一株虾源假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)的分离鉴定及口服后对对虾体内弧菌的影响

为探讨对虾细菌性病原的微生物防控技术,采用牛津杯打孔法对分离自对虾育苗池的一株编号为2021041402-14的细菌(简称“02HN”)进行了抗菌测试,分析其对欧文氏弧菌(Vibrio owensii)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、坎贝氏弧菌(V.campbellii)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)和美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)等6株虾病原菌的抑菌效果及最低抑菌浓度,通过浸泡感染测试了菌株02HN对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的生物毒性,采用16S rRNA、gyrB-rpoD串联基因序列比对法及生理生化方法对该菌进行了鉴定,并将该菌添加到饲料中投喂对虾,评价该菌对对虾体内弧菌数量的影响。结果表明:菌株02HN对欧文氏弧菌、哈维氏弧菌、坎贝氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和美人鱼发光杆菌均具有抑菌效果,其最低抑菌浓度分别为2.32×10~4、2.32×10~3、2.32×10~6、2.32×10~6、2.32×10~3、2.32×10~6 CFU/mL;采用02HN浓度为1×10~7 CFU/mL以下的菌液浸泡凡纳滨对虾,生物毒性不明显;分子鉴定显示,该菌与杀鱼假交替单胞菌(Pseudoalteromonas piscicida)及金丽假交替单胞菌(P.flavipulchra)最为接近,为一株假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.);对虾摄食菌含量分别为1×10~5、1×10~7cells/g的饵料后,其存活及生长无显著性变化,但能显著降低对虾肝胰腺中的弧菌数量(P<0.05)。研究表明,菌株02HN在对虾养殖中具有开发应用潜能,本研究结果可为对虾细菌性病原的生物防控提供生物材料及技术思路。

<i>In vitro</i>antagonistic potential of <i>Streptomyces</i>sp. AM-S1 against plant and human pathogens

In the present investigation, a total number of 132 different actinomycetes strains were isolated from the humus soil samples. Out of 132 isolates, 52 showed inhibitory activity against the fungal pathogen Rhizoctonia solani. Among the antagonists, the isolate designated as AM-S1 exhibited maximum inhibitory activity against the test pathogen R. solani (41 mm). Further, the light microscopic observations of the co-cultures showed severe structural alterations in the mycelia of R. solani near the zone of inhibition. The isolate AM-S1 was identified as Streptomyces sp. by morphological and 16S rDNA sequence analysis. The color of the aerial and substrate mycelia produced by the Streptomyces sp. AM-S1 varied with different media. The isolate Streptomyces sp. AM-S1 also effectively inhibited the growth of various plant and human pathogens. Further works are needed on optimization of this strain’s antagonistic activity, isolation and characterization of the antimicrobial metabolite.

木霉(Trichoderma spp.)对三种引起大棚蔬菜病害病原菌的影响

通过木霉属(Trichoderma) 3菌株与双鸭山蔬菜大棚中的黄瓜枯萎病菌(FusariumoxysporumSchlecht.f.cucumerinum)、黄瓜果腐病菌(PhytophthoracapsiciLeonian)、菜豆叶枯病菌(Cladosporiumsp .)的对峙培养试验,结果表明:绿色木霉1(TrichodermaviridePers.exGray 1)可作为双鸭山蔬菜大棚中的黄瓜枯萎病、黄瓜果腐病、菜豆叶枯病3种病害的生物防治拮抗菌加以利用,该拮抗菌对菜豆叶枯病菌抑制效果最好;绿色木霉2 (Tricho dermaviride 2 )对黄瓜果腐病菌抑制效果最好;而哈茨木霉(TrichodermaharzianumRifai)对以上3种病原菌都有抑制效果,对菜豆叶枯病菌抑制效果最好。从试验结果还可看出,绿色木霉2对黄瓜枯萎病菌和菜豆叶枯病菌的生长有促进作用。

北京平谷区桃细菌性穿孔病病原菌鉴定及其拮抗菌筛选

为筛选对平谷区桃穿孔病有抑制作用的菌株,对桃穿孔病病原菌进行DNA测序鉴定后筛选拮抗菌。应用组织分离法从平谷区发病桃果实分离桃穿孔病原菌并进行致病性测定,根据菌株形态特征和16S rDNA序列相似率分析,初步确定病原菌为树生黄单胞菌桃李致病变种Xanthomomonas arboricola pv. pruni。采用平板对峙法筛选出病原菌的拮抗菌5株,其中菌株xj39抑菌效果最为显著,抑菌圈直径达到54.7 mm,菌株xj12次之,抑菌圈直径50.8 mm;经16S rDNA序列和rpoB基因序列比对及相似率分析,确定拮抗菌株xj39为大孢子链霉菌Streptomyces fimbriatus,菌株xj12为生二素链霉菌Streptomyces ambofaciens。田间防验结果表明,拮抗菌xj39发酵液对桃细菌性穿孔病防治效果为33%,与化学药剂春雷霉素处理无显著差异。

新型Streptomyces sp. N2代谢粗提物的抑菌活性及其水果保鲜初探

【目的】为明确新型广谱拮抗链霉菌N2的抗菌谱,开发安全高效的生物防腐剂。【方法】采用菌丝生长速率法和杯碟法,初步评价了N2粗提物对酵母菌、13种植物病原真菌、3种G+和3种G-细菌的抑菌效果。【结果】N2粗提物具有广谱、高效的拮抗特性,尤以对葡萄座腔菌、意大利青霉、烟草黑胫病菌、枯草芽孢杆菌(G+)和水稻黄单胞菌(G-)的抑制作用最为明显。通过建立毒力回归方程发现N2粗提物对辣椒疫病菌、葡萄座腔菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌、莴苣菌核病菌和稻瘟病菌的EC50分别为0.45、1.02、3.39、1.70、1.49、1.18、1.12和0.68μg·m L^(-1)。同时,离体水果的生物防效与保鲜试验的结果表明,N2粗提物中的有效抗菌物质能显著提高猕猴桃的相对防效,抑制水果表面有害病菌的生长,减缓水果的水分散失,提高水果的贮藏品质。【结论】综上可知,链霉菌N2拥有广谱拮抗特性,有望在食品保鲜领域发挥重要作用。

Paenibacillus bovis sp.nov.BD3526作为益生菌的潜力

对Paenibacillus bovis sp.nov.BD3526作为益生菌的潜力进行了体外活性初步研究。采用模拟胃液、肠液、不同浓度的胆盐环境,测定BD3526菌株在酸性及高胆盐环境的存活率,并测试BD3526对金黄色葡萄球菌、藤黄、枯草芽孢杆菌的抑制作用。结果表明,BD3526可以耐受pH值为2.0、3.0、4.0的人工胃液、pH8.0的模拟肠液以及0.1%、0.2%、0.3%的胆盐环境;对金黄色葡萄球菌、藤黄、枯草芽孢杆菌有显著的抑制能力。说明BD3526在人工消化液环境中具有良好的存活能力,不具有溶血作用;可引起敏感菌细胞渗漏,达到杀灭部分细菌,包括金色葡萄球菌的作用,因此,该菌具备作为益生菌应用的潜力。

珊瑚益生菌筛选及其益生特性分析

【目的】挖掘珊瑚潜在益生菌并明确其益生特性,为珊瑚益生菌资源库提供新材料,也为珊瑚疾病的微生物防治研究提供理论依据。【方法】分别以蛋白酶和β-葡萄糖苷酶活性筛选胞外酶产生菌株,以溶珊瑚弧菌为指示菌筛选具拮抗活性的菌株,以紫色杆菌为指示菌筛选有群体淬灭活性的菌株,通过16S rRNA测序对所获菌株进行种属鉴定,然后利用缸内添加试验验证益生菌的抗病功能,并通过全基因组分析预测益生菌的益生特性。【结果】通过原位模拟培养法,从7种珊瑚样品中共分离纯化获得271株细菌,其中,136株具有蛋白酶活性,87株具有β-葡萄糖苷酶活性,20株具有群体淬灭活性,28株对溶珊瑚弧菌有拮抗活性。既能产生胞外酶又具有拮抗活性或群体淬灭活性的菌属有芽孢杆菌属、假芽孢杆菌属、微小杆菌属、鲁杰氏菌属、鞘脂菌属、假交替单胞菌属、弧菌属、微球菌属、诺卡菌属和鞘氨醇单胞菌属。益生菌抗病作用缸内验证试验发现,芽孢杆菌GXU-Z9株能有效维持鹿角杯形珊瑚的光合效率和虫黄藻密度,保护珊瑚免受溶珊瑚弧菌引起的白化现象。基于全基因组数据分析发现,芽孢杆菌GXU-Z9株具有非常活跃的氨基酸代谢和运输能力,具备为珊瑚宿主提供必需和非必需氨基酸的潜力;通过产生对珊瑚有益的化合物(抗生素等)而抵御弧菌感染,并通过降解纤维类或蛋白类颗粒物质来补充珊瑚能量需求;同时,其全基因组中包含多种氨基酸生物合成相关基因及B族维生素合成相关基因,具有为珊瑚宿主提供氨基酸和维生素以获得能量的潜力。【结论】芽孢杆菌GXU-Z9株能有效维持鹿角杯形珊瑚的光合效率和虫黄藻密度,展现出良好的抗病功能;芽孢杆菌GXU-Z9株全基因组中含有编码几丁质酶和β-葡萄糖苷酶的相关基因,能大量合成珊瑚的必需氨基酸和维生素等营养物质,具有辅助珊瑚消化碳水化合物的酶类物质、提供氨基酸和维生素等益生特性。

6株拮抗酵母对梨毛霉菌(Mucor sp.)和青霉菌(Penicillium sp.)防效测定

采用稀释涂布平板法从拉萨市城关区的12种市售水果中分离酵母菌,并采用平板划线法对酵母菌菌株进行纯化;采用病斑法对皿内抑菌效果较强的6株拮抗酵母进行活体防效测定,并采用26S r DNA D1/D2区域序列测定法对酵母菌进行了分子鉴定。结果表明,193和233号两株酵母对梨毛霉菌(Mucor sp.)有明显的抑菌作用,其发酵液防效强于菌悬液;193号菌株对梨青霉菌(Penicillium sp.)有明显防效,其菌悬液抑菌作用大于发酵液。分子鉴定结果显示,6株酵母菌归为5个种,48号菌株为隐球酵母(Cryptococcus adeliensis),77号为葡萄有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum),193号为汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii),230和235号为禾本红酵母(Rhodotorula graminis),233号为胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。

芽孢杆菌B_(11)拮抗蛋白性质及其对西瓜枯萎病菌的作用机理

芽孢杆菌 (Bacillussp .)B11分离自土壤 ,其拮抗蛋白粗提液在温度 6 0、80℃各处理 30min后仍能保持抗菌活性 ,对紫外线、蛋白酶K、RNase处理稳定 ,对胃蛋白酶、胰蛋白酶、氯仿部分敏感 ,作用活性 pH (pH 4～ 10 )范围较宽。B11拮抗蛋白对西瓜枯萎病菌具有较强的拮抗作用 ,其抑菌机制主要使病菌菌丝畸形 ,细胞质浓缩 。

芽孢杆菌B96-II对芦笋茎枯病的防治及机制研究

试验表明,芽孢杆菌B96-II对芦笋茎枯病菌(Phomopsis asparagiSacc)菌丝生长的抑制率为89.62%,对孢子产生的抑制率为99.65%;对芦笋茎枯菌的田间防治效果为93.10%。研究表明,B96-II的拮抗蛋白对芦笋茎枯菌有明显的抑制活性;对芦笋的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)均有激活和诱导作用。B96-II处理后30 d,芦笋组织的SOD活力较对照提高254.98%,CAT活力提高81.84%,POD活性提高22.13%,PPO活力提高146.67%,PAL活力提高171.60%。

对虾养殖池中一株弧菌拮抗菌的分离鉴定

从对虾养殖池中分离出1株编号为2013082515（简称菌株15）的菌株,以鳗弧菌（Vibrio anguillarum）、哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）和副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）为指示菌,分析了菌株15对指示菌的抑菌效果及最低抑菌浓度,同时,分析了菌株15对其他7株弧菌的抑菌效果。结果显示,菌株15对3株指示菌均具有抑菌效果,对鳗弧菌、哈维氏弧菌及副溶血弧菌的最低抑菌浓度分别为2.50×10^4、2.50×10^5、2.50×10^5 CFU/ml;对其他弧菌也具有一定的抑菌效果。采用注射及浸泡感染方法分析了菌株15对对虾的生物安全性,结果显示,在高浓度时,菌株15对对虾具有潜在毒性。分别用细菌全细胞脂肪酸气相色谱法和16S rDNA序列分析比对法对该菌进行分类鉴定,表明菌株15为一株假交替单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）。

木霉拮抗黄瓜枯萎病菌菌株的筛选

通过对峙培养、拮抗作用、耐性的测定,筛选出对黄瓜枯萎菌(Fusarium oxysporumf. sp. cucum erinum)拮抗作用强的木霉菌株(Trichoderma spp.)有13株,其中T55的拮抗作用最强。该菌株对峙培养对黄瓜枯萎菌抑菌率为80.16%,拮抗作用测定其圆盘滤膜法抑菌率大于50%,其它方法的抑菌率低于30%。该菌在5、10、35℃,pH4、9、10的条件下生长良好。

组合芽孢杆菌抑菌物质特性及其抑菌效果研究

对组合拮抗芽孢杆菌Bacillus sp. CL-8抑菌物质的理化性质进行了研究。结果表明，主要抑菌物质为蛋白质类，热稳定性好，在40～70℃处理30 min后仍保持较高的抑菌活性；活性pH范围在4～10；能耐受乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、氯仿多种有机溶剂，且稳定性好；紫外线照射不影响其抑菌活性；对蛋白酶K作用不敏感；粗蛋白能有效抑制Fusarium oxysporumf. sp. lycopersici、Rhizoctonia solani Kuhn、Phytophthora capsici、Sclerotinia sclerotiorum、Acidovorax avenaesub sp. citrulli和Alternaria solani Sor-auer等病原菌；组合Bacillus sp. CL-8产生的挥发性物质对立枯丝核菌也有一定的抑制作用。

松树两种病原菌拮抗微生物的筛选

采用组织分离法从健康的和感染松枯梢病的松树针叶上分离了叶栖微生物1 862株。选取有代表性的菌株通过室内平皿对峙培养,初步筛选出对松枯梢病菌和松赤枯病菌具有较好生防潜力的菌株12株。其中,拮抗细菌菌株6株、酵母菌3株、丝状真菌木霉(Trichoderma sp.)3株,拮抗效果由强到弱依次为细菌、木霉、酵母菌,细菌无菌滤液的拮抗效果明显好于菌体本身。拮抗菌的筛选以相对抑菌效果为准,同时应考虑被抑制率和菌种本身具有的致病性。

拮抗菌B96-Ⅱ对芦笋枯萎菌的抑菌作用

为明确拮抗菌B96-Ⅱ对芦笋枯萎菌的抑制效果并探明其抑菌特性及方式,对经B96-Ⅱ处理后芦笋枯萎菌的生长速率、液体电解质、电导率及菌丝重量等进行了测定研究.结果表明,在107～108CFU/mL时,B96-Ⅱ对芦笋枯萎菌均有显著的抑制效果.连续3wk室内观察发现,B96-Ⅱ对芦笋枯萎菌丝有持续的抑制作用,与对照比较抑制率为94.07%～88.98%.田间防治效果为93.40%,而农药多菌灵处理的防治效果仅为65.12%.拮抗菌B96-Ⅱ对芦笋枯萎菌的抑制方式主要为:(1)对孢子形成的抑制作用;(2)对孢子的溶解作用;(3)对菌丝生长的抑制作用;(4)对菌丝的致畸作用;(5)对菌体细胞的破损作用.B96-Ⅱ处理后36h,溶液总溶解性固体和电导率增高,而菌丝重量下降.

拮抗细菌bio-d5在香蕉根部定殖力的测定

将3株香蕉枯萎病拮抗细菌bio-d4、bio-d5和bio-B分别涂布于含有不同浓度的利福平和青霉素的培养基上,筛选出可作为抗药性标记的拮抗细菌bio-d5和bio-B。将抗药性标记的拮抗细菌bio-d5接种于香蕉植株根部,1 d后再接种香蕉枯萎病菌,在不同时间测定拮抗细菌在根际、根表和根内的定殖情况。结果显示,将拮抗细菌接种香蕉根部10 d后,在植株根际、根表存在少量拮抗细菌,在根内尚未发现拮抗细菌;接种后20 d,在植株根际、根表定殖的拮抗细菌增多,根内也定殖了少量的拮抗细菌;在接种后30 d,于根表、根际和根内定殖的拮抗细菌量达到最大;在接种后40 d,于植株根际、根表和根内定殖的拮抗细菌量稍有下降。

香蕉枯萎病拮抗菌筛选试验

将从香蕉土壤中分离出的7个不同性状的芽孢杆菌菌株以及荧光假单孢菌、枯草芽孢杆菌、细黄链霉菌等分别用于测试对香蕉枯萎病生理小种4号的拮抗作用。结果表明,10个菌株中荧光假单孢菌表现出对香蕉枯萎病生理小种4号菌丝生长有良好、稳定的抑制作用;荧光假单孢菌和XP菌株混合后,其抑菌作用得到加强,抑菌效果最好。

不同发酵条件对苹果轮纹病拮抗细菌生长的影响

对1株苹果轮纹病细菌No.1菌株的发酵条件进行了探索,确定了其最佳培养基组成及培养条件。单因素发酵试验和正交试验结果表明,在含酵母浸膏5g、蔗糖20g、蛋白胨10g的1000mL液体培养基中,菌体生长量最大;细菌生长所需的最佳碳源为淀粉,最佳氮源为酵母浸膏和蛋白胨;当温度为28℃,pH7.0,在250mL三角瓶中装40mL液体培养基,接种量体积分数为5%,培养时间96h时,菌体生长量最大;在酸性条件下(pH4),细菌几乎不生长。

小枣黑疔病拮抗放线菌的筛选与发酵优化

【目的】筛选蒙自小枣黑疔病链格孢拮抗放线菌,并优化发酵条件。【方法】以小枣黑疔病链格孢为指示菌,以肾茶26株、臭灵丹17株内生放线菌和大庆油田12株土壤放线菌作为供试菌,采用滤纸片法筛选高拮抗放线菌,进而通过单因子试验优化发酵条件。【结果】筛选到一株分离自肾茶根部、抑菌带宽达13.6 mm的拮抗菌株BEG-46,其最佳培养基组成和最佳培养条件为1 000 mL培养基中含葡萄糖2 g、酵母粉20 g,蛋白胨2 g,NaCl 4 g,CaCO_34 g,初始pH值为自然,发酵温度28℃,发酵周期为7 d;优化后BEG-46发酵液抑菌活性提高了118.3%。【结论】拮抗放线菌BEG-46的发酵液抑菌活性在优化条件下显著提升。

抗香蕉枯萎病菌拮抗菌的鉴定及其定殖

通过逐步提高药物浓度方法，获得了抗利福平400μg／ml、对香蕉枯萎病菌拮抗活性稳定的T2WF和W10标记菌株。初步确定两菌株为芽孢杆菌属细菌。采用灌根接种法，在香蕉苗根际土和香蕉苗体内定殖结果表明，拮抗菌液接种浓度为5×10^4cfu／ml，两菌株均可从香蕉根际土和香蕉体内分离到，并在香蕉体内定殖和传导。在香蕉根际土、根部、球茎和假茎中，T2WF标记菌的菌量高峰分别出现在接种后5、5、11和3d，分别为707、437、273、117cfu／mg；而W10标记菌的菌量高峰分别出现在接种后5、3、5和5d，分别为784、260、253、110cfu／mg。两菌株在香蕉根际土和香蕉体内1～15d的消长动态均有一个共同的“由升到降”趋势。从数量和数量变动幅度上看，香蕉根部的菌量明显高于茎部的菌量。