SOX4 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8实验检测LV-CON组和LV-SOX4组细胞增殖能力;细胞划痕实验检测LV-CON组和LV-SOX4组细胞迁移能力;流式细胞凋亡检测LV-CON组和LV-SOX4组凋亡细胞比例。结果pLV-EF1a-GFP/Puro-SOX4测序结果显示插入基因序列与SOX4的序列完全一致;LV-CON组包装的慢病毒滴度为7×108TU/ml,LV-SOX4组包装的慢病毒滴度为1×108TU/ml;荧光倒置显微镜下观察到重组质粒成功转染至KGN细胞,转染效率达90%以上;RT-qPCR和Western blot检测结果显示:LV-SOX4组KGN细胞中SOX4 mRNA和蛋白表达水平较LV-CON组均明显升高(t=3.10,P<0.05;t=14.20,P<0.05);CCK-8结果显示:LV-SOX4组细胞增殖能力较LV-CON组增强(24 h:t=45.92,P<0.01;72 h:t=25.60,P<0.01);细胞划痕实验结果提示:LV-SOX4组KGN细胞迁移能力较LV-CON组增强(t=7.65,P<0.01);流式细胞凋亡检测显示:LV-SOX4组细胞凋亡比例较LV-CON组减少(t=25.84,P<0.01)。结论成功构建SOX4过表达的人卵巢颗粒细胞(KGN细胞系),SOX4过表达可促进卵巢颗粒细胞增殖、迁移且抑制细胞凋亡。

miR-214/SOX4调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的探究miR-214是否通过靶向SOX4影响前列腺癌(PC)迁移与侵袭,为PC治疗提供潜在的治疗靶标。方法利用肿瘤基因组图谱数据库分析SOX4在癌及癌旁组织中的表达。用RT-qPCR和Western blotting方法检测了SOX4在前列腺癌细胞和正常前列腺细胞中的表达水平。用miR-214 mimics转染PC-3和DU145细胞,使miR-214过表达,并观察其对细胞功能的影响。结果PC组织和前列腺癌细胞系(PC3、DU145、22Rv1)中SOX4的表达水平上调,miR-214的表达下调。过表达的miR-214显著抑制癌细胞侵袭及迁移。结论miR-214通过负性调节SOX4的表达而发挥抑癌作用。SOX4可能是PC治疗的潜在靶点。

SOX4在下咽癌中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 :分析下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinomas,HSCC)组织中SRY相关HMGbox转录因子4(SRY-box transcription factor-4,SOX4)的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。观察siRNAs敲低FaDu人咽鳞癌细胞中SOX4表达对细胞增殖、迁移及裸鼠成瘤的影响。方法:(1)选取下咽癌石蜡切片标本76例,癌旁正常组织标本18例作为对照,采用免疫组化检测SOX4和Ki67的表达水平。(2)选取6对新鲜的下咽癌组织和相邻正常组织,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SOX4表达水平。(3)运用siRNAs敲低FaDu细胞中SOX4表达。(4)饥饿释放实验检测SOX4在增殖期FaDu细胞中的表达水平,CCK-8法检测FaDu细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期的分布,Transwell试验和划痕实验检测细胞迁移能力。(5)Western blot检测上皮间充质转化(epithelial mesendyinal transition,EMT)相关分子的表达。(6)裸鼠成瘤实验观察SOX4对肿瘤生长的影响。结果:(1)与癌旁正常组织相比,HSCC组织中SOX4表达明显升高,与肿瘤分化程度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移及Ki67表达相关(P<0.05)。(2)SOX4高表达患者生存期较短。(3)增殖期FaDu细胞SOX4和PCNA的表达同步明显增加。(4)SOX4-Si2处理后FaDu细胞中SOX4染色强度显著降低,细胞增殖能力明显下降,细胞停滞于G1期,S期细胞减少。(5)SOX4-Si2干扰后FaDu细胞划痕愈合能力明显下降,细胞迁移数减少,上皮表型标志物β-连环蛋白和E-钙粘蛋白表达显著增加,而间质表型标志物波形蛋白和N-钙粘蛋白表达显著降低。(6)裸鼠成瘤实验显示,SOX4-Si2干扰后裸鼠肿瘤生长受到显著抑制,Ki-67阳性率增高。结论:SOX4在HSCC中过表达,SOX4在体内外对下咽癌的进展和迁移起着重要作用,可作为下咽癌患者诊断和治疗的分子靶标。

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞,将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达;生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较,miR-34a mimic组细胞中miR-34a的表达升高,细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-34a inhibitor组细胞中miR-34a的表达降低,细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与NC mimic组比较,共转染miR-34a mimic和WT-SOX4的细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而共转染miR-34a mimic和MUT-SOX4的细胞荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。与miR-34a mimic+Vector组比较,miR-34a mimic+pcDNA-SOX4组Raji细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:miR-34a通过靶向SOX4调控RAS/MAPK信号通路从而抑制PCNSL细胞增殖,促进细胞凋亡。

SOX4基因及其抗肿瘤药物研究进展

SOX4作为一种重要的转录调节因子,不仅参与胚胎的多种发育过程,还参与了多种癌症的发生、侵袭、转移,并与癌症的进展及预后不良密切相关。因此以SOX4为靶点的药物治疗可能成为许多肿瘤的新疗法。本文对SOX4的结构、功能、信号通路,以及用于肿瘤治疗的SOX4药物进行综述,以期为SOX4的进一步研究及其相关药物的研发和临床应用提供参考。

miR-204通过靶向调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、侵袭的体外实验研究

目的:探讨miR-204对急性淋巴细胞白血病(ALL)CEM/C1细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与SOX4的靶向关系。方法:选取ALL细胞株CEM/C1,对CEM/C1细胞进行转染,分为NC组(无处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-204组(转染miR-204-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-SOX4组(转染si-SOX4)、miR-204+pcDNA组(转染miR-204-mimic+pcDNA)及miR-204+pcDNA-SOX4组(转染miR-204-mimic+pcDNA-SOX4)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-204表达水平,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞SOX4表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光素酶实验验证miR-204与SOX4的靶向关系。结果:转染细胞48 h和72 h时,miR-204组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、miR-NC组(P<0.05),凋亡率高于NC组、miR-NC组(P<0.05)。si-SOX4组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、si-NC组(P<0.05),凋亡率高于NC组、si-NC组(P<0.05)。miR-204+pcDNA-SOX4组细胞48 h、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量均明显高于miR-204+pcDNA组、miR-204组(P<0.05),凋亡率低于miR-204+pcDNA组、miR-204组(P<0.05)。与对照组相比,SOX4野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P<0.05),SOX4突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。结论:miR-204可负性调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、迁移和侵袭。

SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响

背景与目的肺癌是最严重的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌发病率在肺癌中居首位。部分患者对顺铂耐受是导致化疗失败的主要原因。SOX4是转录调节因子,在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用,通过调控β-catenin的表达对Wnt信号通路进行调控。本研究旨在探讨SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响。方法体外诱导法建立顺铂耐药的肺癌细胞株A549/DDP,CCK8法检测A549及A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。绘制A549与A549/DDP细胞生长曲线。Western blot检测耐药细胞株中SOX4的蛋白表达水平。CCK8法检测敲减SOX4后耐药细胞株A549/DDP对顺铂耐药性。实时定量PCR和免疫印迹法检测敲减SOX4后A549/DPP细胞中β-catenin和Survivin蛋白的表达。结果成功构建非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP,其耐药性是亲本细胞的13.7倍,差异有统计学意义(P<0.001)。生长曲线显示耐药细胞株与亲本细胞增殖速度没有统计学差异(P<0.05);与A549细胞相比,耐药细胞A549/DDP细胞中SOX4的表达显著增高(P<0.001)。敲减SOX4后,A549/DDP细胞的耐药性显著降低;敲减SOX4后,A549/DDP细胞中β-catenin和Survivin的m RNA和蛋白表达水平显著降低。结论 SOX4的表达水平影响非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的耐药性。

SOX4基因的表达与肝癌术后早期复发及其临床意义

目的探讨SOX4基因的表达与肝癌术后早期复发及其临床意义。方法应用免疫组化技术研究SOX4基因在30例术后早期复发肝癌、30例非术后早期复发肝癌和30例正常肝脏组织的表达。结果SOX4基因在肝癌中的表达高于正常肝组织(41.7%vs16.7%,P<0.05),SOX4基因在术后早期复发肝癌的表达高于非术后早期复发肝癌(56.7%vs26.7%,P<0.05),SOX4基因的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、乙肝表面抗原、Edmonson分级无关(P>0.05)。结论SOX4基因与肝癌的术后早期复发密切相关,SOX4基因高表达有可能促进了肝癌的早期复发,并可以作为肝癌判断预后的分子指标之一。

miRNA-363通过调控SOX4影响骨肉瘤细胞生长及凋亡

目的:探讨骨肉瘤组织中miRNA-363及SOX4的表达水平,以及miRNA-363对骨肉瘤细胞活力、细胞周期以及凋亡的影响及机制。方法:用real-time PCR法检测63例骨肉瘤患者肿瘤组织与癌旁组织中miRNA-363及SOX4的表达水平及相关性。用脂质体法将miRNA-363 mimics瞬时转染入MG-63人骨肉瘤细胞,检测细胞中miRNA-363及SOX4的表达水平;CCK-8实验检测各组细胞的活力;流式细胞术检测各组细胞的周期及凋亡率;检测转染SOX4 siRNA或质粒后miRNA-363的表达水平。结果:骨肉瘤组织miRNA-363表达明显低于瘤旁组织,SOX4的mRNA表达明显高于瘤旁组织,miRNA-363与SOX4的表达水平呈明显负相关。转染miRNA-363 mimics后MG-63细胞miRNA-363的表达水平明显上调,SOX4 mRNA及蛋白的表达水平明显下降;同时,细胞活力明显下降细胞周期阻滞在G_0/G_1期,凋亡率增高。改变SOX4表达后,miRNA-363的表达无明显变化,升高SOX4表达能够恢复miRNA-363抑制的细胞活力。结论:miRNA-363在骨肉瘤中呈低表达水平,过表达miRNA-363可能通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞的生长,并促进细胞凋亡。

卵巢癌SOX4介导TGF-β1诱导的上皮间质转化对侵袭转移能力的影响

目的探讨SOX4(SRY-related HMG-box4)在卵巢癌中的表达、调控及其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导卵巢癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响。方法通过对TCGA、GEO等数据库中卵巢癌样本表达谱数据进行分析,探讨SOX4在卵巢癌中的表达情况,及其与EMT相关标志物的相关性。利用shRNA技术敲降卵巢癌SKOV3细胞系中SOX4的表达;利用Western blotting和qRT-PCR技术检测SOX4敲降对上皮标志物ZO1及间质标志物Vimentin和Slug表达的影响;利用Transwell技术检测SOX4敲降对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;使用TGF-β1(10 ng/mL)处理SKOV3细胞72 h,然后通过Western blotting和qRT-PCR技术,检测TGF-β1对SOX4表达的调控情况,以及SOX4敲除对TGF-β1诱导EMT能力的影响。结果SOX4在卵巢癌中的表达显著上调,并与EMT间质标志物呈显著正相关;敲除SOX4可显著下调卵巢癌SKOV3细胞的EMT水平及其侵袭转移能力;TGF-β1可显著上调卵巢癌SKOV3细胞中SOX4的表达水平,而SOX4敲除可显著抑制TGF-β1诱导卵巢癌EMT的能力。结论SOX4在卵巢癌中表达上调,通过激活EMT促进其侵袭转移能力;并且,作为TGF-β1下游靶蛋白,SOX4介导了TGF-β1对卵巢癌EMT的诱导过程。因此,SOX4是一个干预卵巢癌转移的重要靶点。

女性肺癌患者中SOX4的表达及临床意义

全球女性肺癌死亡率从1930年到1997年上升了600％，1987年首次超过乳腺癌，成为美国女性恶性肿瘤的首位死因。2220年我国女性肺癌发病率也持续增长，严重危害女性健康。因此迫切需要探讨女性肺癌发生、发展及转移的分子机制，采取有效的干预措施。

去甲肾上腺素通过PI3K/Akt信号通路上调Sox4表达促进肝癌细胞增殖

目的探讨去甲肾上腺素对肝癌细胞自我更新能力的影响及其分子机制。方法实时荧光定量PCR和Western blot检测去甲肾上腺素对肝癌细胞(Huh7、PLC)中CD133表达水平的影响;肿瘤细胞球形成实验以及克隆形成实验检测去甲肾上腺素和哌唑嗪对肝癌细胞自我更新能力的作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测去甲肾上腺素(10μmol/L)和哌唑嗪(5μmol/L)对肝癌细胞中干性相关基因表达的影响,并检测相关的信号通路。结果去甲肾上腺素使Huh7和PLC肝癌细胞中的CD133表达升高;去甲肾上腺素处理Huh7和PLC肝癌细胞后的成球率较对照组明显上升,哌唑嗪处理后明显降低(P<0.05);在克隆形成实验中,去甲肾上腺素处理Huh7和PLC肝癌细胞的后,克隆形成率高于哌唑嗪组和对照组(P<0.05);与对照组和哌唑嗪组相比,去甲肾上腺素组中Sox4基因表达明显升高,同时p-Akt表达相较于哌唑嗪和对照组相比也明显上调(P<0.05)。结论去甲肾上腺素激动肝癌细胞中α肾上腺素能受体,通过激活PI3K/Akt信号通路上调肝癌细胞中Sox4基因表达,从而提高肝癌细胞自我更新的能力。

SOX4、BRMS-1等基因mRNA在乳腺癌中的表达的关系

目的比较癌组织与正常组织中SOX4、BRMS-1、CYTB、P53表达的差异,了解乳腺癌与表达的关系.方法通过SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中SOX4、BRMS-1的含量.结果 (1)SOX4和CYTB在乳腺癌组织中表达升高(P<0.05),而BRMS-1在乳腺癌组织中表达降低(P<0.05);(2)在癌组织中SOX4和BRMS-1的表达存在正相关关系(r=0.57,P<0.05);在正常组织中SOX4和CYTB的表达存在负相关关系(r=-0.64,P<0.05).结论SOX4在乳腺癌组织中处于高表达状态,并与BRMS-1和CYTB基因表达有关.

miR-369靶向调节SOX4表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:观察微小RNA(miRNA,miR)-369通过调节SOX4对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响。方法:miR-369体外模拟物(mimics)转染,构建miR-369上调表达模型,以转染阴性对照链为对照组,CCK-8法和流式细胞技术分别检测细胞增殖率和凋亡率变化; Real-time PCR法检测SOX4 mRNA表达水平;双荧光素酶活检检测证实miR-369与SOX4相互作用关系; Western-blot法检测不同组间SOX4及Bcl-2家族相关蛋白表达水平变化。结果:miR-369 mimics转染后,MG-63细胞中miR-369表达水平较对照组明显提高(P=0.009); miR-369 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组;流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率较对照组明显提高(P=0.031); Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-369 mimic转染后,SOX4在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制;而Bcl-2家族相关蛋白表达水平发生明显变化。结论:miR-369表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡,这些作用与靶向下调SOX4表达有关。

Sox4在女性肺癌细胞上皮-间质转化中的作用及其机制

目的探讨Sox4在女性肺癌细胞上皮-间质转化(EMT)中的作用及其机制。方法 76例行肺癌根治术的女性肺癌组织标本为观察组,49例癌旁肺组织标本为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)和Western印迹法检测Sox4的表达水平;采用RNA干扰技术下调Sox4表达,利用脂质体2000向肺癌细胞系XWLC-05转染Sox4-si RNA,同时以未转染XWLC-05为对照,采用q PCR和Western印迹方法检测两组Sox4表达水平及内镜下黏膜切除术(EMR)上皮标记β-catenin、E-cadherin,间质标记Fibronectin、vimentin、N-cadherin的表达情况,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氯唑溴盐(MTT)、Transwell及细胞划痕实验检测转染组与未转染组细胞增殖、侵袭、迁移能力。结果观察组Sox4 m RNA水平及蛋白水平表达均明显高于对照组(P<0.05);转染组Sox4 m RNA水平及蛋白水平表达均明显低于未转染组(P<0.05);q PCR结果显示,转染组β-catenin、E-cadherin水平明显高于未转染组(P<0.05),转染组Fibronectin、vimentin、N-cadherin水平明显低于未转染组(P<0.05),Western印迹结果与q PCR检测结果相一致;MTT实验结果显示,转染Sox4-si RNA细胞后,XWLC-05细胞增殖能力与未转染组无明显差异(P>0.05),Transwell实验结果显示,转染Sox4-si RNA细胞后,XWLC-05细胞侵袭、迁移能力较未转染组明显降低。结论 Sox4可能是通过下调β-catenin、E-cadherin表达及上调Fibronectin、vimentin、N-cadherin表达促进EMT发生,诱导人肺癌细胞发生侵袭转移。

SOX4在肿瘤中的研究进展

SOX4属于SOX转录因子家族,对胚胎发育过程中心脏的形成、T/B淋巴细胞的发育和分化、胰腺的发育、骨骼的发育等具有重要的作用。近年来,越来越多的研究表明SOX4在人类许多肿瘤中表达升高并且与肿瘤的发展密切相关。在不同类型肿瘤或肿瘤的不同阶段,SOX4通过参与肿瘤细胞的增殖、凋亡或分化的过程从而具有双重的作用:促癌作用和抑癌作用。产生这种差异的具体机制尚不清楚,因此深入研究SOX4基因与肿瘤的关系对肿瘤的治疗和预后判断具有重要意义。

miR-299-5p通过靶向SOX4调控胃癌细胞的增殖与凋亡

目的:探讨miR-299-5p对胃癌细胞增殖与凋亡的作用及相关机制。方法:采用RT-qPCR法检测胃癌细胞(SGC-7901、BGC-823)及正常胃黏膜上皮细胞(RGM-1)中miR-299-5p的表达差异。利用生物信息学方法预测miR-299-5p的靶基因,并使用荧光素酶报告实验验证miR-299-5p与SOX4的靶向关系。分别将miR-299-5p mimics和pcDNA3.1-SOX4转染至胃癌细胞中构建过表达模型,采用CCK-8法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡情况。Western blot检测靶基因SOX4及相关蛋白(Bcl-2、Bax)表达水平。结果:胃癌细胞中miR-299-5p呈低表达,SOX4呈过表达;miR-299-5p过表达可显著下调SOX4蛋白水平;miR-299-5p与SOX4的mRNA 3’UTR区序列配对互补,SOX4是miR-299-5p的一个潜在靶作用结合位点;miR-299-5p过表达显著降低SOX4野生型荧光素酶活性,抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时可下调SOX4、Bcl-2水平,上调Bax蛋白表达水平;上调SOX4可逆转miR-299-5p过表达对胃癌细胞的作用效果。结论:miR-299-5p在胃癌细胞中呈低表达,其通过下调SOX4表达抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。

miR-363-3p靶向调控SOX4抑制卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-363-3p靶向调控SOX4对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭影响。方法:RT-qPCR检测miR-363-3p和SOX4在正常卵巢IOSE80细胞及卵巢癌SKOV3细胞中的表达。在SKOV3细胞中转染miR-363-3p mimics和mimics NC,Transwell实验探究miR-363-3p对SKOV3细胞迁移和侵袭作用;采用RT-qPCR和Western blot分别检测SOX4、vimentin和E-cadherin mRNA和蛋白表达。双荧光素酶试验检测miR-363-3p和SOX4的靶向关系。结果:与人正常卵巢细胞相比,SKOV3细胞中miR-363-3p表达降低、SOX4表达升高(P<0.05)。在SKOV3细胞中过表达miR-363-3p可抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结果,SOX4和vimentin表达miR-363-3p mimics组低于mimics阴性对照组和空白对照组,E-cadherin表达高于mimics阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。miR-363-3p靶向调控SOX4的3'-UTR(P<0.05)。结论:miR-363-3p通过结合到SOX4的3'-UTR促进SOX4的降解,从而下调vimentin和上调E-cadherin的活性,抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭。